UV VIS-kalibrering

UV/VIS Excellence-spektrofotometre testes iht. de procedurer, der er defineret i United States Pharmacopeia (USP) 43 – NF 38 og den Europæiske Farmakopé (Ph. Eur.) 10. Testene omfatter følgende parametre:

• Bølgelængdenøjagtighed
• Fotometrisk nøjagtighed
• Fotometrisk repeterbarhed
• Fotometrisk linearitet*
• Falsk lys
• Opløsning

Derudover testes følgende parametre, som ikke er obligatoriske iht. hverken USP eller Ph. Eur.:

• Bølgelængderepeterbarhed
• Fotometrisk støj
• Baseline-fladhed
• Fotometrisk drift

Testene er så omfattende, at de sikrer, at alle aspekter af spektrofotometrenes ydeevne vurderes. Vores UV7 Excellence-spektrofotometre overholder de strenge krav, der beskrives i nærmere detaljer herunder.

*Den fotometriske linearitet er ikke længere eksplicit nævnt i 43. udgave. Den fotometriske nøjagtighed skal testes over det tilsigtede driftsområde. Derfor anbefaler METTLER TOLEDO stadig testen for fotometrisk linearitet.

Bølgelængdenøjagtigheden vurderer instrumentets evne til at gengive bølgelængder nøjagtigt. Målingen af bølgelængdenøjagtigheden gør det muligt at bestemme, om der er sket forskydninger eller fejljusteringer af bølgelængdeakserne.

Egnede referencematerialer til bestemmelse af bølgelængdenøjagtighed bør producere smalle og veldefinerede toppe. En holmiumoxidopløsning anvendes ofte til dette formål.

USP og Ph. Eur. angiver forskellige godkendelseskriterier afhængigt af det anvendte referencemateriale og bølgelængdespektrummet. For flydende referencematerialer gælder følgende kriterier:

USP: ±1 nm under 400 nm, ±2 nm over 400 nm
Ph. Eur.: ±1 nm under 400 nm, ±3 nm over 400 nm

Iht. USP og Ph. Eur. er der ingen krav om bølgelængdepræcision eller -repeterbarhed for array-baserede spektrofotometre. Eftersom array-baserede instrumenter ikke indeholder bevægelige dele, kan der ikke opstå justeringsfejl mellem målinger.

Fotometrisk nøjagtighed er udtryk for instrumentets evne til korrekt at måle absorbans og levere absorbansværdier så tæt på den sande værdi som muligt.

Fotometrisk nøjagtighed kan bestemmes ved at måle faste eller flydende filtre, hvor koncentration og absorbansværdier er kendt, og sammenligne den målte absorbans med referenceværdier for absorbans.

En kaliumdikromatopløsning (PDC) på 60 mg/l anvendes for det ultraviolette spektrum, mens et neutral densitet-filter (ND) på 0,5 A sørger for det synlige spektrum. Godkendelseskriterierne er de samme for begge farmakopéer og afhænger af referencematerialets absorbansniveau.

PDC: ±0,010 A under 1,0 A, ±1,0 %  (0.010*A) over 1,0 A
ND: ±0,008 A under 1,0 A, ±0,8 % (0.008*A) over 1,0 A

Iht. USP og Ph. Eur. er der ingen krav om bølgelængdepræcision eller -repeterbarhed for array-baserede spektrofotometre. Eftersom array-baserede instrumenter ikke indeholder bevægelige dele, kan der ikke opstå justeringsfejl mellem målinger.

Fotometrisk repeterbarhed, som også kaldes fotometrisk præcision i USP, definerer et spektrofotometers evne til at levere absorbansværdier fra flere målinger på en pålidelig og repeterbar måde.

Der anvendes samme referencematerialer som til bestemmelse af fotometrisk nøjagtighed. Filtrene måles seks gange, og standardafvigelsen for alle målinger udregnes for at bedømme repeterbarheden.

Standardafvigelsen må ikke overstige 5 mA under 1 A eller 0,5 % over 1 A uanset det anvendte referencemateriale eller bølgelængdespektrummet.

Bemærk: Fotometrisk repeterbarhed er ikke et krav iht. Ph. Eur.

