GPP - Buone pratiche di pipettaggio

La maggior parte delle applicazioni Life Science comprende fasi critiche per la manipolazione dei liquidi in cui il volume erogato nella pipetta influisce direttamente sul risultato. Se il pipettaggio non è coerente e accurato, tempo, denaro e materiale possono andare sprecati. Un pipettaggio accurato costituisce la base del lavoro riproducibile, che è essenziale per generare dati significativi.

Il primo passo per migliorare l'accuratezza di pipettaggio è scegliere il tipo corretto di pipetta e il range di volume appropriato. Per le dimensioni, scegli il pipetta con il volume più basso che si adatta al tuo volume di pipettaggio. Ad esempio, se se il volume di pipettaggio è 2 μl e hai un pipetta da 5 μl e un pipetta da 20 μl, otterrai migliori accuratezza usando i 5 μl. 

Dai un'occhiata a questo libro bianco sulla selezione delle pipette per capire quali tipi funzionano meglio per il tuo liquido e altri fattori per la tua situazione specifica: Scegliere la pipetta giusta

Una volta che hai lo strumento giusto, metti in pratica le buone pratiche di pipettaggio. Imposta un programma di test di routine per massimizzare la fiducia nei tuoi risultati nel tempo e, come con qualsiasi strumento, assicurati di istituire un programma di assistenza regolare ed esperta e un regime di taratura.

Il modo più semplice per verificare rapidamente l'accuratezza di una pipetta potrebbe essere Rainin SmartCheck. Maggiori informazioni sono disponibili su mt.com/SmartCheck 

La scelta della pipetta giusta comporta la valutazione dei requisiti. Innanzitutto, che tipo di campioni stai pipettattando? Sono acquosi? O sono viscosi, volatili, schiumosi, corrosivi o pericolosi? Per liquidi acquosi e quasi acquosi, le pipette a spostamento d'aria più comuni (chiamate anche pipette a "cuscino d'aria") sono una buona scelta. Per i tipi liquidi e viscosi, volatili e altri tipi di liquidi insoliti, un pipetta a spostamento positivo sarebbe la scelta migliore sia per l'accuratezza che per la sicurezza. 

Quale volume stai pipettando? Quanti campioni dovete trasferire da un recipiente all'altro? Dai un'occhiata a questo libro bianco sulla selezione delle pipette per capire quale funziona meglio a seconda del liquido e di altri fattori specifici per la tua situazione.

Il pipettaggio dei volumi più piccoli possibile richiede tecniche e strumenti speciali. Una pipetta ripetitiva può essere la scelta migliore per dosare ripetutamente volumi fino a 100 nl. Un'altra pipetta può funzionare anche per pochi dosaggi. Assicurati di utilizzare la pipetta di dimensioni più piccole in grado di contenere il volume che si desidera gestire. 

A volumi molto bassi, la tecnica di pipettaggio ha un impatto proporzionalmente maggiore sull'accuratezza e sulla riproducibilità. La profondità di immersione, l'angolo di pipettaggio e la velocità di aspirazione sono importanti per il controllo. Il poster sulle tecniche di pipettaggio di Rainin può esserti utile.

Rainin NanoRep dosa aliquote fino a 100 nl. Per saperne di più: mt.com/NanoRep

Il fattore più importante nel pipettaggio multicanale accurato e riproducibile è l'integrità del sigillo per ogni canale della pipetta. Ciò significa che ogni puntale si adatta perfettamente all'uno sull'altro stelo senza perdite d'aria. Diversi produttori raggiungono questo obiettivo in modi diversi, con diversi livelli di ergonomia, facilità e consistenza della tenuta. I puntali LTS LiteTouch System di Rainin richiedono la minima forza per il caricamento e l'espulsione dal multicanale e sigillano ogni volta in modo coerente.

