Dobra Praktyka Pipetowania: lepsze wyniki dzięki szkoleniom i wsparciu

Większość zastosowań w branży biomedycznej obejmuje krytyczne etapy obsługi cieczy, w których objętość pipety ma bezpośredni wpływ na wynik. Jeśli pipetowanie nie jest spójne i dokładne, Twoje zasoby mogą pójść na marne. Dokładne pipetowanie stanowi podstawę powtarzalnej pracy, która jest niezbędna do generowania znaczących danych.

Pierwszym krokiem w kierunku udoskonalenia dokładność pipetowania jest wybór odpowiedniego typu pipety i odpowiedniego zakresu objętości. Aby wybrać rozmiar, wybierz pipetę o najmniejszej pojemności, która pomieści objętość pipetowania. Na przykład, jeśli pipetujesz 2 μl i masz pipetę 5 μl i pipetę 20 μl, uzyskasz lepszy dokładność z użyciem pipety 5 μl. 

Zapoznaj się z tym przewodnik na temat wyboru pipet, aby dowiedzieć się, która pipeta najlepiej sprawdzi się w przypadku cieczy oraz poznać inne czynniki specyficzne dla danej sytuacji: Wybór odpowiedniej pipety

Gdy masz już odpowiednie urządzenie, zastosuj swoją dobrą technikę pipetowania w praktyce. Ustaw rutynowe testy, aby zmaksymalizować zaufanie do wyników w czasie, i, jak w przypadku każdego urządzenia precyzyjnego, upewnij się, że wprowadziłeś regularną, ekspercką usługę i wzorcowanie schemat.

Najprostszym sposobem szybkiego przetestowania dokładność pipety może być Rainin SmartCheck. Dowiedz się więcej na mt.com/SmartCheck 

Wybór odpowiedniej pipety wymaga oceny wymagań. Po pierwsze, jakiego rodzaju próbki pipetujesz? Czy są wodniste? A może są lepkie, lotne, pieniące, żrące lub niebezpieczne? W przypadku cieczy wodnych i prawie wodnych dobrym wyborem są najpopularniejsze pipety tłokowe. W przypadku lepkich, lotnych i innych nietypowych typów cieczy lepszym wyborem pod względem dokładność i bezpieczeństwa byłaby pipeta wyporowa. 

Jaką objętość będziesz pipetować? Ile próbek trzeba przenieść z jednego naczynia do drugiego? Zapoznaj się z tym przewodnikiem na temat wyboru pipet aby dowiedzieć się która pipeta działa najlepiej w zależności od cieczy i innych czynników specyficznych dla danej sytuacji.

Pipetowanie najmniejszych możliwych objętości wymaga użycia specjalistycznych instrumentów i technik. Pipeta powtarzalna może być najlepszym wyborem do wielokrotnego dozowania objętości do 100 nl. Inna pipeta może również sprawdzić się przy kilku dozowaniach. Należy używać najmniejszej pipety która dostosuje się do objętości jakiej ma się pipetować. 

Przy bardzo małych objętościach technika pipetowania ma proporcjonalnie większy wpływ na dokładność i odtwarzalność. Głębokość zanurzenia, kąt pipetowania i szybkość zasysania są ważne do kontrolowania. Przydatny może okazać się plakat Rainin o technikach pipetowania .

Rainin pipeta NanoRep umożliwia wielokrotne dozowanie porcji o objętości zaledwie 100 nl. Więcej informacji można znaleźć na stronie: mt.com/NanoRep

Najważniejszym czynnikiem w dokładnym, powtarzalnym pipetowaniu wielokanałowym jest integralność pipety. Oznacza to że każda końcówka idealnie pasuje do każdego trzonu przy zerowym wycieku powietrza. Różni producenci osiągają to na różne sposoby, z różną łatwością ergonomii i poziomami uszczelnienia. 

Kliknij tutaj aby zapoznać się z bogatą ofertą pipet wielokanałowych Rainin.

