Kako pravilno uporabim pipeto?

Natančno pipetiranje zahteva obvladovanje nekaj osnovnih tehnik. Te vključujejo:

  • Potopite konico pipete na pravilno globino v tekočino glede na velikost konice in vrsto tekočine
  • Predhodno izpiranje sveže konice s tekočino, ki jo želite aspirirati
  • Pipeto držite pod pravim kotom (največ 20° od navpičnice) 
  • Aspiracija in doziranje s hitrostjo, ki zmanjšuje nastajanje mehurčkov
  • Odmori, da se prepreči prekomerno segrevanje instrumenta v roki, ki je lahko posledica dolgotrajne uporabe in vpliva na natančnost s širjenjem zraka v pipeti


Zakaj je natančno pipetiranje pomembno?

Večina aplikacij bioznanosti vključuje kritične korake ravnanja s tekočinami, kjer pipetirani volumen neposredno vpliva na rezultat. Če pipetiranje ni dosledno in natančno, lahko čas, denar in material zapravijo. Natančno pipetiranje je temelj ponovljivega dela, ki je bistveno za ustvarjanje pomembnih podatkov.

Kako izboljšam natančnost pipetiranja in zmanjšam število napak?

Prvi korak k izboljšanju natančnosti pipetiranja je izbira prave vrste pipete in ustreznega prostorninskega območja. Za velikost izberite pipeto z najmanjšo prostornino, ki bo ustrezala prostornini, ki jo pipetirate. Na primer, če pipetirate 2 μl in imate 5 μl pipeto in 20 μl pipeto, boste dobili boljšo natančnost z uporabo 5 μL. 

Oglejte si to belo knjigo o izbiri pipete, da boste razumeli, katera pipeta najbolje deluje za tekočino in druge dejavnike, ki so značilni za vašo situacijo: Izbira prave pipete

Ko imate pravi instrument, uporabite svojo dobro tehniko pipetiranja v praksi. Nastavite rutinski urnik testiranja, da povečate zaupanje v svoje rezultate skozi čas, in, tako kot pri vseh natančnih instrumentih, poskrbite, da boste uvedli redno, strokovno službo in režim umerjanja.

Najlažji način za hitro testiranje natančnosti pipete je lahko Rainin SmartCheck. Izvedite več na mt.com/SmartCheck 

Kako vem, katero pipeto naj uporabim?

Izbira prave pipete vključuje oceno vaših zahtev. Prvič, kakšne vzorce pipetirate? Ali so vodne? Ali pa so viskozni, hlapni, peneči, jedki ali nevarni? Za vodne in skoraj vodne tekočine so najpogostejše pipete, ki izpodrivajo zrak (imenovane tudi pipete z zračno blazino), dobra izbira. Za viskozne, hlapne in druge nenavadne vrste tekočin bi bila pipeta s pozitivnim premikom boljša izbira za natančnost in varnost. 

Kakšen volumen boste pipetirali? Koliko vzorcev morate prenesti iz enega plovila v drugo? Oglejte si to belo knjigo o izbiri pipete , da boste razumeli, katera pipeta najbolje deluje glede na tekočino in druge dejavnike, ki so edinstveni za vašo situacijo.

Kako pipetirate majhne količine?

Pipetiranje najmanjših možnih količin vključuje specializirane instrumente in tehnike. Pipeta repetitorja je lahko najboljša izbira za ponavljajoče se odmerjanje volumnov do 100 nl. Druga pipeta lahko deluje tudi za le nekaj razdelkov. Uporabite pipeto najmanjše velikosti, ki bo ustrezala volumnu, ki ga želite pipetirati. 

Pri zelo majhnih količinah ima tehnika pipetiranja sorazmerno večji vpliv na natančnost in obnovljivost. Globina potopitve, kot pipetiranja in hitrost aspiracije so pomembni za nadzor. Plakat Pipetting Techniques podjetja Rainin vam lahko pomaga.

Rainin NanoRep ponavlja alikvote do 100 nl. Več o tem lahko preberete tukaj: mt.com/NanoRep

Kako uporabljam večkanalno pipeto?

Najpomembnejši dejavnik pri natančnem, ponovljivem večkanalnem pipetiranju je celovitost tesnila za vsak kanal pipete. To pomeni, da se vsaka konica popolnoma prilega vsaki gredi brez puščanja zraka. Različni proizvajalci to dosegajo na različne načine, z različno ergonomsko enostavnostjo in stopnjami tesnjenja. Konice pipet sistema LTS LiteTouch iz Rainina zahtevajo najmanjšo silo za nalaganje in izmet iz večkanalnosti in vsakič dosledno tesnijo.

