Das interessierende Molekül kann entweder ausgeschieden werden oder sich in den Zellen anreichern. Wenn dies geschieht, müssen die Zellen zunächst aufgebrochen, der Abbau verhindert und Verunreinigungen vom interessierenden Molekül getrennt werden.

Zentrifugation und Mikrofiltration sind optimale Methoden, um das Molekül von der Zelle zu trennen, und nur der Überstand kann für die weitere Reinigung gesammelt werden.

Die Echtzeitmessung von Druck, Durchfluss, Partikelakkumulation , Größenverteilung, pH-Wert oder Trübung der Zelle sowohl beim Ein- als auch Auslaufen aus Filtern kann eine Rückkopplungssteuerung ermöglichen, um Prozessunterbrechungen zu minimieren.

Viren werden inaktiviert und nicht pathogen gemacht. Inline-Spektroskopie , Trübung, pH-Überwachung und -Kontrolle garantieren Konsistenz während des gesamten Prozesses.

Das Zielprodukt wird durch Chromatographie isoliert und konzentriert.

Während Antikörper durch Affinitätschromatographie unter Verwendung von Harzen mit Protein A, Protein G oder anderen selektiv hergestellten Methoden eingefangen werden, werden Oligonukleotide und Nichtproteinmoleküle häufig durch Ionenaustauschchromatographie , Polysaccharide und komplexes Glykan durch hydrophobe Wechselwirkung oder IMAC-Chromatographie eingefangen.

Zu den gängigen Messungen gehören Druck, Durchfluss, pH-Wert, Fourier-Transformations-Infrarotspektroskopie (FTIR),UV-Vis und Leitfähigkeit vor der Chromatographiesäule, um variable Zufuhreingänge zu überwachen und Informationen über die Qualität und Leistung der Säule zu liefern.  

Beim Reinigungsschritt werden die verbleibenden Verunreinigungen (wie Proteine, Nukleinsäuren, Endotoxine usw.) durch eine Abfolge von Arbeitsgängen – Klärung, Extraktion, Chromatographie, Tangentialflussfiltration – entfernt, während das Produkt so weit wie möglich zurückgehalten und mittels Tangentialflussfiltration (TFF) über Ultra-/Diafiltration (UF/DF) weiter konzentriert wird.

Ziel ist es, die Reinheit zu erhöhen, ohne an Ertrag zu verlieren. Die Überwachung von Durchfluss, Druck, Leitfähigkeit, pH-Wert, Trübungen und Fließgewicht während der Puffervorbereitung und -reinigung gewährleistet die Zuverlässigkeit während des gesamten Prozesses.

Viren werden inaktiviert und nicht pathogen gemacht, um die Sicherheit der Biotherapeutika zu gewährleisten, indem die Lösungsumgebung verändert wird (Senkung des pH-Werts oder Zugabe von Lösungsmitteln/Reinigungsmitteln). Inline-Spektroskopie, Trübungs-, pH- und Redox-Überwachung sowie Kontrolle garantieren Konsistenz während des gesamten Prozesses.

Durch das Polieren wird die endgültige Reinheit erreicht.

Die Wissenschaftler verwenden die Größenausschlusschromatographie und die Tangentialflussfiltration , um Spurenverunreinigungen – Viruspartikel, bakterielle Krankheitserreger und Endotoxine – zu entfernen und den Reinigungspuffer gegen Formulierung eins auszutauschen.

Während die FTIR-Spektroskopie bei der Quantifizierung und Spezifizierung von Fraktionskomponenten während der Polierchromatographie helfen kann, überwacht sie Druck, Durchfluss, Leitfähigkeit, pH-Wert und Trübung in allen Bereichen der Poliereinheit – einschließlich der Puffervorbereitung, des Versprechens für Produktsicherheit und Qualität.