Alles wat u moet weten over UV/VIS spectroscopie

De basis van UV/VIS spectroscopie waaronder kleurschalen, grondbeginselen, instrumentatie en kalibratie.

Bel ons voor een offerte
Een UV7 UV/VIS spectrofotometer van METTLER TOLEDO
Wat is UV/VIS spectroscopie?
Het UV/VIS spectrum

Absorbantie/transmissie converter

=

Absorptie van licht volgens de wet van Beer-Lambert
De werking van scanning spectrofotometers in een schema
De werking van scanning spectrofotometers in een schema

Conventionele scanning spectrofotometers werken volgens het principe van opeenvolgende transmissiemetingen bij elke gedefinieerde golflengte. Het licht wordt door een diffractierooster opgesplitst in verschillende golflengten. Een monsterkuvet wordt tussen het diffractierooster en de detector geplaatst.

De werking van array spectrofotometers in een schema
De werking van array spectrofotometers in een schema

In een array spectrofotometer wordt het monster verlicht door een continuüm, d.w.z. alle spectrale lichtcomponenten tegelijk, waardoor het licht van verschillende golflengten tegelijkertijd wordt geabsorbeerd. Het doorgelaten licht wordt vervolgens door een reflectierooster gebroken. Met deze instrumenten kan het UV/VIS spectrum sneller worden verkregen dan met een traditionele scanning spectrofotometer.

Download het gratis whitepaper over array versus scanning UV/VIS spectroscopie

Prestatietest

Gecertificeerd referentiemateriaal (CRM)

Testparameters instrument

Acceptatiecriteria

USP 42 NF 37

Ph. Eur. 10

Golflengtenauwkeurigheid &

herhaalbaarheid

Ho(ClO4)3: 4% Ho2O3 in 10% v/v HClO4

Blanco: Lucht

14 golflengten

(240 nm - 650 nm)

Xe: 2 golflengten (260,6, 528,6 nm)

UV (200 - 400 nm): ± 1 nm

Vis (400 - 780 nm): ± 2 nm

(S.D.) < 0,5 nm

UV (< 400 nm):

± 1 nm

Zicht (> 400 nm):

± 3 nm

Fotometrische

nauwkeurigheid &

herhaalbaarheid**

K2Cr2O7 in 0,001 M HClO4

Blanco: 0,001 M HClO4

60 mg/L

0 A - 2 A,

235, 257, 313, 350 nm

Voor extinctie ≤ 1A

Nauwkeurigheid: ± 0,010A

Herhaalbaarheid:

S.D. ≤ 0.005 A

 

Voor extinctie > 1A

Nauwkeurigheid: ± 1%

Herhaalbaarheid:

S.D. ≤ 0.5%

 

Nauwkeurigheid: ± 0,010 A of ± 1% (de grootste waarde is van toepassing)

 

Nicotinezuur in

0,1 M HCl

Blanco: 0,1 M HCl

12 mg/L

0,26 A - 1,6 A

213, 261 nm

Fotometrische lineariteit

K2Cr2O7 in 0,001 M HClO4

Blanco: 0,001 M HClO4

 

6 - 200 mg/L, tot 3,0 A,

235, 257, 313, 350 nm

Alle gemeten filters voldoen aan de acceptatiecriteria voor fotometrische nauwkeurigheid  

R2> 0,999

Nicotinezuur in

0,1 M HCl

Blanco: 0,1 M HCl

6 - 60 mg/L, tot 2,5 A

213, 261 nm

Strooilicht volgens procedure A

(SFRM)

1,2 % w/v KCl/H2O;

10 mm padlengte

Blanco: 1,2% w/v KCl/H2O, weglengte 5 mm

Amax bij 198 nm

≥ 0.7 A

(NA)

Strooilicht volgens procedure B (SWM)

1,2 % w/v KCl/H2O;

10 mm padlengte

Blanco: H2O, padlengte 10 mm

Amax bij 198 nm

≥ 2.0 A

≥ 2.0 A

Resolutie

0,02 % v/v tolueen in n-hexaan

Blanco: n-hexaan/

n-heptaan (Ph. Eur. 10)

Amax,269/Amin,267

>1.3

De niveaus worden vermeld in de desbetreffende monografie

** Geen specificatie van fotometrische herhaalbaarheid (precisie) in Ph. Eur.

S.D. - Standaardafwijking

Grondbeginselen van UV/VIS-kleurmeting
Kleurnummers en -coördinaten in een CIE-kleurmodel.
Wat is de kleur van deze roos? Op basis van de CIE-kleurenschaal is een nauwkeurig antwoord mogelijk.