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Durante l'aspirazione, tieni la pipetta il più vicino possibile alla verticale, evitando qualsiasi angolo superiore a 20° rispetto all'asse Y. Durante l'erogazione, se si tocca la parete del recipiente di destinazione per estrarre completamente tutto il liquido dal puntale, è OK superare l'angolo di 20°.

Il pipettaggio in avanti è la tecnica di pipettaggio standard e la scelta migliore per i campioni acquosi. Per campioni viscosi e volatili, il pipettaggio inverso offre una migliore accuratezza.

Ne pipettaggio in avanti, spingi lo stantuffo verso il basso fino al primo arresto tenendo premuta la pipetta all'esterno del liquido. Quindi, immergi il puntale a 2-10 mm di profondità nel liquido con cui stai lavorando, non più in basso. Rilascia lentamente lo stantuffo fino alla massima estensione per aspirare l'intero volume di liquido. Per dosare nel recipiente di destinazione, sposta la pipetta nel recipiente, quindi premi lo stantuffo a una velocità uniforme attraverso il primo arresto fino al secondo arresto - fino al punto in cui arriva lo stantuffo. Con lo stantuffo completamente premuto, trascina leggermente la punta della pipetta sulla parete del recipiente per "toccare". Ciò consente di dosare completamente l'intero volume di liquido. Rilascia lo stantuffo, espelli il puntale, carica un nuovo puntale e ripeti.

Nel pipettaggio inverso, spingi lo stantuffo fino in fondo attraverso il primo arresto fino al secondo arresto - fino al pistone. Quindi, immergi la punta nel liquido e rilascia lentamente e uniformemente lo stantuffo per aspirare. Spostati verso il recipiente e premi lo stantuffo SOLO FINO AL PRIMO ARRESTO per dosare il volume corretto. Rimane un piccolo volume residuo nel puntale della pipetta. Sposta la pipetta su un recipiente di erogazione e premi lo stantuffo fino al secondo arresto, chiamato anche arresto "blowout", per rilasciare l'eventuale liquido residuo. 

Rilascia lo stantuffo, espelli il puntale, carica un nuovo puntale e ripeti.

Un pipetta a spostamento d'aria può essere utilizzata per gestire liquidi leggermente viscosi, incluso il sangue. Per ottenere la massima accuratezza, utilizza la tecnica pipettaggio inverso sopra descritta. Per liquidi più viscosi, come glicerolo all'85% o Triton X-100, una pipetta a spostamento positivo offre la migliore accuratezza e coerenza.

I liquidi leggermente volatili come ad esempio l'etanolo possono essere gestiti con una pipetta a spostamento d'aria utilizzando la tecnica di pipettaggio inverso sopra menzionata. Tuttavia, le pipette a spostamento positivo sono la scelta migliore per i liquidi volatili. 

Se si utilizza una pipetta a spostamento d'aria, pre-sciacquare il puntale (aspirare e dosare) almeno cinque volte prima pipettaggio il volume. Questo equilibra l'aria all'interno del pipetta, rallentando il tasso di evaporazione del liquido. La rapida evaporazione dei liquidi volatili espande l'aria all'interno della pipetta e forza il liquido dal puntale senza alcuna pressione sullo stantuffo, riducendo così l'erogazione accurata del volume.

Generalmente i liquidi volatili come l'acetonitrile vengono gestiti meglio con un pipetta a spostamento positivo.

Sì, il pipettaggio con pipette a spostamento d'aria possono creare aerosol. Gli aerosol possono salire all'interno del pipetta e contaminare le pareti interne e lo stantuffo. L'aerosolizzazione avviene più facilmente quando il pistone viene rilasciato troppo rapidamente durante l'aspirazione e può avvenire anche nella direzione opposta al di fuori del pipetta con un dosaggio troppo rapido. 

Per ridurre al minimo gli aerosol, aspirare e dosare lentamente e in modo uniforme. Utilizzare puntali filtrati. 

Le pipette a spostamento positivo utilizzano puntali a siringa che impediscono l'aerosolizzazione. Un pipetta a spostamento positivo è la scelta migliore per liquidi pipettaggio pericolosi e qualsiasi liquido ad elevata viscosità o volatilità.