Podczas zasysania trzymaj pipetę jak najbliżej pionu, unikając kąta większego niż 20° od osi Y. Podczas dozowania, jeśli dotykasz ściany naczynia docelowego, aby całkowicie wyciągnąć całą ciecz z końcówki, można przekroczyć kąt 20 °.

Pipetowanie do przodu to standardowa technika pipetowania i najlepszy wybór w przypadku próbek wodnych. W przypadku lepkich i lotnych próbek pipetowanie odwrotne zapewnia lepszą dokładność.

Aby przesunąć pipetę do przodu, naciśnij tłok do pierwszego oporu, jednocześnie trzymając pipetę poza cieczą. Następnie zanurz końcówkę na głębokość 2-10 mm w cieczy, z którą pracujesz - nie głębiej. Powoli zwolnić tłok do pełnego wyprostowania aby uzyskać całą objętość cieczy. Aby dozować do naczynia docelowego, przesuń pipetę do naczynia, a następnie wciśnij tłok z równomierną prędkością przez pierwszy przystanek aż do drugiego oporu — aż do drugiego oporu. Po całkowitym wciśnięciu tłoka lekko przeciągnij końcówkę pipety po ściance naczynia aby "wylądować". Pomaga to całkowicie dozować całą objętość cieczy. Zwolnij tłok, wysuń końcówka do pipety, załaduj nową końcówka do pipety i powtórz.

Aby wykonać pipetowanie wsteczne, należy popchnąć tłok aż do drugiego oporu aż do momentu jego odwrócenia. Następnie zanurz końcówkę w cieczy i powoli i równomiernie zwolnij tłok, aby zassać. Przejść do naczynia odbiorczego i nacisnąć tłok TYLKO DO PIERWSZEGO OPORU aby dozować odpowiednią objętość. W końcówka do pipety pozostanie niewielka objętość resztkowa. Przesunąć pipetę nad naczyniem do dozowania i nacisnąć tłok przez pozostałą część do drugiego oporu, nazywanego także ogranicznikiem "wydmuchowym", aby uwolnić pozostałą ciecz. 

Zwolnij tłok, wysuń końcówka do pipety, załaduj nową końcówka do pipety i powtórz.

Pipety tłokowej można używać do pipetowania lekko lepkich cieczy, w tym krwi. Aby uzyskać maksymalną dokładność, użyj techniki pipetowania odwrotnego opisanej powyżej. W przypadku cieczy o większej lepkości, takich jak 85% glicerol lub Triton X-100, pipeta wyporowa zapewnia najlepszą dokładność i konsystencję.

Lekko lotne ciecze takie jak etanol można pipetować pipetą tłokową stosując wspomnianą technikę pipetowania odwrotnego. Jednak pipety wyporowe są lepszym wyborem do cieczy lotnych. 

Jeśli używasz pipety z poduszką powietrzną, przed pipetowaniem objętości należy co najmniej pięć razy wstępnie przepłukać końcówka do pipety (pobierać i dozować). To równoważy powietrze wewnątrz pipety, spowalniając szybkość parowania cieczy. Szybkie odparowanie lotnych cieczy rozszerza powietrze wewnątrz pipety i wypycha ciecz z końcówki bez naciskania na tłok, co zmniejsza dokładne dostarczanie objętości.

Z cieczami lotnymi takimi jak acetonitryl zwykle lepiej sobie radzić z pipetami wyporowymi.

Tak, pipetowanie pipetami tłokowymi może tworzyć aerozole. Aerozole mogą wnikać do wnętrza pipety i zanieczyścić jej wnętrza oraz tłok. Aerozolizacja zachodzi łatwiej gdy tłok jest zbyt szybko uwalniany podczas pobierania a także może nastąpić w przeciwnym kierunku poza pipetą przy zbyt szybkim dozowaniu. 

Aby zminimalizować aerozole, zasysaj i dozuj powoli i równomiernie. Używaj końcówek z filtrem. 

W pipetach wyporowych używane są końcówki strzykawek które zapobiegają aerozolizacji. Pipeta wyporowa to najlepszy wybór do pipetowania niebezpiecznych cieczy oraz wszelkich cieczy o podwyższonej lepkości lub lotności.

