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El control de temperatura constituye un parámetro importante en muchas aplicaciones de espectroscopia ultravioleta-visible (UV/VIS), en especial para las muestras orgánicas sensibles a la temperatura. En esta guía se describe por qué se trata de un factor tan importante al mismo tiempo que se ofrecen ejemplos de las aplicaciones más usadas, como la actividad de lipasa, la desnaturalización de proteínas, el punto de fusión del ADN y la cinética de Michaelis-Menten de la beta-galactosidasa.
En la guía también se proporciona información detallada sobre las soluciones de termostato disponibles para la gama de espectrómetros UV/VIS Excellence de METTLER TOLEDO:
- CuveT: control de temperatura de muestra individual
- CuvetteChanger: control de temperatura para varias muestras
1. Resumen ejecutivo
En esta guía se describe la importancia de una medición exacta de la temperatura en la espectroscopia UV/VIS con ejemplos de las aplicaciones más usadas en las ciencias de la vida. Además, se ofrecen trucos y consejos prácticos para las mediciones de UV/VIS precisas a temperaturas elevadas con los accesorios CuveT y CuvetteChanger de la gama UV/VIS Excellence de METTLER TOLEDO.
2. Introducción
La regulación de la temperatura en la espectroscopia UV/VIS, por lo general, significa establecer condiciones de temperatura definidas a) antes, b) durante o c) después de la medición espectroscópica, como se muestra a continuación:
a) Puede resultar necesario mantener las muestras o los analitos a una temperatura exacta para retrasar la descomposición o proporcionar las condiciones ideales para una reacción de precursores requerida para una reacción (química) posterior, que luego se analiza con un espectroscopio a la temperatura específica.
b) Establecer condiciones de temperatura, que sean constantes o cambiantes según un protocolo de rampa de temperatura definido. Tales condiciones catalizan las reacciones químicas, que se tienen que supervisar con espectroscopio.
c) Restablecer las condiciones de temperatura previas o diferentes para mediciones espectroscópicas posteriores con el fin de supervisar las reacciones (químicas) reversibles.
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Obtener más información en la guía Thermostat UV/VIS Analysis Right (Análisis correcto de la unidad de regulación de temperatura UV/VIS)
3. Ejemplos de aplicación de espectroscopia UV/VIS que dependen de la temperatura
3.1 Determinación de la actividad de lipasa
La determinación de la actividad de lipasa sirve como ejemplo en el que se requieren temperaturas elevadas por encima de las condiciones ambientales para establecer las condiciones ideales para una reacción química catalizada por enzimas que se debe supervisar con espectrómetro.
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3.2 Desnaturalización de proteínas inducida por la temperatura
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3.3 La cinética de Michaelis-Menten de la beta-galactosidasa
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3.4 Temperatura de fusión del ADN
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Obtener más información en la guía Thermostat UV/VIS Analysis Right (Análisis correcto de la unidad de regulación de temperatura UV/VIS)
4. CuveT: unidad de control termostático basada en la tecnología Peltier de METTLER TOLEDO
CuveT es un accesorio de termostato de cubeta individual de tecnología termoeléctrica (basado en Peltier) que controla de forma eficaz la temperatura que varía de 4 a 95 C en aplicaciones de espectroscopia UV/VIS. Este sistema de control termostático se puede conectar a los espectrofotómetros de la gama Excellence UV7, UV5Bio y UV5 UV/VIS de METTLER TOLEDO. La unidad se coloca encima del espectrofotómetro y no se requieren herramientas para la instalación.
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Obtener más información en la guía Thermostat UV/VIS Analysis Right (Análisis correcto de la unidad de regulación de temperatura UV/VIS)
5. Trucos y consejos prácticos para llevar a cabo mediciones con control termostático con CuveT
En este capítulo se ofrecen trucos y consejos prácticos para realizar mediciones periódicas de espectroscopia UV/VIS con control termostático con CuveT basado en la sección de preguntas frecuentes.
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Obtener más información en la guía Thermostat UV/VIS Analysis Right (Análisis correcto de la unidad de regulación de temperatura UV/VIS)
6. Mediciones con CuvetteChanger de METTLER TOLEDO
CuvetteChanger de METTLER TOLEDO permite realizar mediciones automáticas eficaces de series de hasta ocho cubetas para mediciones con sustracción de blanco o para aplicaciones cinéticas complejas. Con el uso de un termostato externo es posible realizar muestras de termostatos en cubetas con una temperatura que varía de 10 a 80 C.
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Obtener más información en la guía Thermostat UV/VIS Analysis Right (Análisis correcto de la unidad de regulación de temperatura UV/VIS)
7. Referencias
[1] www.mt.com/uv-vis
[2] www.mt.com/cuvet-peltier-uvvis
[3] Determination of Lipase Activity, Method PNAB-LIP39, Biocon Española S.A.
[4] Journal of Chemical Education, marzo de 2000, DOI: 10.1021/ed077p 380
[5] 1. Enzyme Handbook, II, Barman, T. E., Springer- Verlag (Berlin-Heidelberg: 1969), p. 581.