Kliknite tukaj za ogled široke palete večkanalnih pipet Rainin.

Kakšen je pravilen način držanja pipete?

Pri privijanju držite pipeto čim bližje navpični in se izogibajte kotu, ki je večji od 20° od osi y. Če se pri doziranju dotikate stene ciljne posode, da bi v celoti potegnili vso tekočino iz konice, je v redu, da presežete kot 20°.

Kaj je pipetiranje naprej in nazaj?

Sprednje pipetiranje je standardna tehnika pipetiranja in najboljša izbira za vodne vzorce. Pri viskoznih in hlapnih vzorcih povratno pipetiranje zagotavlja boljšo natančnost.

Za pipeto naprej potisnite bat navzdol do prvega postanka, medtem ko pipeto držite zunaj tekočine. Nato konico potopite 2–10 mm globoko v tekočino, s katero delate – nič globlje. Bat počasi spustite do popolnega iztegljaja, da si iztisnete celoten volumen tekočine. Za sprostitev v ciljno posodo premaknite pipeto v posodo, nato enakomerno pritisnite bat skozi prvi postanek vse do drugega postanka – vse do bata. Ko je bat popolnoma pritisnjen, rahlo povlecite konico pipete navzgor po steni posode, da se "dotaknete". To pomaga popolnoma razpršiti celoten volumen tekočine. Spustite bat, izvrzite vrh pipete, naložite novo konico pipete in ponovite.

Za vzvratno pipeto potisnite bat vse do konca skozi prvi postanek do drugega postanka – vse do bata. Nato konico potopite v tekočino ter počasi in enakomerno spustite bat za aspiracijo. Premaknite se do sprejemne posode in pritisnite bat SAMO DO PRVEGA POSTANKA, da razpršite pravilno prostornino. Majhen preostali volumen ostane v konici pipete. Pipeto premaknite čez posodo za razprševanje in pritisnite bat do konca poti navzdol do drugega postanka, imenovanega tudi zaustavitev "razpočenja", da sprostite preostalo tekočino. 

Spustite bat, izvrzite vrh pipete, naložite novo konico pipete in ponovite.

Kako pipetiram viskozne tekočine?

Pipeta za premikanje zraka se lahko uporablja za pipetiranje rahlo viskoznih tekočin, vključno s krvjo. Da bi dosegli največjo natančnost, uporabite zgoraj opisano tehniko povratnega pipetiranja. Za bolj viskozne tekočine, kot sta 85% glicerol ali Triton X-100, pipeta s pozitivnim izpodrivom ponuja najboljšo natančnost in konsistenco.

Kako pipetiram hlapne tekočine?

Rahlo hlapne tekočine, kot je etanol, se lahko pipetira s pipeto za izpodrivanje zraka z zgoraj navedeno tehniko povratnega pipetiranja. Vendar pa so pipete s pozitivnim premikom boljša izbira za hlapne tekočine. 

Če uporabljate pipeto z izpodrivom zraka, konico pipete (aspirirajte in razpršite) predhodno sperite vsaj petkrat, preden pipetirate prostornino. To uravnoteži zrak v pipeti in upočasni hitrost izhlapevanja tekočine. Hitro izhlapevanje hlapnih tekočin razširi zrak v pipeto in potisne tekočino iz konice brez pritiska na bat, kar zmanjša natančno dovajanje volumna.

S hlapnimi tekočinami, kot je acetonitril, je na splošno bolje ravnati s pipeto s prisilnim izpodrivom.

Ali pipetiranje ustvarja aerosole?

Da, pipetiranje s pipetami s pipetami s premikom zraka lahko ustvari aerosole. Aerosoli se lahko dvignejo v notranjost pipete in onesnažijo notranje stene in bat. Aerosolizacija se pojavi hitreje, ko se bat med aspiracijo sprosti prehitro in se lahko pojavi tudi v nasprotni smeri zunaj pipete s prehitrim doziranjem. 

Da bi zmanjšali aerosole, aspirirajte in razdeljujte počasi in enakomerno. Uporabite filtrirane nasvete. 

Pipete s pozitivnim premikom uporabljajo nasvete v obliki brizge, ki preprečujejo aerosolizacijo. Pipeta s prisilnim premikom je najboljša izbira za pipetiranje nevarnih tekočin in tekočine s povišano viskoznostjo ali hlapnostjo.

