Pipettieren mit guter Pipettierpraxis: Bessere Ergebnisse durch Schulung und Support

Die meisten Life-Science-Anwendungen umfassen kritische Liquid-Handling-Schritte, bei denen das pipettierte Volumen das Ergebnis direkt beeinflusst. Wenn das Pipettieren nicht konsistent und genau ist, können Zeit, Geld und Material verschwendet werden. Präzises Pipettieren bildet die Grundlage für reproduzierbares Arbeiten, das für die Generierung aussagekräftiger Daten unerlässlich ist.

Der erste Schritt zur Verbesserung der Pipettiergenauigkeit besteht darin, den richtigen Pipettentyp und den richtigen Volumenbereich auszuwählen. Wählen Sie für die Größe die Pipette mit dem geringsten Volumen, die für das zu pipettierende Volumen geeignet ist. Wenn Sie beispielsweise 2 μl pipettieren und eine 5-μl-Pipette und eine 20-μl-Pipette haben, erzielen Sie mit der 5-μl-Pipette eine bessere Genauigkeit. 

Sehen Sie sich dieses Whitepaper zur Pipettenauswahl an, um zu verstehen, welche Pipette für die Flüssigkeit und andere Faktoren geeignet ist, die für Ihre Situation einzigartig sind: Auswahl der richtigen Pipette

Sobald Sie das richtige Instrument haben, setzen Sie Ihre gute Pipettiertechnik in die Praxis um. Richten Sie einen routinemäßigen Prüfplan ein, um das Vertrauen in Ihre Ergebnisse im Laufe der Zeit zu maximieren, und stellen Sie wie bei jedem Präzisionsinstrument sicher, dass Sie ein regelmäßiges, fachkundiges Service- und Kalibrierungsprogramm einführen.

Der einfachste Weg, um die Genauigkeit einer Pipette schnell zu testen, ist der Rainin SmartCheck. Erfahren Sie mehr unter mt.com/SmartCheck 

Bei der Auswahl der richtigen Pipette müssen Sie Ihre Anforderungen bewerten. Erstens, welche Art von Proben pipettieren Sie? Sind sie wässrig? Oder sind sie viskos, flüchtig, schäumend, korrosiv oder gefährlich? Für wässrige und nahezu wässrige Flüssigkeiten sind die gebräuchlichsten Luftverdrängungspipetten (auch "Luftkissen"-Pipetten genannt) eine gute Wahl. Für viskose, flüchtige und andere ungewöhnliche Flüssigkeitstypen wäre eine Direktverdrängerpipette sowohl aus Gründen der Genauigkeit als auch der Sicherheit die bessere Wahl. 

Welches Volumen werden Sie pipettieren? Wie viele Proben müssen Sie von einem Gefäß in ein anderes umfüllen? Sehen Sie sich dieses Whitepaper zur Pipettenauswahl an, um zu verstehen, welche Pipette je nach Flüssigkeit und anderen Faktoren, die für Ihre Situation einzigartig sind, am besten funktioniert.

Das Pipettieren kleinstmöglicher Volumina erfordert spezielle Instrumente und Techniken. Eine Repeater-Pipette ist möglicherweise die beste Wahl, um Volumina bis zu 100 nL zu wiederholen und zu dispensieren. Eine weitere Pipette kann auch für nur wenige Dosen verwendet werden. Stellen Sie sicher, dass Sie die kleinste Pipette verwenden, die das Volumen aufnimmt, das Sie pipettieren möchten. 

Bei sehr geringen Volumina hat die Pipettiertechnik einen proportional größeren Einfluss auf die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit. Die Eintauchtiefe, der Pipettierwinkel und die Aspirationsrate sind wichtig zu kontrollieren. Das Pipettiertechniken Poster von Rainin kann helfen.

Rainin NanoRep gibt Aliquote bis zu 100 nL wiederholt ab. Hier erfahren Sie mehr: mt.com/NanoRep

Der wichtigste Faktor für präzises, reproduzierbares Mehrkanalpipettieren ist die Integrität der Dichtung für jeden Kanal der Pipette. Das bedeutet, dass jede Spitze perfekt auf jede Welle passt, ohne dass Luft austritt. Verschiedene Hersteller erreichen dies auf unterschiedliche Weise, mit unterschiedlicher Ergonomie und Dichtungskonsistenz. Die LTS LiteTouch System-Pipettenspitzen von Rainin erfordern den geringsten Kraftaufwand zum Laden und Auswerfen aus dem Mehrkanal und dichten jedes Mal gleichmäßig ab.

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Halten Sie eine Pipette beim Aspirieren so nah wie möglich an der Vertikalen und vermeiden Sie einen Winkel von mehr als 20° von der Y-Achse. Wenn Sie beim Dosieren die Wand des Zielgefäßes berühren, um die gesamte Flüssigkeit vollständig aus der Spitze zu ziehen, ist es in Ordnung, den 20°-Winkel zu überschreiten.

