Good Pipetting Practice : une meilleure Résultats grâce à la formation et à l’assistance

La plupart des applications des sciences de la vie comprennent des étapes critiques de manipulation de liquides au cours desquelles le volume pipeté influence directement le résultat. Si le pipetage n’est t constant et précis, alors le temps, l’argent et la ingrédient peuvent être perdus. précis pipetage constitue la base de travail reproductible, ce qui est essentiel pour générer des données significatives.

La première étape pour améliorer la précision de pipetage consiste à choisir le bon type de pipette et le bon Plage de volumes. Pour la taille, choisissez la pipette la moins volume qui conviendra à la volume que vous pipetez. Par exemple, si vous pipetez 2 μL et que vous avez une pipette de 5 μL et une pipette de 20 μL, vous obtiendrez une meilleure précision en utilisant le 5 μL. 

Consultez ce livre blanc sur la sélection des pipettes pour comprendre laquelle convient le mieux au liquide et d’autres facteurs spécifiques à votre situation : Choix de la pipette la Droite

Une fois que vous avez le bon instrument, mettez en pratique votre bonne technique de pipetage. Établissez un calendrier tests de routine pour maximiser la confiance dans vos résultats au fil du temps et, comme pour tout instrument Precision, assurez-vous d’instituer un service et un régime étalonnage réguliers et experts.

Le moyen le plus simple de tester rapidement les s précision pipettes est peut-être le Rainin SmartCheck. Rechercher en savoir plus à mt.com/SmartCheck 

Le choix de la pipette adaptée implique d’évaluer vos besoins. Premier, quel type de échantillons pipez-vous ? Sont-ils aqueux ? Ou sont-ils visqueux, volatils, moussants, corrosifs ou dangereux ? Pour les liquides aqueux et quasi aqueux, les pipettes à déplacement d’air les plus courantes (également appelées pipettes à coussin d’air) sont un bon choix. Pour les liquides visqueux, volatils et autres types de liquides inhabituels, une pipette à déplacement positif serait un meilleur choix pour la précision et la sécurité. 

Quel volume allez-vous pipetter ? Combien d’échantillons devez-vous Transférer d’un réservoir. à l’autre ? Consultez ce livre blanc sur la sélection des pipettes pour comprendre quelle pipette fonctionne le mieux en fonction du liquide et d’autres facteurs spécifiques à votre situation.

Le pipetage des plus petits volumes possible implique des instruments et des techniques spécialisés. Une pipette à répétition peut être le meilleur choix pour répéter la distribution de volumes jusqu’à 100 nL. Une autre pipette peut également fonctionner pour quelques distributions seulement. Assurez-vous d’utiliser la pipette la plus petite qui conviendra au volume que vous souhaitez pipetter. 

À de très faibles volumes, la technique de pipetage a un impact proportionnellement plus important sur précision et Reproductibilité. La profondeur d’immersion, l’angle de pipetage et le de Aspiration de vitesse sont importants à contrôler. Les techniques de pipetage poster de Rainin peuvent vous aider.

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Le facteur le plus important pour un pipetage multicanaux précis et reproductible est l’intégrité de la Scellage pour chaque canal de la pipette. Chaque Pointe s’adapte donc parfaitement à chaque tige sans aucune fuite d’air. Différents fabricants y parviennent de différentes manières, avec une facilité ergonomique et des niveaux de cohérence de scellage variables. LTS LiteTouch Système cônes de pipette de Rainin nécessitent le moins de force nécessaire pour charger et éjecter du multicanal, et ils Scellage constamment à chaque fois.

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Lors de l’aspiration, tenez la pipette le plus près possible de la verticale, en évitant tout angle supérieur à 20° par rapport à l’axe Y. Lorsque vous distribution, si vous touchez le mur de le réservoir. cible afin de retirer complètement tout le liquide de la Pointe, il est s OK dépasser l’angle de 20°.

Le pipetage direct est la technique de pipetage standard et le meilleur choix pour les échantillons aqueux. Pour les échantillons visqueux et volatils, le pipetage inversé offre une meilleure précision.

