Buone pratiche di pipettaggio: risultati migliori grazie alla formazione e al supporto

La maggior parte delle applicazioni delle scienze biologiche include fasi critiche di manipolazione dei liquidi in cui il volume pipettato influenza direttamente il risultato. Se il pipettaggio non è coerente e accurato, tempo, denaro e materiale possono andare sprecati. Un pipettaggio accurato costituisce la base di un lavoro riproducibile, essenziale per generare dati significativi.

Il primo passo per migliorare l'accuratezza del pipettaggio consiste nello scegliere il giusto tipo di pipetta e l'intervallo di volume corretto. Per quanto riguarda le dimensioni, scegliere la pipetta con il volume più basso che si adatta al volume che si sta pipettando. Ad esempio, se si pipettano 2 μl e si dispone di una pipetta da 5 μl e di una pipetta da 20 μl, si otterrà una migliore precisione utilizzando la pipetta da 5 μl. 

Dai un'occhiata a questo white paper sulla scelta delle pipette per capire quale pipetta funziona meglio per il liquido e altri fattori unici per la tua situazione: Selezione della pipetta giusta

Una volta che avete lo strumento giusto, mettete in pratica la vostra buona tecnica di pipettaggio. Impostate un programma di test di routine per massimizzare la fiducia nei vostri risultati nel tempo e, come con qualsiasi strumento di precisione, assicuratevi di istituire un regime di assistenza e calibrazione regolare ed esperto.

Il modo più semplice per verificare rapidamente l'accuratezza di una pipetta può essere lo SmartCheck Rainin. Scopri di più su mt.com/SmartCheck 

La scelta della pipetta giusta implica la valutazione delle vostre esigenze. Innanzitutto, che tipo di campioni state pipettando? Sono acquosi? Oppure sono viscosi, volatili, schiumogeni, corrosivi o pericolosi? Per liquidi acquosi e quasi acquosi, le pipette a spostamento d'aria più comuni (chiamate anche pipette "a cuscino d'aria") sono una buona scelta. Per liquidi viscosi, volatili e altri tipi insoliti, una pipetta a spostamento positivo sarebbe una scelta migliore sia per l'accuratezza che per la sicurezza. 

Quale volume pipettate? Quanti campioni sono necessari per trasferire da un recipiente all'altro? Dai un'occhiata a questo white paper sulla scelta delle pipette per capire quale pipetta funziona meglio a seconda del liquido e di altri fattori unici per la tua situazione.

Il pipettaggio dei volumi più piccoli possibili richiede strumenti e tecniche specializzate. Una pipetta a ripetizione può essere la scelta migliore per erogare ripetutamente volumi fino a 100 nL. Un'altra pipetta può funzionare anche per poche erogazioni. Assicurarsi di utilizzare la pipetta di dimensioni più piccole che possa contenere il volume che si desidera pipettare. 

A volumi molto bassi, la tecnica di pipettaggio ha un impatto proporzionalmente maggiore sull'accuratezza e sulla riproducibilità. La profondità di immersione, l'angolo di pipettaggio e la velocità di aspirazione sono importanti da controllare. Il poster sulle tecniche di pipettaggio di Rainin può essere d'aiuto.

Rainin NanoRep eroga aliquote ripetute fino a 100 nL. Scopri di più qui: mt.com/NanoRep

Il fattore più importante per un pipettaggio multicanale accurato e riproducibile è l'integrità del sigillo per ogni canale della pipetta. Ciò significa che ogni punta si adatta perfettamente a ogni albero senza perdite d'aria. Diversi produttori raggiungono questo obiettivo in modi diversi, con diversi livelli di ergonomia e consistenza della sigillatura. I puntali per pipette LTS LiteTouch System di Rainin richiedono la minima forza per il caricamento e l'espulsione dal multicanale e sigillano sempre in modo uniforme.

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Durante l'aspirazione, tenere la pipetta il più vicino possibile alla verticale, evitando qualsiasi angolo superiore a 20° rispetto all'asse Y. Durante l'erogazione, se si tocca la parete del recipiente di destinazione per estrarre completamente tutto il liquido dalla punta, è possibile superare l'angolo di 20°.

