BCA eiwitbepaling - UV/VIS spectroscopie
Colorimetrische kwantificering van het totale eiwitgehalte in biologische monsters
Deze application note voor spectroscopie laat zien hoe een bicinchoninezuur (BCA)-eiwittest wordt gebruikt als colorimetrische detectie en kwantificering van de totale eiwitconcentratie in biologische monsters. Download hem hier voor meer informatie over deze toepassing.
Hoe wordt de BCA-eiwittest gemeten?
De bicinchoninezuur (BCA)-eiwittest wordt gebruikt als colorimetrische detectie en kwantificering van de totale eiwitconcentratie in biologische monsters. De BCA-eiwittest is compatibel met monsters die tot 5 % detergentia (oppervlakteactieve stoffen) bevatten. Voordelen van deze test zijn de eenvoudige uitvoering, relatief stabiele kleurcomplexen en de aanpassing van de temperatuur die variabele gevoeligheid mogelijk maakt.
De eerste stap van de reactie leidt tot reductie van Cu2+-ionen tot Cu1+-ionen door peptidebindingen in alkalische oplossing. De hoeveelheid gereduceerd Cu2+ is evenredig met de hoeveelheid eiwit die in de oplossing aanwezig is. Ten tweede vormen twee moleculen BCA met één koperkation (Cu1+) een chelatie, waardoor een paarse kleur ontstaat. Bovine Serum Albumine (BSA) wordt gebruikt als eiwitstandaard en metingen worden uitgevoerd bij 562 nm.
Voor deze toepassing is gebruik gemaakt van een UV7 spectrofotometer en een CuvetteChanger van METTLER TOLEDO.