I liquidi molto freddi o caldi modificano la pressione dell'aria all'interno delle pipette a spostamento d'aria, portando ad un pipettaggio impreciso. 

Le pipette a spostamento positivo, con puntali a siringa che non hanno sacca d'aria tra liquido e stantuffo, non sono influenzate dalle diverse temperature dei liquidi. Le pipette a spostamento positivo forniscono risultati accurati con liquidi non a temperatura ambiente.

Se è necessario gestire un liquido molto caldo o freddo con un pipetta a spostamento d'aria, non pre-sciacquare la punta del pipetta: questa è in genere la migliore pratica per ottenere la migliore accuratezza. Al contrario, bisogna aspirare e dosare rapidamente per ridurre al minimo l'effetto della temperatura del liquido sullo spazio d'aria interno della pipetta.

Per evitare bolle e schiuma durante il pipettaggio, non immergere il puntale più di 10 mm nel reservoir del liquido e aspira lentamente. Il pipettaggio inverso offre una protezione aggiuntiva perché, prima di aspirare, si preme completamente lo stantuffo fino al 2 ° arresto, quindi non c'è possibilità di iniettare aria nel campione di liquido. Per ulteriori informazioni su pipettaggio inverso, visita questa pagina. 

Una pipetta a spostamento positivo non crea bolle o schiuma durante l'interazione con un liquido poiché il puntale a siringa non presenta aria con cui il liquido possa interagire.

Decontamina le pipette strofinandole con un panno umido e un detergente come isopropanolo o una soluzione di candeggina al 10%. Evita la finestra di plastica trasparente del micrometro.

L'autoclavaggio può essere un'altra opzione, ma controlla le specifiche della tua pipetta. Se è autoclavabile, lo è l'intero strumento o solo l'estremità per il liquido?  Spesso, solo l'estremità per il liquido è autoclavabile.

Per ulteriori informazioni sulla pulizia degli strumenti, scarica il poster sulla pulizia di una pipetta .

La taratura è la misurazione controllata e documentata del tasso di errore sistematico (accuratezza) e del tasso di errore casuale (precisione) di una pipetta. In molti ambienti di laboratorio, le prestazioni delle pipette devono essere regolarmente testate e documentate dalla legge in condizioni specifiche certificate da un ente accreditato. 

I fornitori certificati ISO tarano le pipette in un ambiente controllato. I risultati sono documentati in modo sicuro su un certificato di taratura, aggiungendo una cronologia delle prestazione pronta per l'audit per ogni strumento. Quando sono necessarie regolazioni, i laboratori di taratura certificati ISO forniscono un servizio esperto con parti e lubrificanti consigliati dal produttore. 

METTLER TOLEDO Rainin è la più grande organizzazione di assistenza per pipette al mondo con opzioni di assistenza rapida per posta in e in loco. I laboratori di servizio sono certificati ISO 17025 e le procedure seguono l'aggiornamento 2022 a ISO 8655. 

L'accuratezza della pipetta - o esattezza, come viene chiamata ora - è la differenza tra il volume medio di tutte le misure (4-10 misurazioni) e il volume impostato. 

La precisione è la deviazione standard di tutte le misure eseguite. Quanto sono distanti da ogni lettura le altre?

L'incertezza di una pipetta è il termine quantitativo che indica la sua accuratezza complessiva. È una combinazione di esattezza (una misura dell'errore sistematico) e accuratezza (una misura dell'errore casuale). 

L'equazione per l'incertezza è: 

Incertezza = errore sistematico + errore casuale * k. k (fattore di copertura o Z-score) dipende dal numero di misurazioni. k=331 per quattro misure e 2 per dieci misurazioni.

Riponi le pipette verticalmente, appese a uno scaffale o un supporto per pipette. Tieni le pipette pulite e lontano da qualsiasi contaminante. Tieni chiusi i rack per puntali.