Er zijn verschillende kleurschalen vastgesteld om een uniek product te definiëren volgens industriële normen. Deze schalen omvatten:

Kleurschaal

Standaard

Toepassingen

Saybolt

ASTM D156, ASTM D6045

Om te bepalen of brandstof (kerosine, benzine, diesel, nafta, enz.) verontreinigd is of tijdens opslag is afgebroken.

APHA/Pt-Co/Hazen

ASTM D1209

Geelheids-index die wordt gebruikt als meetwaarde voor zuiverheidscontroles in de water-, chemische, olie- en kunststofindustrie.

Gardner

ASTM D1544/D6166, DIN EN ISO 4630-2

Voor het testen van producten zoals harsen, vetzuren, vernissen en drogende oliën die door verhitting een kleur hebben gekregen.

CIELAB

DIN EN 11664-4, DIN 5033-3, 4630, ASTM Z 58.7.1 DIN 6174

Kwaliteitscontrole voor de smaak- en geurstoffenindustrie en de voedingsmiddelen- en drankenindustrie.

CIELAB Kleurmeting - UV/VIS spectroscopie

EBC

MEBAK Methode 2.13.2, EBC Methode 8.5, EBC Methode 9.6

Voor het meten van kleurintensiteit en troebelheid (waas) in EBC-eenheden van onder andere bier, mout en karamel.

USP/EUP

USP-24 Monografie 631, EP-methode 2.2.2

Kwaliteitscontrole van geneesmiddelen.

Hess-Ives

DGK testmethode F 050.2

Gebruikt om chemicaliën en oppervlakte-actieve vloeistoffen te testen (voornamelijk in de cosmetica-industrie).

 

Kwaliteitscontrole van nucleïnezuren
Download de gratis brochure: Betrouwbare resultaten voor UV/VIS spectroscopie
Cuvetten voor UV/VIS-analyse

De onderstaande tabel geeft de bruikbare transmissiebereiken van cuvetten:

Materiaal

Theoretisch transmissiebereik (nm)

Ver UV-kwarts

170-2700

Optisch glas

320-2500

Nabij IR-kwarts

220-3800

UV-siliciumdioxide

220-2500

UV kunststof

220-900

PS-cel voor eenmalig gebruik

340-750

Wegwerp PMMA-cel

285-750

 

Een cuvet voor UV/VIS spectroscopie

 

Waterige oplossingen

Organische moleculen

Moeilijk te verwijderen deeltjes

Eiwitten

Zware metalen

Vetzuren

Reinigingsoplossingen

Gelijke volumedelen van 3 M HCl en ethanol

 

Wassen met 50% salpeterzuur

Geconcentreerd HNO3 of 2 M HCl

Gelijke volumedelen ethanol en 3 M HCl

 

 

Incubeer bij kamertemperatuur met trypsine

 

(Ethanol en aceton worden niet aanbevolen voor reiniging)

Gelijke volumedelen zwavelzuur 2 M en 50% gedeïoniseerd water

 

Aqua regia

 

 

Gelijke volumedelen IPA en gedeïoniseerd water

Inweektijd*

10 minuten

10 minuten

30 seconden

Overnachting

20 minuten

Veeg af

*De inweektijd in de tabel is een ruwe schatting; het wordt echter alleen aanbevolen om cuvetten te laten weken totdat vlekken/verontreinigingen verwijderd zijn.

Verzameling posters met tips en tricks om laboratoriuminstrumenten schoon te houden

UV/VIS spectroscopie in de voedingsindustrie
UV/VIS spectroscopie in de farmaceutische industrie
UV/VIS spectroscopie in de cosmetica-industrie
UV/VIS spectroscopie in de petrochemische industrie
UV/VIS spectroscopie in de chemische industrie
UV/VIS spectroscopie binnen biotechnologie

Wat zijn de verschillende soorten spectroscopie?

De verschillende spectroscopische technieken worden voornamelijk onderscheiden door de straling die ze gebruiken, de interactie tussen de energie en het materiaal, het type materiaal en de toepassingen waarvoor ze gebruikt worden. De technieken die vaak gebruikt worden voor chemische analyse zijn atoomspectroscopie, ultraviolet en zichtbaar spectroscopie (UV-spectroscopie), infraroodspectroscopie, Raman spectroscopie en kernspinresonantie.

Type spectroscopie

Type straling

Interacties

Golflengte

ϒ-straling spectroscopie

ϒ-straling

Atoomkernen

< 0,1 nm

X-ray fluorescentie spectroscopie

X-straling

Elektronen in de binnenste schil

0,01 - 2,0 nm

Vacuüm UV-spectroscopie

Ultraviolet (UV)

Ionisatie

2.0 - 200 nm

UV/VIS spectroscopie

UV/VIS

Valance elektronen

200 - 800 nm

Infrarood- en Raman-spectroscopie

Infrarood

Moleculaire trillingen

0,8 - 300 mm

Microgolf spectroscopie

Microgolven

Moleculaire rotaties

1 mm tot 30 cm

Elektron-spinresonantiespectroscopie

Elektronspin

Nucleaire magnetische resonantie spectroscopie

Radiogolven

Kernspin

0.6 - 10 m

 

Wat zijn de verschillende moleculaire interacties in het UV-gebied?

