Kako pravilno uporabljam pipeto?

Za natančno pipetiranje je potrebno obvladati nekaj osnovnih tehnik. Te vključujejo:

  • Potopitev konice pipete na ustrezno globino v tekočino, glede na velikost konice in vrsto tekočine
  • Predhodno izpiranje sveže konice s tekočino, ki jo želite vdihniti
  • Držite pipeto pod ustreznim kotom (ne več kot 20° od navpičnice) 
  • Sesanje in doziranje s hitrostjo, ki zmanjšuje nastajanje mehurčkov
  • Vzemite si odmore, da se izognete prekomernemu segrevanju instrumenta, ki je lahko posledica dolgotrajne uporabe in vpliva na natančnost s širjenjem zraka v pipeti


Zakaj je natančno pipetiranje pomembno?

Večina aplikacij v znanosti o življenju vključuje kritične korake ravnanja s tekočinami, pri katerih pipetirana prostornina neposredno vpliva na rezultat. Če pipetiranje ni dosledno in natančno, lahko čas, denar in material propadejo. Natančno pipetiranje je temelj ponovljivega dela, ki je bistvenega pomena za ustvarjanje pomembnih podatkov.

Kako izboljšam natančnost pipetiranja in zmanjšam število napak?

Prvi korak k izboljšanju natančnosti pipetiranja je izbira prave vrste pipete in ustreznega obsega volumna. Za velikost izberite pipeto z najmanjšo prostornino, ki bo ustrezala volumnu, ki jo pipetirate. Če na primer pipetirate 2 μl in imate 5 μl pipeto in 20 μl pipeto, boste s 5 μl dobili boljšo natančnost. 

Oglejte si to belo knjigo o izbiri pipet, da boste razumeli, katera pipeta je najprimernejša za tekočino in druge dejavnike, ki so edinstveni za vašo situacijo: Izbira prave pipete

Ko imate pravi instrument, uporabite svojo dobro tehniko pipetiranja. Nastavite rutinski urnik testiranja, da boste sčasoma povečali zaupanje v svoje rezultate, in kot pri vsakem natančnem instrumentu poskrbite, da boste uvedli redno, strokovno storitev in režim umerjanja.

Najlažji način za hitro preverjanje natančnosti pipete je Rainin SmartCheck. Več o tem na mt.com/SmartCheck 

Kako vem, katero pipeto uporabiti?

Izbira prave pipete vključuje oceno vaših zahtev. Prvič, kakšne vzorce pipetirate? Ali so vodne? Ali pa so viskozni, hlapni, peneči, jedki ali nevarni? Za vodne in skoraj vodne tekočine so najpogostejše pipete z zračnim izpodrivom (imenovane tudi pipete z zračno blazino). Za viskozne, hlapne in druge nenavadne vrste tekočin bi bila pipeta s pozitivnim izpodrivom boljša izbira za natančnost in varnost. 

Kakšen volumen boste pipetirali? Koliko vzorcev potrebujete za prenos iz enega plovila v drugega? Oglejte si to belo knjigo o izbiri pipet, da boste razumeli, katera pipeta je najboljša, odvisno od tekočine in drugih dejavnikov, ki so značilni za vašo situacijo.

Kako pipetirate majhne količine?

Pipetiranje najmanjših možnih količin vključuje specializirane instrumente in tehnike. Repetitna pipeta je morda najboljša izbira za ponavljajoče se odmerjanje volumnov do 100 nL. Druga pipeta lahko deluje tudi za le nekaj odmerkov. Uporabite najmanjšo pipeto, ki bo ustrezala želeni prostornini. 

Pri zelo majhnih količinah ima tehnika pipetiranja sorazmerno večji vpliv na natančnost in obnovljivost. Globina potopitve, kot pipetiranja in hitrost vdihavanja so pomembni za nadzor. Plakat Tehnike pipetiranja podjetja Rainin vam lahko pomaga.

Rainin NanoRep ponavlja alikvote do 100 nL. Več o tem lahko preberete tukaj: mt.com/NanoRep

Kako uporabljam večkanalno pipeto?

Najpomembnejši dejavnik pri natančnem in ponovljivem večkanalnem pipetiranju je celovitost tesnila za vsak kanal pipete. To pomeni, da se vsaka konica popolnoma prilega vsaki gredi brez uhajanja zraka. Različni proizvajalci to dosegajo na različne načine, z različno ergonomsko enostavnostjo in stopnjo doslednosti tesnjenja. Konice za pipete LTS LiteTouch System podjetja Rainin zahtevajo najmanjšo silo za nalaganje in izmet iz večkanalnega sistema in se vedno dosledno zatesnijo.