Das Vorwärtspipettieren ist die Standard-Pipettiertechnik und die beste Wahl für wässrige Proben. Bei viskosen und flüchtigen Proben bietet das Rückwärtspipettieren eine bessere Genauigkeit.

Um die Pipette vorwärts zu schieben, drücken Sie den Kolben bis zum ersten Anschlag nach unten, während Sie die Pipette außerhalb der Flüssigkeit halten. Tauchen Sie dann die Spitze 2-10 mm tief in die Flüssigkeit ein, mit der Sie arbeiten – nicht tiefer. Lassen Sie den Kolben langsam bis zur vollen Ausdehnung los, um das gesamte Flüssigkeitsvolumen anzusaugen. Um in Ihr Zielgefäß zu dosieren, bewegen Sie die Pipette in das Gefäß und drücken Sie dann den Kolben gleichmäßig durch den ersten Anschlag bis zum zweiten Anschlag – so weit wie der Kolben reicht. Wenn der Kolben vollständig gedrückt ist, ziehen Sie die Spitze der Pipette leicht an der Wand des Gefäßes nach oben, um sie "abzusetzen". Dies hilft, das volle Flüssigkeitsvolumen vollständig abzugeben. Lassen Sie den Kolben los, werfen Sie die Pipettenspitze aus, setzen Sie eine neue Pipettenspitze ein und wiederholen Sie den Vorgang.

Um die Pipette umzukehren, schieben Sie den Kolben ganz nach unten durch den ersten Anschlag bis zum zweiten Anschlag – so weit der Kolben reicht. Tauchen Sie dann die Spitze in Flüssigkeit und lassen Sie den Kolben langsam und gleichmäßig los, um ihn anzusaugen. Bewegen Sie sich zum Aufnahmegefäß und drücken Sie den Kolben NUR BIS ZUM ERSTEN ANSCHLAG, um das richtige Volumen abzugeben. In der Pipettenspitze verbleibt ein kleines Restvolumen. Bewegen Sie die Pipette über ein Discard-Dispensiergefäß und drücken Sie den Kolben den Rest des Weges nach unten bis zum zweiten Anschlag, der auch als "Blowout"-Anschlag bezeichnet wird, um die restliche Flüssigkeit freizusetzen. 

Lassen Sie den Kolben los, werfen Sie die Pipettenspitze aus, setzen Sie eine neue Pipettenspitze ein und wiederholen Sie den Vorgang.

Eine Luftverdrängungspipette kann zum Pipettieren von leicht viskosen Flüssigkeiten, einschließlich Blut, verwendet werden. Um maximale Genauigkeit zu erreichen, verwenden Sie die oben beschriebene Reverse-Pipettiertechnik. Bei viskoseren Flüssigkeiten, wie z. B. 85 % Glycerin oder Triton X-100, bietet eine Verdrängerpipette die beste Genauigkeit und Konsistenz.

Leicht flüchtige Flüssigkeiten wie Ethanol können mit einer Luftverdrängungspipette unter Verwendung der oben erwähnten Reverse-Pipettiertechnik pipettiert werden. Verdrängerpipetten sind jedoch die bessere Wahl für flüchtige Flüssigkeiten. 

Wenn Sie eine Luftverdrängerpipette verwenden, spülen Sie die Pipettenspitze mindestens fünfmal vor dem Pipettieren des Volumens vor (aspirieren und dispensieren). Dadurch wird die Luft in der Pipette ausgeglichen und die Verdampfungsrate der Flüssigkeit verlangsamt. Die schnelle Verdunstung flüchtiger Flüssigkeiten dehnt die Luft in einer Pipette aus und drückt die Flüssigkeit aus der Spitze, ohne dass Druck auf den Kolben ausgeübt wird, was die genaue Volumenabgabe verringert.

Flüchtige Flüssigkeiten wie Acetonitril lassen sich in der Regel besser mit einer Verdrängerpipette handhaben.

Ja, beim Pipettieren mit Luftverdrängerpipetten können Aerosole entstehen. Aerosole können in das Innere der Pipette aufsteigen und die Innenwände und den Kolben verunreinigen. Die Aerosolisierung tritt leichter auf, wenn der Kolben während der Aspiration zu schnell losgelassen wird, und kann auch in entgegengesetzter Richtung außerhalb der Pipette bei zu schneller Abgabe auftreten. 

Um Aerosole zu minimieren, aspirieren und dosieren Sie langsam und gleichmäßig. Verwenden Sie gefilterte Tipps. 

Pipetten mit positiver Verdrängung verwenden spritzenartige Spitzen, die eine Aerosolisierung verhindern. Eine Verdrängerpipette ist die beste Wahl für das Pipettieren von gefährlichen Flüssigkeiten und Flüssigkeiten mit erhöhter Viskosität oder Flüchtigkeit.