Overgangstypes in het UV-spectrumbereik

Welke invloed hebben functionele groepen op het spectrum?

Neem een functionele groep die atomen bevat met één of meer eenzame elektronenparen die geen ultraviolette/zichtbare straling absorberen. Wanneer deze functionele groep echter aan een chromofoor wordt gekoppeld, verandert de intensiteit en golflengte van de absorptie. Dit fenomeen wordt een auxochroom of een kleurversterkende groep genoemd.

De aanwezigheid van een auxochroom veroorzaakt een positieverschuiving van een piek of signaal naar een langere golflengte, wat een bathochrome of roodverschuiving wordt genoemd. De functionele groepen die bijdragen aan bathochrome groepen zijn substituenten zoals methyl-, hydroxyl-, alkoxy-, halogeen- en aminogroepen.

Het auxochroom dat een positieverschuiving van een piek of signaal naar een kortere golflengte veroorzaakt, wordt hypsochroom of blauwverschuiving genoemd. Eigenlijk gedraagt de combinatie van chromofoor en auxochroom zich als een nieuwe chromofoor met een ander absorptiemaximum (λmax). Benzeen vertoont bijvoorbeeld λmax bij 256 nm, terwijl aniline λmax vertoont bij 280 nm. De NH2 groep werkt dus als een auxochroom en veroorzaakt de verschuiving van λmax naar een grotere waarde.

Wat is het verschil tussen spectrale bandbreedte en resolutie in UV/VIS spectroscopie?

De spectrale bandbreedte (SBW) van een spectrofotometer houdt verband met de fysieke spleetbreedte en optische dispersie van het monochromatorsysteem. Resolutie is het vermogen van een instrument om licht te scheiden in eindige, afzonderlijke golflengtegebieden en om elk eindig gebied te onderscheiden. Spectrale bandbreedte wordt meestal gebruikt voor scanninginstrumenten, terwijl resolutie meestal wordt gebruikt voor array-instrumenten.

Voor de meeste kwantitatieve doeleinden van de farmacopeia is een spectrale bandbreedte van minder dan 2 nm voldoende en het acceptatiecriterium voor de verhouding is 1,3. Spectrale resolutie kan worden gebruikt ter vergelijking met spectrale bandbreedte.

De tabel toont de resolutie van METTLER TOLEDO's UV/VIS Excellence spectrofotometers, die wordt gemeten met tolueen in hexaan, en de equivalente SBW:

Instrument

Spectrale resolutie

Equivalente SBW (nm)

UV5

> 1.5

< 2.0

UV5Bio

> 1.5

< 2.0

UV5Nano

> 1.7

< 1.5

UV7

> 1.9

≤ 1.0

 

Wat zijn de verschillende lichtbronnen die in een UV/VIS spectrofotometer gebruikt worden?

De beste lichtbron is een lichtbron die een goede intensiteit met weinig ruis biedt voor alle ultraviolette en zichtbare golflengten en die gedurende lange tijd stabiel blijft. Er zijn verschillende lichtbronnen die gewoonlijk gebruikt worden, zoals hieronder vermeld:

Lichtbron

Golflengtebereik

(nm)

Gebied

Levensduur

Wolfraam gloeilamp

350 - 2500

VIS + IR

3000 uur

Deuterium booglamp

190 - 400

UV

1.000 uur

Waterstoflamp

190 - 400

UV

1.000 uur

Xenon flitslamp

190 - 1100

UV + VIS + NIR

5.500 uur*

* Komt overeen met 50 Hz flitsen bij constante werking

Hoe is een diffractierooster beter dan een prisma?

Prisma's en diffractieroosters zijn typische dispersieve elementen. Een prisma bereikt dispersie door het verschil in de brekingsindex van het materiaal afhankelijk van de golflengte. Een diffractierooster maakt echter gebruik van het verschil in diffractierichting voor elke golflengte als gevolg van interferentie. Zowel prisma's als diffractieroosters kunnen lichtspectra in vele kleuren verdelen voor analyse. Een diffractierooster is echter minder gevoelig voor de kleur van het licht en kan kleuren over een grotere hoek verspreiden dan een prisma. Het glas in een prisma is helder voor zichtbaar licht, maar het absorbeert en blokkeert licht in het infrarode en ultraviolette deel van het spectrum. Een diffractierooster met een paar honderd lijnen per inch kan licht in het midden van het zichtbare spectrum minstens 20 graden afbuigen. De afbuigingshoek van een glasprisma is over het algemeen veel kleiner dan dit.