Il pipettaggio diretto è la tecnica di pipettaggio standard e la scelta migliore per i campioni acquosi. Per i campioni viscosi e volatili, il pipettaggio inverso offre una migliore precisione.

Per far avanzare la pipetta, spingere lo stantuffo verso il basso fino al primo arresto tenendo la pipetta all'esterno del liquido. Quindi, immergi la punta a 2-10 mm di profondità nel liquido con cui stai lavorando, non più in profondità. Rilasciare lentamente lo stantuffo fino alla massima estensione per aspirare l'intero volume del liquido. Per erogare nel recipiente di destinazione, spostare la pipetta nel recipiente, quindi premere lo stantuffo a una velocità uniforme attraverso il primo arresto fino al secondo arresto, fino all'arresto dello stantuffo. Con lo stantuffo completamente premuto, trascinare leggermente la punta della pipetta lungo la parete del recipiente per "toccare". Questo aiuta a erogare completamente l'intero volume del liquido. Rilasciare lo stantuffo, espellere il puntale della pipetta, caricare un nuovo puntale della pipetta e ripetere.

Per invertire la pipetta, spingere lo stantuffo fino in fondo attraverso il primo arresto fino al secondo arresto, fino all'arresto dello stantuffo. Quindi, immergere la punta nel liquido e rilasciare lentamente e uniformemente lo stantuffo per aspirare. Passare al recipiente ricevente e premere lo stantuffo SOLO FINO AL PRIMO ARRESTO per erogare il volume corretto. Un piccolo volume residuo rimarrà nel puntale della pipetta. Spostare la pipetta su un recipiente di erogazione e premere lo stantuffo fino al secondo arresto, chiamato anche arresto di "scoppio", per rilasciare il liquido rimanente. 

Rilasciare lo stantuffo, espellere il puntale della pipetta, caricare un nuovo puntale della pipetta e ripetere.

Una pipetta a spostamento d'aria può essere utilizzata per pipettare liquidi leggermente viscosi, compreso il sangue. Per ottenere la massima precisione, utilizzare la tecnica di pipettaggio inverso descritta sopra. Per liquidi più viscosi, come il glicerolo all'85% o il Triton X-100, una pipetta a spostamento positivo offre la migliore precisione e consistenza.

I liquidi leggermente volatili come l'etanolo possono essere pipettati con una pipetta a spostamento d'aria utilizzando la tecnica di pipettaggio inverso sopra menzionata. Tuttavia, le pipette a spostamento positivo sono una scelta migliore per i liquidi volatili. 

Se si utilizza una pipetta a spostamento d'aria, presciacquare il puntale della pipetta (aspirare ed erogare) almeno cinque volte prima di pipettare il volume. In questo modo si equilibra l'aria all'interno della pipetta, rallentando la velocità di evaporazione del liquido. La rapida evaporazione dei liquidi volatili espande l'aria all'interno di una pipetta e spinge il liquido fuori dal puntale senza esercitare alcuna pressione sullo stantuffo, riducendo così l'erogazione accurata del volume.

I liquidi volatili come l'acetonitrile sono generalmente gestiti meglio con una pipetta a spostamento positivo.

Sì, il pipettaggio con pipette a spostamento d'aria può creare aerosol. Gli aerosol possono salire all'interno della pipetta e contaminare le pareti interne e il pistone. L'aerosolizzazione si verifica più facilmente quando lo stantuffo viene rilasciato troppo rapidamente durante l'aspirazione e può avvenire anche nella direzione opposta all'esterno della pipetta con un'erogazione troppo rapida. 

Per ridurre al minimo gli aerosol, aspirare ed erogare lentamente e in modo uniforme. Usa punte filtrate. 

Le pipette a spostamento positivo utilizzano puntali a siringa che impediscono l'aerosolizzazione. Una pipetta a spostamento positivo è la scelta migliore per il pipettaggio di liquidi pericolosi e di qualsiasi liquido con elevata viscosità o volatilità.