Sehr kalte oder heiße Flüssigkeiten verändern den Luftdruck in Luftverdrängerpipetten, was zu ungenauem Pipettieren führt. 

Verdrängerpipetten mit spritzenartigen Spitzen, die keine Lufteinschlüsse zwischen Flüssigkeit und Kolben haben, werden nicht durch unterschiedliche Temperaturen von Flüssigkeiten beeinflusst. Pipetten mit positiver Verdrängung liefern genaue Ergebnisse mit Flüssigkeiten außerhalb der Raumtemperatur.

Wenn Sie eine sehr heiße oder kalte Flüssigkeit mit einer Luftverdrängerpipette pipettieren müssen, spülen Sie die Pipettenspitze nicht vor – dies ist in der Regel die beste Vorgehensweise für die höchste Genauigkeit. Saugen und dosieren Sie stattdessen zügig, um den Einfluss der Flüssigkeitstemperatur auf den inneren Luftspalt der Pipette zu minimieren.

Um Blasen und Schaumbildung beim Pipettieren zu vermeiden, tauchen Sie die Spitze nicht mehr als 10 mm in das Flüssigkeitsreservoir ein und saugen Sie sie langsam an.

Das Rückwärtspipettieren bietet zusätzlichen Schutz, da Sie vor dem Aspirieren den Kolben vollständig bis zum 2. Anschlag drücken, so dass keine Chance besteht, Luft in die flüssige Probe zu injizieren. Weitere Informationen zum Rückwärtspipettieren finden Sie auf dieser Seite. 

Eine Direktverdrängerpipette erzeugt keine Blasen oder Schaum, wenn sie mit Flüssigkeit interagiert, da ihre spritzenartige Spitze keine Luft enthält, mit der die Flüssigkeit interagieren kann.

Dekontaminieren Sie eine Pipette, indem Sie sie mit einem feuchten Tuch und einem Reinigungsmittel wie Isopropanol oder einer 10%igen Bleichlösung abwischen. Vermeiden Sie das durchsichtige Kunststofffenster des Mikrometers.

Autoklavieren kann eine weitere Option sein, aber überprüfen Sie die Gerätespezifikationen Ihrer Pipette. Wenn es autoklavierbar ist, wird dann das gesamte Instrument autoklaviert oder nur das flüssige Ende?  Oft kann nur das flüssige Ende autoklaviert werden.

Weitere Informationen zum Reinigen einer Pipette finden Sie auf dem Poster zum Reinigen einer Pipette .

Die Kalibrierung ist die kontrollierte und dokumentierte Messung der systematischen Fehlerrate (Genauigkeit) und der zufälligen Fehlerrate (Präzision) einer Pipette. In vielen Laborumgebungen muss die Leistung der Pipette regelmäßig getestet und gesetzlich unter bestimmten Bedingungen dokumentiert werden, die von einer akkreditierten Stelle zertifiziert werden. 

ISO-zertifizierte Anbieter kalibrieren Pipetten in einer kontrollierten Umgebung. Die Ergebnisse werden sicher auf einem Kalibrierzertifikat dokumentiert und tragen zu einer auditfähigen Leistungshistorie für jedes Gerät bei. Wenn Anpassungen erforderlich sind, bieten ISO-zertifizierte Kalibrierlabore fachkundigen Service mit vom Hersteller empfohlenen Teilen und Schmiermitteln. 

Rainin und METTLER TOLEDO sind die weltweit größte Pipettenserviceorganisation mit schnellen Abwicklungen durch Mail-in- und Vor-Ort-Serviceoptionen. Die Servicelabore sind nach ISO 17025 zertifiziert, und die Verfahren folgen der Aktualisierung auf ISO 8655 im Jahr 2022. 

Die Pipettengenauigkeit – oder Richtigkeit, wie sie heute genannt wird – ist die Differenz zwischen dem mittleren Volumen aller Messungen (4-10 Messungen) und dem eingestellten Volumen. 

Die Präzision ist die Standardabweichung aller durchgeführten Messungen. Wie weit sind die einzelnen Lesarten voneinander entfernt?

Die Unsicherheit einer Pipette ist der quantitative Begriff für ihre Gesamtgenauigkeit. Es ist eine Kombination aus Richtigkeit (ein Maß für systematische Fehler) und Präzision (ein Maß für zufällige Fehler). 

Die Gleichung für die Unsicherheit lautet: 

Unsicherheit = Systematischer Fehler + Zufallsfehler * k. k (Abdeckungsfaktor oder Z-Score) hängt von der Anzahl der Messungen ab. k=3,31 für vier Messungen und 2 für zehn Messungen.

Bewahren Sie Pipetten vertikal auf, hängend an einem Regal oder Pipettenständer. Halten Sie die Pipetten sauber und frei von Verunreinigungen. Halten Sie die Pipettenspitzengitter geschlossen.