Welke anorganische verbindingen kunnen met UV/VIS spectroscopie gemeten worden?

Moleculen kunnen met UV-spectroscopie worden geanalyseerd als ze een functionele groep of conjugatie bezitten, of als ze een kleurcomplex produceren. Omdat anorganische verbindingen geen functionele groep of conjugatie bevatten, is de gebruikelijke methode om ze te analyseren een reactie met een geschikte verbinding. Dit produceert een kleurcomplex waarvan de absorptie fotometrisch gemeten kan worden in het zichtbare gebied en gecorreleerd kan worden met de werkelijke concentratie. Bijvoorbeeld, ijzer wordt gewoonlijk geanalyseerd door een reactie met 1, 10-fenthroline om een rood kleurcomplex te produceren. De absorptie van het complex wordt gemeten bij 570 nm om de ijzerconcentratie te schatten.

Wat is het verschil tussen single beam en double beam spectrofotometers?

Het belangrijkste verschil tussen een single beam en double beam spectrofotometer is als volgt.

Single beam spectrofotometer: Een enkele bundel van de lichtbron gaat door het monster.

Spectrofotometer met dubbele bundel: De lichtstraal van de lichtbron wordt in twee delen gesplitst: één deel gaat door het monster, en het andere deel door de referentie.

Bundelsplitsing in een spectrofotometer met dubbele bundel wordt op twee manieren bereikt:

  1. Statisch, met gedeeltelijk doorlatende spiegels of een soortgelijk apparaat
  2. Verzwakking van de bundels met behulp van bewegende optische en mechanische apparaten

Hoe analyseer ik vaste polymeerfilm met UV/VIS?

Hoe analyseer ik vaste polymeerfilm met UV/VIS?

Is de temperatuur van invloed op een UV/VIS-analyse?

Temperatuur beïnvloedt de absorptiewaarden. Verschillende oplosmiddelen ondergaan verschillende interacties bij verschillende temperaturen. Oplossingsparameters die veranderen door temperatuurveranderingen zijn:

  • Reactiesnelheid. De reactiesnelheid verandert wanneer de temperatuur wordt verhoogd. Dit kan een verandering in de activiteit van het monster veroorzaken. Enzymatische/biomoleculaire reacties zijn erg gevoelig voor temperatuur.
  • Oplosbaarheid van een opgeloste stof. De oplosbaarheid wordt beïnvloed door temperatuurschommelingen. Een slechte oplosbaarheid kan resulteren in een onnauwkeurige absorptie.
  • Uitzetting of inkrimping van het oplosmiddel. Dit kan leiden tot een verandering in de concentratie van de oplossing en de absorptie beïnvloeden, aangezien absorptie lineair gerelateerd is aan concentratie.
  • Schlieren-effect. Dit effect kan optreden bij temperatuurveranderingen, wat leidt tot een reeks convectiestromen die de werkelijke extinctie kunnen veranderen.

Optische prestatieparameters zoals fotometrische ruis, golflengtenauwkeurigheid/herhaalbaarheid, fotometrische herhaalbaarheid en strooilicht worden niet beïnvloed door temperatuur binnen een bereik van 10 - 40 °C.

Optische parameters zoals fotometrische resolutie (tolueen/hexaanverhouding) en fotometrische nauwkeurigheid golflengten (K2Cr2O7 in HClO4) tonen een temperatuurafhankelijkheid variërend van 0,014 tot -0,034/eenheid binnen 10 - 40 °C.

Temperatuurregeling voor UV/VIS-spectrofotometrie kan worden bereikt met behulp van hoogwaardige thermostatiseringssystemen zoals CuveT en CuvetteChanger. Lees hier meer.

Wat is strooilicht?

Wat is strooilicht?

Waarom is het monstercompartiment in UV/VIS spectrofotometers met array open?

Het monstercompartiment in UV/VIS spectrofotometers is open omdat array-instrumenten gebruik maken van omgekeerde optica en de gelijktijdige detectie van alle golflengten van het spectrum.

Omgekeerde optiek: Het licht wordt afgebogen nadat het door het monster is gegaan. Hierdoor draagt slechts een klein deel van het externe omgevingslicht bij aan het signaal in een bepaald golflengtegebied.

Gelijktijdige detectie: Met behulp van een arraydetector die tegelijkertijd 2048 lichtintensiteitssignalen levert, wordt het volledige spectrum binnen één seconde opgenomen. Omdat de meting zeer snel is, wordt het effect van omgevingslicht aanzienlijk verminderd.

Gerelateerde producten