Au la pipette vers l’avant, poussez la Bouton-poussoir jusqu’à la première butée tout en maintenant la pipette à l’extérieur du liquide. Ensuite, immergez le Pointe 2-10 mm de profondeur dans le liquide avec lequel vous travaillez - pas plus profond. Relâchez lentement la Bouton-poussoir jusqu’à ce qu’elle soit complètement étendue pour aspirer la volume liquide complète. Au distribuez dans votre réservoir. cible, déplacez la pipette dans le réservoir., puis appuyez sur la Bouton-poussoir à un rythme régulier tout au long du premier cran jusqu’au deuxième arrêt – jusqu’au Bouton-poussoir. Une fois le Bouton-poussoir complètement enfoncé, faites glisser légèrement la Pointe de la pipette le long de la paroi de la réservoir. pour la retirer. Cela permet de distribuer complètement le volume liquide. Relâchez la Bouton-poussoir, éjectez la cône de pipette, chargez une nouvelle cône de pipette et répétez l’opération.

Au pipette inversée, poussez la Bouton-poussoir jusqu’à la deuxième butée du premier cran jusqu’à la deuxième butée – jusqu’à la Bouton-poussoir. Ensuite, immergez le Pointe dans le liquide et relâchez lentement et uniformément le Bouton-poussoir à aspirer. Accédez à la réservoir. de réception et appuyez sur le Bouton-poussoir UNIQUEMENT JUSQU’À LA PREMIÈRE BUTÉE pour distribuer le bon volume. Un petit volume résiduel subsiste dans le cône de pipette. Déplacez la pipette au-dessus d’un réservoir. de refus et appuyez sur le Bouton-poussoir le reste de descendre jusqu’à la deuxième butée, également appelée butée d'« éjection », pour libérer le liquide restant. 

Relâchez la Bouton-poussoir, éjectez la cône de pipette, chargez une nouvelle cône de pipette et répétez l’opération.

Une pipette à déplacement d’air peut être utilisée pour pipeter des liquides légèrement visqueux, y compris le sang. Au obtenir un maximum de précision, utilisez la technique de pipetage inversé décrite ci-dessus. Pour les liquides plus visqueux, tels que le glycérol à 85% ou le Triton X-100, un Pipette à déplacement positif offre le meilleur précision et la meilleure consistance.

Les liquides légèrement volatils tels que l’éthanol peuvent être pipetés à l’aide d’une pipette à déplacement d’air en utilisant la technique de pipetage inversé mentionnée précédemment. Cependant, les pipettes à déplacement positif sont un meilleur choix pour les liquides volatils. 

Si vous utilisez une pipette à déplacement d’air, prérincez la cône de pipette (aspiration et distribution) au moins cinq fois avant de pipetter votre volume. Cela équilibre l’air à l’intérieur de la pipette et ralentit le taux s évaporation du liquide. L’évaporation rapide de liquides volatils dilate l’air contenu à l’intérieur d’une pipette et force le liquide à sortir du Pointe sans qu’aucune pression ne soit exercée sur le Bouton-poussoir, ce qui diminue la précision du volume distribué.

Les liquides volatils tels que l’acétonitrile sont généralement mieux manipulés avec un Pipette à déplacement positif.

Oui, le pipetage avec des pipettes à déplacement d’air peut créer des aérosols. Les aérosols peuvent remonter à l’intérieur de la pipette et contaminer les parois intérieures ainsi que les Piston. L’aérosol se produit plus facilement lorsque le Bouton-poussoir est libéré trop rapidement au cours de la Aspiration et peut également se produire dans la direction opposée à l’extérieur de la pipette avec un distribution trop rapide. 

Au réduire les aérosols, aspirer et distribuer lentement et uniformément. Utilisez des cônes filtrés. 

Les pipettes à déplacement positif utilisent des cônes de type seringue qui empêchent l’aérosolisation. Une pipette à déplacement positif est le meilleur choix pour le pipetage de liquides dangereux et de tout liquide de viscosité ou volatilité élevée.

