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Le contrôle de la température est un paramètre important dans de nombreuses applications de spectroscopie UV/Vis, en particulier pour les échantillons organiques sensibles à la température. Le présent guide explique l'importance de ce paramètre en l'illustrant via des applications courantes, telles que l'activité lipasique, la dénaturation des protéines, le point de fusion de l'ADN, ainsi que la cinétique des beta-galactosidases de Michaelis-Menten.
Ce guide fournit également des informations détaillées sur les solutions de thermostatisation pour les spectrophotomètres UV/Vis Excellence de METTLER TOLEDO :
- CuveT – Contrôle de la température d'un seul échantillon
- CuvetteChanger – Contrôle de la température de plusieurs échantillons
1. Résumé
Ce guide décrit l'importance d'une mesure exacte de la température pour la spectroscopie UV/Vis, illustré par des applications courantes en sciences de la vie. Il fournit en outre des conseils pratiques pour des mesures UV/Vis précises à des températures élevées, avec les accessoires CuveT et CuvetteChanger pour la gamme UV/Vis Excellence de METTLER TOLEDO.
2. Introduction
La thermostatisation dans le cadre de la spectroscopie UV/Vis consiste généralement à établir des conditions de température définies a) avant, b) pendant ou c) après la mesure spectroscopique, comme illustré ci-dessous :
a) Il est parfois nécessaire de maintenir les échantillons/analytes à une température exacte afin de retarder leur décomposition ou d'assurer les conditions idéales pour une réaction de précurseurs requise pour une réaction (chimique) ultérieure, qui est alors analysée par spectroscopie à la température en question.
b) Pour établir des conditions de température constantes ou qui changent selon un protocole de montée en température défini. Ces conditions catalysent les réactions chimiques qui doivent être contrôlées par spectroscopie.
c) Pour rétablir les conditions de température précédentes ou en établir d'autres pour les mesures spectroscopiques suivantes, afin de contrôler des réactions (chimiques) réversibles.
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Pour plus d'informations, procurez-vous le Guide sur le bon thermostat pour vos analyses UV/Vis
3. Exemples d'applications pour la spectroscopie UV/Vis sensible à la température
3.1 Détermination de l'activité lipasique
La détermination de l'activité lipasique est un exemple d'application qui nécessite des températures supérieures à la température ambiante pour établir les conditions idéales pour une réaction chimique catalysée par enzyme, à contrôler par spectroscopie.
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3.2 Dénaturation des protéines induite par la température
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3.3 Cinétique des beta-galactosidases de Michaelis-Menten
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3.4 Température de fusion de l'ADN
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Pour plus d'informations, procurez-vous le Guide sur le bon thermostat pour vos analyses UV/Vis
4. Unité de thermostat par effet Peltier CuveT de METTLER TOLEDO
CuveT est un thermostat thermoélectrique à cuve unique (à effet Peltier) qui contrôle efficacement la température sur une plage de 4 °C à 95 °C pour les applications de spectroscopie UV/VIS. Ce système thermostatique peut être connecté aux spectrophotomètres UV/Vis Excellence UV7, UV5Bio et UV5 de METTLER TOLEDO. L'unité se place au-dessus du spectrophotomètre et son installation ne nécessite aucun outil.
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Pour plus d'informations, procurez-vous le Guide sur le bon thermostat pour vos analyses UV/Vis
5. Conseils et astuces pratiques pour la thermostatisation avec CuveT
Ce chapitre propose une FAQ contenant des conseils et astuces pratiques pour les mesures par spectroscopie UV/Vis thermostatée de routine avec CuveT.
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Pour plus d'informations, procurez-vous le Guide sur le bon thermostat pour vos analyses UV/Vis
6. Thermostatisation avec CuvetteChanger de METTLER TOLEDO
Le CuvetteChanger de METTLER TOLEDO permet une mesure efficace et automatique de séries comprenant jusqu'à 8 cuves, pour les mesures avec soustraction du blanc ou les applications cinétiques complexes. L'utilisation d'un thermostat externe permet de contrôler la température des échantillons dans les cuves, dans une plage de 10 à 80 °C.
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Pour plus d'informations, procurez-vous le Guide sur le bon thermostat pour vos analyses UV/Vis
7. Références
[1] www.mt.com/uv-vis
[2] www.mt.com/cuvet-peltier-uvvis
[3] Determination of Lipase Activity, Method PNAB-LIP39, Biocon Española S.A.
[4] Journal of Chemical Education, mars 2000, DOI: 10.1021/ed077p 380
[5] 1. Enzyme Handbook, II, Barman, T. E., Springer- Verlag (Berlin-Heidelberg : 1969), p. 581.