Liquidi molto freddi o caldi modificano la pressione dell'aria all'interno delle pipette a spostamento d'aria, causando un pipettaggio impreciso. 

Le pipette a spostamento positivo, con puntali a siringa che non hanno sacche d'aria tra il liquido e il pistone, non sono influenzate dalle diverse temperature dei liquidi. Le pipette a spostamento positivo forniscono risultati accurati con liquidi non a temperatura ambiente.

Se è necessario pipettare un liquido molto caldo o freddo con una pipetta a spostamento d'aria, non risciacquare preventivamente il puntale della pipetta: questa è in genere la migliore pratica per la massima precisione. Invece, aspirare ed erogare rapidamente per ridurre al minimo l'effetto della temperatura del liquido sul traferro interno della pipetta.

Per evitare bolle e formazione di schiuma durante il pipettaggio, non immergere il puntale per più di 10 mm nel serbatoio del liquido e aspirare lentamente.

Il pipettaggio inverso offre una protezione aggiuntiva perché, prima dell'aspirazione, si preme completamente lo stantuffo fino al 2° arresto, in modo che non vi sia alcuna possibilità di iniettare aria nel campione liquido. Per ulteriori informazioni sul pipettaggio inverso, visitare questa pagina. 

Una pipetta a spostamento positivo non crea bolle o schiuma quando interagisce con il liquido perché la sua punta a siringa non presenta aria con cui il liquido possa interagire.

Decontaminare una pipetta strofinandola con un panno umido e un detergente come l'isopropanolo o una soluzione di candeggina al 10%. Evitare la finestra di plastica trasparente del micrometro.

L'autoclave può essere un'altra opzione, ma controllate le specifiche dello strumento della vostra pipetta. Se è autoclavabile, l'intero strumento è autoclavato o solo l'estremità liquida?  Spesso, solo l'estremità liquida può essere sterilizzata in autoclave.

Per ulteriori informazioni sulla pulizia di una pipetta, consulta il poster Pulizia di una pipetta .

La taratura è la misurazione controllata e documentata del tasso di errore sistematico (accuratezza) e del tasso di errore casuale (precisione) di una pipetta. In molti ambienti di laboratorio, le prestazioni delle pipette devono essere regolarmente testate e documentate dalla legge in condizioni specifiche certificate da un organismo accreditato. 

I fornitori certificati ISO calibrano le pipette in un ambiente controllato. I risultati sono documentati in modo sicuro su un certificato di taratura, che si aggiunge a una cronologia delle prestazioni pronta per l'audit per ogni strumento. Quando sono necessarie regolazioni, i laboratori di taratura certificati ISO forniscono un servizio esperto con parti e lubrificanti consigliati dal produttore. 

Rainin e METTLER TOLEDO sono la più grande organizzazione di servizi di pipettatura al mondo, con tempi di consegna rapidi dalle opzioni di assistenza per posta e in loco. I laboratori di assistenza sono certificati ISO 17025 e le procedure seguono l'aggiornamento del 2022 alla ISO 8655. 

L'accuratezza delle pipette, o esattezza, come viene chiamata ora, è la differenza tra il volume medio di tutte le misurazioni (4-10 misurazioni) e il volume impostato. 

La precisione è la deviazione standard di tutte le misurazioni eseguite. Quanto sono distanti da ogni lettura le altre?

L'incertezza di una pipetta è il termine quantitativo che indica la sua accuratezza complessiva. È una combinazione di esattezza (una misura dell'errore sistematico) e precisione (una misura dell'errore casuale). 

L'equazione per l'incertezza è: 

Incertezza = Errore sistematico + Errore casuale * k. k (fattore di copertura o Z-score) dipende dal numero di misurazioni. k=3,31 per quattro misurazioni e 2 per dieci misurazioni.

Conservare le pipette in verticale, appese a uno scaffale o a un supporto per pipette. Mantenere le pipette pulite e prive di contaminanti. Tenere chiusi i rack dei puntali delle pipette.