Kliknite tukaj, če si želite ogledati široko paleto večkanalnih pipet Rainin.

Kakšen je pravilen način držanja pipete?

Pri sesanju držite pipeto čim bližje navpičnici, pri čemer se izogibajte kotu, ki je večji od 20° od osi Y. Če se pri razdeljevanju dotaknete stene ciljne posode, da bi popolnoma izvlekli vso tekočino iz konice, je v redu, da presežete kot 20 °.

Kaj je pipetiranje naprej in vzvratno?

Pipetiranje naprej je standardna tehnika pipetiranja in najboljša izbira za vodne vzorce. Pri viskoznih in hlapnih vzorcih povratno pipetiranje zagotavlja boljšo natančnost.

Če želite pipeto naprej, potisnite bat navzdol do prvega koraka, medtem ko držite pipeto zunaj tekočine. Nato potopite konico 2-10 mm globoko v tekočino, s katero delate – nič globlje. Počasi sprostite bat do polnega iztezanja, da vdihnete celoten volumen tekočine. Če želite brizgati v ciljno posodo, premaknite pipeto v posodo, nato pa z enakomerno hitrostjo pritisnite bat skozi prvo zaustavitev vse do druge zaustavitve – do konca bata. Ko je bat popolnoma pritisnjen, rahlo povlecite konico pipete navzgor po steni posode, da se »dotaknete«. To pomaga popolnoma razdeljevati celoten volumen tekočine. Spustite bat, izvrzite konico pipete, naložite novo konico pipete in ponovite.

Če želite vzvratno pipeto, potisnite bat do konca navzdol skozi prvo zaustavitev do druge zaustavitve – do konca bata. Nato potopite konico v tekočino in počasi in enakomerno sprostite bat za aspiracijo. Premaknite se do sprejemne posode in pritisnite bat SAMO DO PRVEGA STANJA, da se dozira pravilen volumen. Majhen preostali volumen ostane v konici pipete. Pipeto premaknite čez posodo za zavrženje in pritisnite bat do konca poti navzdol do druge postaje, imenovane tudi zaustavitev za izpihanje, da sprostite preostalo tekočino. 

Spustite bat, izvrzite konico pipete, naložite novo konico pipete in ponovite.

Kako pipetirati viskozne tekočine?

Za pipetiranje rahlo viskoznih tekočin, vključno s krvjo, se lahko uporablja zračna pipeta. Da bi dosegli največjo natančnost, uporabite zgoraj opisano tehniko povratnega pipetiranja. Za bolj viskozne tekočine, kot sta 85-odstotni glicerol ali Triton X-100, pipeta s pozitivnim izpodrivom zagotavlja najboljšo natančnost in konsistenco.

Kako pipetirati hlapne tekočine?

Rahlo hlapne tekočine, kot je etanol, se lahko pipetirajo s pipeto za zračni premik z zgoraj omenjeno tehniko povratnega pipetiranja. Vendar pa so pipete s pozitivnim izpodrivom boljša izbira za hlapne tekočine. 

Če uporabljate pipeto z zračnim izpodrivom, pred pipetiranjem volumena vsaj petkrat sperite konico pipete (aspirirajte in oddejte). To uravnoteži zrak v pipeti in upočasni hitrost izhlapevanja tekočine. Hitro izhlapevanje hlapnih tekočin razširi zrak v pipeti in potisne tekočino iz konice, ne da bi bil pritisk na bat, kar zmanjša natančno dovajanje prostornine.

S hlapnimi tekočinami, kot je acetonitril, je na splošno bolje ravnati s pipeto s prisilnim izpodrivom.

Ali pipetiranje ustvarja aerosole?

Da, pipetiranje s pipetami za zračni premik lahko ustvari aerosole. Aerosoli se lahko dvignejo v notranjost pipete in onesnažijo notranje stene in bat. Aerosolizacija se pogosteje pojavi, če se bat med aspiracijo sprosti prehitro, lahko pa se pojavi tudi v nasprotni smeri zunaj pipete s prehitrem odmerjanjem. 

Da bi zmanjšali aerosole, aspirirajte in razdeljujte počasi in enakomerno. Uporabite filtrirane namige. 

Pipete s pozitivnim premikom uporabljajo konice v obliki brizge, ki preprečujejo aerosolizacijo. Pipeta s pozitivnim izpodrivom je najboljša izbira za pipetiranje nevarnih tekočin in vseh tekočin s povišano viskoznostjo ali hlapnostjo.