Fotometrisk linearitet er et mål for lineariteten af de målte værdier (f.eks. absorbans) som funktion af voksende koncentration. Det er særlig vigtigt ved kvantitative anvendelser.

Fotometrisk linearitet kan bestemmes med de samme procedurer og filtre, der anvendes til bestemmelse af fotometrisk nøjagtighed, men der anvendes tre koncentrationer/forskellige filtre, der dækker intervallet fra 0 A til 2 A.

USP og Ph. Eur. angiver forskellige godkendelseskriterier for fotometrisk linearitet:

Ph. Eur.: Korrelationskoefficienten R2 skal overstige 0,999.
USP: De målte værdier for alle koncentrationer/filtre skal leve op til de fotometriske nøjagtighedskriterier.

Falsk lys er defineret som lys, der når frem til detektoren, men som ikke er en del af analysen. Det forårsager en bias ved den pågældende bølgelængde, men stammer ikke fra et bidrag fra den målte prøve. Derfor ændres prøvens absorbans af falsk lys, og prøveresultaterne indeholder en systematisk fejl.

Falsk lys bestemmes ved at måle et spærrefilter (en vandig kaliumkloridopløsning) med både specifik bølgelængde-metoden (SWM) og opløsningsfilterforhold-metoden (SFRM).

Godkendelseskriterierne iht. USP og Ph. Eur. for KCl er som følger:

SWM: Amax ≥ 2,0 A
SFRM: Amax ≥ 0,7 A

Opløsningen definerer et uv vis-spektrofotometers opløsningsevne og evne til at opløse tilstødende strukturer i et spektrum.

Opløsningen bestemmes ved at måle en opløsning af toluen i n-hexan. Absorptionsminimum og -maksimum for en skarp og velopløst top anvendes til vurdering af opløsningen.

Iht. USP skal forholdet mellem minimum- og maksimumabsorbans ved bølgelængderne 267 og 269 nm overstige 1,3 for at sikre tilstrækkelig opløsning, mens godkendelseskriterierne i Ph. Eur. fremgår af den enkelte monograf.

I modsætning til uv vis-scanningsspektrofotometre har array-baserede instrumenter ingen fysisk spalte, som mekanisk definerer instrumentets spektralbåndbredde (SBW). Den tilsvarende SBW for et array-instrument kan udregnes ud fra instrumentets opløsning.
UV7 Excellence-spektrofotometerets opløsning er eksempelvis ≥ 1,9, hvilket svarer til en SBW på ≤ 1,0 nm.

De ovenfor definerede tests kan udføres enten manuelt eller automatisk, men manuelle metoder medfører en iboende risiko for reduceret nøjagtighed. Manuelle arbejdsgange er tidskrævende og tilbøjelige til at forårsage fejl. Automatisk ydelsesverificering har følgende fordele:

• Hurtigere resultater med sporbar dokumentation og validering af resultater.
• Fejl i udførelse af arbejdsgange og transskribering af data kan undgås, intet behov for at gentage tests.
• Efterlevelse af dataintegritetsstandarder. Det er en væsentlig fordel i forhold til datastyring i overensstemmelse med FDA-krav.
• Hurtigt afkast på investeringen takket være forbedret produktivitet og sikkerhed.

Efterlevelse af myndighedskrav er et væsentligt mål for alle producenter af lægemidler og deres leverandører. Iht. GMP skal produktionsprocesserne og analysemetoderne valideres, samtidig med at det udstyr, der bruges til produktion og kvalitetskontrol, skal kvalificeres.

For at kunne hjælpe kunder med at leve op til dette efterlevelseskrav tilbyder METTLER TOLEDO EQPac til Excellence-uv/vis-spektrofotometre. Vores EQPac er en serviceløsning specifikt udviklet til at håndtere bekymringer om efterlevelse i vore dages krævende lovgivningsmiljø. Den består af en fuldt dokumenteret, professionel installations- og kvalificeringsservice, der ydes på produktionsstedet, og som sikrer efterlevelse af myndighedskrav og pålidelig drift.

Få mere at vide om vores udstyrskvalificeringsservice og vores kalibreringsservice til uv/vis-spektrofotometre.