Les liquides très froids ou chauds modifient la pression de l’air dans les pipettes à déplacement d’air, ce qui entraîne un pipetage imprécis. 

Les pipettes à déplacement positif, avec des cônes de type seringue qui n’ont pas de poche d’air entre le liquide et Piston, ne sont pas affectées par des températures différentes de liquides. Les pipettes à déplacement positif fourniront des résultats précis avec des liquides ne faisant pas partie de la température ambiante.

Si vous devez pipeter un liquide très chaud ou froid avec une pipette à déplacement d’air, ne pré-rincez pas la cône de pipette – c’est généralement la meilleure pratique pour le précision le plus élevé. Au lieu de cela, aspirez et distribuez rapidement pour minimiser l’effet de la température s liquide sur la bulle d’air intérieure s la pipette.

Au éviter les bulles et la mousse lors du pipetage, n’immergez pas la Pointe de plus de 10mm dans le réservoir de liquide et aspirez lentement.

Le pipetage inversé offre une protection supplémentaire car, avant d’aspirer, vous appuyez complètement sur la Bouton-poussoir jusqu’à la 2e butée, de sorte qu’il n’y a aucune chance de’injecter de l’air dans l’échantillon liquide. Pour en savoir plus sur le pipetage inverse, visitez cette page. 

Une pipette à déplacement positif ne crée pas de bulles ou de mousse lors de ses interactions avec le liquide car sa Pointe seringue ne présente pas d’air avec lequel le liquide pourrait interagir.

Décontaminez la pipette en l’essuyant à l’aide d’un chiffon humide et d’un détergent comme d’isopropanol ou d’une solution d’eau de Javel à 10 %. Évitez la fenêtre en plastique transparent s micromètre.

L’autoclavage peut être une autre option, mais vérifiez les spécifications de l’instrument s votre pipette. S’il est autoclavable, l’instrument est-il complètement autoclavé ou seulement l’extrémité liquide ?  Souvent, seule la partie basse peut être autoclavée.

Pour en savoir plus sur le nettoyage d’une pipette, procurez-vous le poster Nettoyage d’une pipette .

Etalonnage s’agit de la mesure de contrôlée et documentée du taux d’erreur systématique (précision) et du taux d’erreur aléatoire (Precision) s pipette. Dans de nombreux environnements de laboratoire, les performances des pipettes doivent être régulièrement testées et documentées par la loi dans des conditions spécifiques certifiées par un organisme accrédité. 

Fournisseurs certifiés ISO calibrer les pipettes dans un environnement contrôlé. Résultats sont documentés en toute sécurité sur un certificat étalonnage, ce qui s’ajoute à un historique de performance prêt pour les audits de chaque instrument. Lorsque des ajustements sont nécessaires, les laboratoires de étalonnage certifiés ISO fournissent un service expert avec des pièces et des lubrifiants recommandés par le fabricant. 

Rainin and METTLER TOLEDO constitue la plus grande entreprise s entretien de pipettes au monde avec des options de maintenance sur site et par courrier rapides. Maintenance laboratoires sont certifiés ISO 17025 et les procédures suivent la mise à jour 2022 de la norme ISO 8655. 

Le précision de pipette – ou justesse, comme on s l’appelle maintenant – est la différence entre la moyenne volume de toutes les mesures (4 à 10 mesures) et le volume défini. 

La précision est l’écart-type de toutes les mesures effectuées. À quelle distance les unes des autres sont-elles éloignées de chaque lecture ?

L’incertitude s une pipette est le terme quantitatif qui désigne sa précision globale. C’est une combinaison de exactitude (une mesure de erreur systématique) et Precision (une mesure de erreur aléatoire). 

L’équation de l’incertitude est la suivante : 

Incertitude = erreur systématique + erreur aléatoire * k. k (facteur de couverture ou score Z) dépend du nombre de mesures. k=331 pour quatre mesures et 2 pour dix mesures.

Stockez les pipettes à la verticale, suspendues à une étagère ou à une étal de pipette. Veillez à ce que les pipettes restent propres et exemptes de tout contaminant. Gardez cône de pipette portoirs fermés.