Controllo accurato della temperatura per la spettrofotometria UV/VIS

Questa guida descrive l'importanza della misura esatta della temperatura nella spettroscopia UV/VIS attraverso esempi di applicazioni di uso comune nel settore delle Life Science. Vengono inoltre forniti consigli e suggerimenti pratici per analisi UV/VIS accurate a temperature elevate con gli accessori CuveT e CuvetteChanger per la linea di spettrofotometri UV/VIS Excellence di METTLER TOLEDO.

In genere, nella spettroscopia UV/VIS la termostatazione consente di definire condizioni di temperatura specifiche a) prima, b) durante o c) dopo l'analisi spettroscopica, come illustrato sotto:

a) Potrebbe essere opportuno conservare i campioni/gli analiti a una temperatura esatta in modo da ritardarne la decomposizione o fornire le condizioni ideali per una reazione dei precursori richiesti per una reazione (chimica) successiva, che verrà quindi analizzata mediante spettroscopia alla temperatura specifica.

b) Stabilire le condizioni di temperatura che sono costanti o che variano sulla base di un protocollo di incremento della temperatura definito. Tali condizioni catalizzano le reazioni chimiche che è necessario monitorare mediante spettroscopia.

c) Ristabilire condizioni di temperatura precedenti o differenti per analisi spettroscopiche successive allo scopo di monitorare le reazioni (chimiche) reversibili.

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Ulteriori informazioni sono disponibili nella guida sull'uso corretto del termostato per l'analisi UV/VIS

3.1 Determinazione dell'attività lipasica

La determinazione dell'attività lipasica è un tipico esempio in cui è richiesto l'utilizzo di temperature elevate, al di sopra di quelle ambientali, in modo da stabilire le condizioni ideali per una reazione chimica catalizzata da enzimi da monitorare mediante spettroscopia.

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3.2 Denaturazione delle proteine indotta dalla temperatura

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3.3 Cinetica di Michaelis-Menten dell'enzima beta-galattosidasi

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3.4 Temperatura di fusione del DNA

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Ulteriori informazioni sono disponibili nella guida sull'uso corretto del termostato per l'analisi UV/VIS

CuveT è un termostato termoelettrico (basato su cella di Peltier) a singola cuvetta per il controllo efficace della temperatura, nell'intervallo da 4 °C a 95 °C, nelle applicazioni di spettroscopia UV/VIS. È possibile collegare questo sistema di termostatazione agli spettrofotometri UV7, UV5Bio e UV5 UV/VIS Excellence di METTLER TOLEDO. L'unità viene posizionata nella parte superiore dello spettrofotometro e non richiede l'utilizzo di utensili per l'installazione.

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Ulteriori informazioni sono disponibili nella guida sull'uso corretto del termostato per l'analisi UV/VIS

In questo capitolo vengono forniti consigli e suggerimenti pratici basati su domande frequenti per l'esecuzione di analisi spettroscopiche UV/VIS termostatizzate di routine con l'accessorio CuveT.

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Ulteriori informazioni sono disponibili nella guida sulle soluzioni di termostatazione per applicazioni UV/VIS

L'accessorio CuvetteChanger di METTLER TOLEDO consente di eseguire un'efficiente misura automatica di serie fino a 8 cuvette per analisi con sottrazione del bianco o applicazioni cinetiche complesse. Grazie all'utilizzo di un termostato esterno, è possibile eseguire la termostatazione dei campioni all'interno delle cuvette, nell'intervallo di temperatura compreso tra 10 e 80 °C .

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Ulteriori informazioni sono disponibili nella guida sulle soluzioni di termostatazione per applicazioni UV/VIS

[1] www.mt.com/uv-vis

[2] www.mt.com/cuvet-peltier-uvvis

[3] Determination of Lipase Activity, Method PNAB-LIP39, Biocon Española S.A.

[4] Journal of Chemical Education, March 2000, DOI: 10.1021/ed077p 380

[5] 1. Enzyme Handbook, II, Barman, T. E., Springer- Verlag (Berlin-Heidelberg: 1969), p. 581.