Kako temperatura tekočin vpliva na pipetiranje?

Zelo hladne ali vroče tekočine spreminjajo zračni tlak v pipetah, ki izpodrivajo zrak, kar vodi do netočnega pipetiranja. 

Na pipete s pozitivnim premikom s konicami brizg, ki nimajo zračnega žepa med tekočino in batom, ne vplivajo različne temperature tekočin. Pipete s pozitivnim premikom bodo prinesle natančne rezultate s tekočinami, ki niso sobne temperature.

Če morate s pipeto, ki izpodriva zrak, pipetirati zelo vročo ali hladno tekočino, konice pipete ne izpirajte predhodno – to je običajno najboljša praksa za največjo natančnost. Namesto tega aspirirajte in hitro razdeljujte, da zmanjšate učinek temperature tekočine na notranjo zračno režo pipete.

Kako se izognem mehurčkom pri pipetiranju?

Da bi se izognili mehurčkom in penjenju pri pipetiranju, konice ne potopite več kot 10 mm v rezervoar za tekočino in počasi aspirirajte.

Povratno pipetiranje nudi dodatno zaščito, saj pred napenjanjem popolnoma pritisnete bat na 2. stopalo, tako da ni možnosti za vbrizgavanje zraka v tekoči vzorec. Za več informacij o povratnih pipetiranjih obiščite to stran

Pipeta s pozitivnim premikom pri medsebojnem delovanju s tekočino ne ustvarja mehurčkov ali pene, ker konica brizge ne predstavlja zraka, s katerim bi tekočina lahko medsebojno delovala.

Kateri je najboljši način za dekontaminacijo pipete?

Dekontaminirajte pipeto tako, da jo obrišete z mokro krpo in detergentom, kot je izopropanol ali 10% raztopina belila. Izogibajte se prozornemu plastičnemu oknu mikrometra.

Druga možnost je lahko avtoklaviranje, vendar preverite specifikacije instrumenta vaše pipete. Če je avtoklaviran, ali je celoten instrument avtoklaviran ali samo tekoči konec?  Pogosto se lahko avtoklavira samo tekoči konec.

Za več informacij o čiščenju pipete si oglejte plakat Čiščenje pipete .

Kako umerim pipeto?

Umerjanje je nadzorovana in dokumentirana meritev sistematične stopnje napake (točnost) pipete in stopnje naključnih napak (natančnost). V številnih laboratorijskih okoljih je treba učinkovitost pipete redno testirati in dokumentirati z zakonom pod posebnimi pogoji, ki jih potrdi akreditirani organ. 

Ponudniki s certifikatom ISO umerjajo pipete v nadzorovanem okolju. Rezultati so varno dokumentirani na certifikatu o umerjanju, s čimer se za vsak instrument doda zgodovina uspešnosti, pripravljena za revizijo. Kadar so potrebne prilagoditve, kalibracijski laboratoriji s certifikatom ISO zagotavljajo strokovne storitve z deli in mazivi, ki jih priporoča proizvajalec. 

Rainin in METTLER TOLEDO sta največja svetovna organizacija za pipete s hitrim preobratom od možnosti poštnih storitev in storitev na kraju samem. Servisni laboratoriji imajo certifikat ISO 17025, postopki pa sledijo posodobitvi ISO 8655 iz leta 2022. 

Kako izračunam točnost in natančnost pipete?

Točnost pipete – ali pravilnost, kot jo imenujemo zdaj – je razlika med srednjo prostornino vseh meritev (4–10 meritev) in nastavljeno prostornino. 

Natančnost je standardni odklon vseh opravljenih meritev. Kako daleč od vsakega branja so drugi?

Kako izračunate negotovost pipete?

Negotovost pipete je kvantitativni izraz za njeno splošno natančnost. Gre za kombinacijo pravilnosti (merilo sistematične napake) in natančnosti (merilo naključne napake). 

Enačba za negotovost je: 

Negotovost = sistematična napaka + naključna napaka * k. k (faktor pokritosti ali Z-rezultat) je odvisna od števila meritev. k = 3,31 za štiri meritve in 2 za deset meritev.

Kateri je najboljši način za shranjevanje pipete?

Pipete shranjujte navpično, obešene s police ali stojala za pipete. Pipete naj bodo čiste in brez onesnaževalcev. Stojala za konice pipete naj bodo zaprta.