Kako temperatura tekočin vpliva na pipetiranje?

Zelo hladne ali vroče tekočine spremenijo zračni tlak v pipetah za izpodrivanje zraka, kar povzroči nenatančno pipetiranje. 

Na pipete s pozitivnim izpodrivom s konicami v obliki brizge, ki nimajo zračnega žepa med tekočino in batom, ne vplivajo različne temperature tekočin. Pipete s pozitivnim izpodrivom zagotavljajo natančne rezultate s tekočinami, ki niso sobne temperature.

Če morate pipetirati zelo vročo ali hladno tekočino s pipeto za izpodrivanje zraka, konice pipete ne sperite predhodno – to je običajno najboljša praksa za največjo natančnost. Namesto tega hitro odsihnite in razdeljujte, da zmanjšate vpliv temperature tekočine na notranjo zračno režo pipete.

Kako se izognem mehurčkom pri pipetiranju?

Da bi se izognili mehurčkom in penjenju med pipetiranjem, konice ne potapljajte več kot 10 mm v rezervoar za tekočino in počasi odsihnite.

Povratno pipetiranje zagotavlja dodatno zaščito, saj pred sesanjem bat do konca popolnoma pritisnete na 2. stop, tako da ni možnosti, da bi v tekoči vzorec vbrizgali zrak. Za več informacij o obratnem pipetiranju obiščite to stran

Pipeta s pozitivnim premikom ne ustvarja mehurčkov ali pene pri interakciji s tekočino, ker njena konica v obliki brizge ne predstavlja zraka, s katerim bi tekočina lahko delovala.

Kakšen je najboljši način za dekontaminacijo pipete?

Dekontaminirajte pipeto tako, da jo obrišete z mokro krpo in detergentom, kot je izopropanol ali 10% raztopina belila. Izogibajte se prozornemu plastičnemu oknu mikrometra.

Avtoklaviranje je morda še ena možnost, vendar preverite specifikacije instrumenta pipete. Če je mogoče avtoklavirati, ali je celoten instrument avtoklaviran ali samo tekoči konec?  Pogosto se lahko avtoklavira samo tekoči konec.

Če želite več informacij o čiščenju pipete, si priskrbite plakat Čiščenje pipete .

Kako umerim pipeto?

Kalibracija je nadzorovano in dokumentirano merjenje stopnje sistematične napake (natančnost) in stopnje naključnih napak (natančnost) pipete. V številnih laboratorijskih okoljih je treba učinkovitost pipet redno preizkušati in dokumentirati z zakonom pod posebnimi pogoji, ki jih je potrdil akreditirani organ. 

Ponudniki s certifikatom ISO umerjajo pipete v nadzorovanem okolju. Rezultati so varno dokumentirani na kalibracijskem certifikatu, ki se doda zgodovini učinkovitosti, pripravljene za revizijo, za vsak instrument. Kadar so potrebne prilagoditve, kalibracijski laboratoriji s certifikatom ISO zagotavljajo strokovne storitve z deli in mazivi, ki jih priporoča proizvajalec. 

Rainin in METTLER TOLEDO sta največja svetovna organizacija za servisiranje pipet s hitrimi možnostmi pošiljanja po pošti in servisa na kraju samem. Servisni laboratoriji imajo certifikat ISO 17025, postopki pa sledijo posodobitvi ISO 8655 iz leta 2022. 

Kako izračunam točnost in natančnost pipete?

Natančnost pipet - ali resničnost, kot jo imenujemo zdaj - je razlika med povprečno prostornino vseh meritev (4-10 meritev) in nastavljeno prostornino. 

Natančnost je standardni odklon vseh opravljenih meritev. Kako daleč od vsakega branja so druge?

Kako izračunate negotovost pipete?

Negotovost pipete je kvantitativni izraz za njeno splošno točnost. Gre za kombinacijo resničnosti (merilo sistematične napake) in natančnosti (mera naključne napake). 

Enačba za negotovost je: 

Negotovost = sistematična napaka + naključna napaka * k. k (faktor pokritosti ali Z-rezultat) je odvisen od števila meritev. k = 3,31 za štiri meritve in 2 za deset meritev.

Kateri je najboljši način shranjevanja pipete?

Pipete shranjujte navpično, obešene na polico ali stojalo za pipete. Pipete naj bodo čiste in brez onesnaževalcev. Stojala za konice pipet naj bodo zaprta.