Bardzo zimne lub gorące ciecze zmieniają ciśnienie powietrza w pipetach tłokowych, co prowadzi do niedokładnego pipetowania. 

Na pipety wyporowe z końcówkami strzykawkowymi, które nie mają kieszeni powietrznej między cieczą a tłokiem, nie mają wpływu różne temperatury cieczy. Pipety wyporowe zapewniają dokładne wyniki w przypadku cieczy o temperaturze pokojowej.

Jeśli trzeba pipetować bardzo gorącą lub zimną ciecz pipetą tłokową, nie należy wstępnie płukać końcówka do pipety — jest to zazwyczaj najlepsza praktyka w przypadku najwyższej dokładność. Zamiast tego pobieraj i dozuj szybko, aby zminimalizować wpływ temperatury cieczy na wewnętrzną szczelinę powietrzną pipety.

Aby uniknąć pęcherzyków powietrza i pienienia podczas pipetowania, nie zanurzaj końcówki na więcej niż 10 mm w zbiorniku na ciecz i powoli zasysaj.

Pipetowanie odwrotne zapewnia dodatkową ochronę, ponieważ przed zassaniem całkowicie naciskasz tłok do 2. stopnia, więc nie ma szans na wstrzyknięcie powietrza do próbki cieczy. Więcej informacji na temat pipetowania odwrotnego można znaleźć na tej stronie. 

Pipeta wyporowa nie tworzy pęcherzyków powietrza ani piany podczas interakcji z cieczą ponieważ jej końcówka strzykawkowa nie zawiera powietrza umożliwiającego interakcję z cieczą.

Odkazić pipetę wycierając ją mokrą szmatką i detergentem takim jak izopropanol lub 10-procentowym roztworem wybielacza. 

Inną opcją może być autoklawowanie, ale należy sprawdzić w dokumentacji, czy taka opcja jest zalecana. Jeśli pipeta nadaje się do sterylizacji w autoklawie, czy cały urządzenie jest autoklawowane, czy tylko końcówka?  

Więcej informacji na temat czyszczenia pipety znajdziesz na plakacie "Czyszczenie pipety ".

Kalibracja jest kontrolowanym i udokumentowanym pomiarem poziomu błędu systematycznego (dokładność) i błędu losowego (precyzja) pipety. W wielu środowiskach laboratoryjnych działanie pipet musi być regularnie testowane i dokumentowane przez prawo w określonych warunkach certyfikowanych przez akredytowaną jednostkę. 

Certyfikowani dostawcy ISO kalibrują pipety w kontrolowanych warunkach. Wynik są bezpiecznie udokumentowane na certyfikacie wzorcowania, co uzupełnia historię wydajności gotową do audytu dla każdego urządzenia. 

METTLER TOLEDO to największa na świecie organizacja zajmująca się serwisowaniem pipet oferująca opcje serwisowania wysłanych pipet i w miejscu pracy. Laboratoria serwisowe mają certyfikat ISO 17025, a procedury są zgodne z aktualizacją ISO 8655 z 2022 r. 

dokładność pipety — jest różnicą między średnią objętością wszystkich pomiarów (4-10 pomiarów) a ustawioną objętością. 

Precyzja to odchylenie standardowe wszystkich wykonywanych pomiarów. Jak daleko od każdego odczytu są pozostałe?

Niepewność pipety to ilościowy termin określający jej ogólną dokładność. Jest to połączenie poprawności (miara błędu systematycznego) i precyzji (miara błędu losowego). 

Równanie niepewności jest następujące: 

Niepewność = błąd systematyczny + błąd losowy * k. k (współczynnik pokrycia lub wynik Z) zależy od liczby pomiarów. k=331 dla czterech pomiarów i 2 dla dziesięciu.

Przechowuj pipety pionowo, zwisając z półki lub stojaka na pipety. Utrzymuj pipety w czystości i bez zanieczyszczeń. Trzymaj końcówki do pipety zamknięte w pudełkach.