Dobra praktyka pipetowania: lepsze wyniki dzięki szkoleniom i wsparciu

Większość zastosowań w naukach przyrodniczych obejmuje krytyczne etapy obsługi cieczy, w których pipetowana objętość ma bezpośredni wpływ na wynik. Jeśli pipetowanie nie jest spójne i dokładne, czas, pieniądze i materiał mogą pójść na marne. Dokładne pipetowanie stanowi podstawę powtarzalnej pracy, która jest niezbędna do generowania istotnych danych.

Pierwszym krokiem w kierunku poprawy dokładności pipetowania jest wybór odpowiedniego typu pipety i odpowiedniego zakresu objętości. Jeśli chodzi o rozmiar, wybierz pipetę o najmniejszej objętości, która pomieści pipetowaną objętość. Na przykład, jeśli pipetujesz 2 μl i masz pipetę 5 μl i pipetę 20 μl, uzyskasz lepszą dokładność, korzystając z pipety 5 μl. 

Zapoznaj się z tym opracowaniem technicznym na temat wyboru pipet, aby dowiedzieć się, która pipeta najlepiej sprawdza się w przypadku danej cieczy i innych czynników charakterystycznych dla Twojej sytuacji: Wybór odpowiedniej pipety

Gdy masz już odpowiedni instrument, zastosuj swoją dobrą technikę pipetowania w praktyce. Ustal harmonogram rutynowych testów, aby zmaksymalizować zaufanie do wyników w miarę upływu czasu i, podobnie jak w przypadku każdego precyzyjnego urządzenia, upewnij się, że ustanowiłeś regularny, specjalistyczny serwis i schemat kalibracji.

Najprostszym sposobem szybkiego sprawdzenia dokładności pipety może być test Rainin SmartCheck. Dowiedz się więcej na stronie mt.com/SmartCheck 

Wybór odpowiedniej pipety wymaga oceny wymagań. Po pierwsze, jakiego rodzaju próbki są pipetowane? Czy są wodne? A może są lepkie, lotne, pieniące się, lub niebezpieczne? W przypadku cieczy wodnych i prawie wodnych dobrym wyborem są najpopularniejsze pipety wyporowe (zwane również pipetami z poduszką powietrzną). W przypadku lepkich, lotnych i innych nietypowych rodzajów cieczy lepszym wyborem będzie pipeta wyporowa zarówno ze względu na dokładność, jak i bezpieczeństwo. 

Jaką objętość będzie pipetować? Ile próbek potrzeba, aby przenieść je z jednego naczynia do drugiego? Zapoznaj się z tym opracowaniem technicznym na temat wyboru pipet , aby dowiedzieć się, które pipety działają najlepiej w zależności od cieczy i innych czynników charakterystycznych dla danej sytuacji.

Pipetowanie najmniejszych możliwych objętości wymaga specjalistycznych urządzeń i technik. Pipeta powtarzalna może być najlepszym wyborem do wielokrotnego dozowania objętości do 100 nl. Inna pipeta może również działać tylko przez kilka dozowników. Upewnij się, że używasz pipety o najmniejszym rozmiarze, która pomieści objętość, którą chcesz pipetować. 

Przy bardzo małych objętościach technika pipetowania ma proporcjonalnie większy wpływ na dokładność i odtwarzalność. Ważne jest, aby kontrolować głębokość zanurzenia, kąt pipetowania i szybkość zasysania. Pomocny może okazać się plakat "Techniki pipetowania " firmy Rainin.

Rainin NanoRep umożliwia powtarzalne dozowanie porcji do 100 nL. Dowiedz się więcej tutaj: mt.com/NanoRep

Najważniejszym czynnikiem wpływającym na dokładne i powtarzalne pipetowanie wielokanałowe jest integralność uszczelki dla każdego kanału pipety. Oznacza to, że każda końcówka idealnie pasuje do każdego wału przy zerowym wycieku powietrza. Różni producenci osiągają to na różne sposoby, z różną łatwością ergonomiczną i poziomami spójności uszczelnienia. Końcówki do pipet LTS LiteTouch System firmy Rainin wymagają najmniejszej siły do załadunku i wysunięcia z wielokanałowego systemu i za każdym razem zapewniają spójne uszczelnienie.

Kliknij tutaj, aby zapoznać się z szeroką gamą pipet wielokanałowych firmy Rainin.

Podczas zasysania należy trzymać pipetę jak najbliżej pionu, unikając kątów większych niż 20° od osi Y. Podczas dozowania, jeśli dotykasz ścianki naczynia docelowego, aby całkowicie wyciągnąć cały płyn z końcówki, możesz przekroczyć kąt 20°.

Pipetowanie do przodu jest standardową techniką pipetowania i najlepszym wyborem dla próbek wodnych. W przypadku próbek lepkich i lotnych pipetowanie zwrotne zapewnia większą dokładność.

Aby przesunąć pipetę do przodu, wciśnij tłok do pierwszego oporu, trzymając pipetę poza cieczą. Następnie zanurz końcówkę na głębokość 2-10 mm w cieczy, z którą pracujesz – nie głębiej. Powoli zwolnić tłok do pełnego wysunięcia, aby zassać całą objętość cieczy. Aby dozować do docelowego naczynia, należy wsunąć pipetę do naczynia, a następnie wcisnąć tłok z równą szybkością przez pierwszy ogranicznik aż do drugiego oporu – aż do oporu tłoka. Trzymając całkowicie wciśnięty tłok, delikatnie przeciągnij końcówkę pipety w górę ścianki naczynia, aby "dotknąć". Pomaga to w całkowitym dozowaniu pełnej objętości płynu. Zwolnij tłok, wysuń końcówkę pipety, załaduj nową końcówkę pipety i powtórz czynność.

Aby odwrócić pipetę, wciśnij tłok do końca przez pierwszy ogranicznik do drugiego oporu – do oporu. Następnie zanurz końcówkę w płynie i powoli i równomiernie zwolnij tłok, aby nabrać oddechu. Przejdź do naczynia odbiorczego i naciśnij tłok TYLKO DO PIERWSZEGO ZATRZYMANIA, aby dozować odpowiednią objętość. Niewielka objętość resztkowa pozostanie w końcówce pipety. Przesunąć pipetę nad naczyniem do wyrzucania i wcisnąć tłok do końca do drugiego oporu, zwanego również ogranicznikiem "wydmuchiwania", aby uwolnić pozostały płyn. 

Zwolnij tłok, wysuń końcówkę pipety, załaduj nową końcówkę pipety i powtórz czynność.

Pipeta wyporowa może być używana do pipetowania lekko lepkich cieczy, w tym krwi. Aby osiągnąć maksymalną dokładność, należy zastosować opisaną powyżej technikę pipetowania odwrotnego. W przypadku cieczy o większej lepkości, takich jak 85% glicerol lub Triton X-100, pipeta wyporowa zapewnia najlepszą dokładność i spójność.

Lekko lotne ciecze, takie jak etanol, można pipetować za pomocą pipety wyporowej przy użyciu wyżej wymienionej techniki pipetowania odwrotnego. Jednak pipety wyporowe są lepszym wyborem w przypadku cieczy lotnych. 

W przypadku korzystania z pipety wyporowej należy wstępnie przepłukać końcówkę pipety (zassać i dozować) co najmniej pięć razy przed pipetowaniem objętości. Równoważy to powietrze wewnątrz pipety, spowalniając szybkość parowania cieczy. Szybkie parowanie lotnych cieczy powoduje rozprężanie powietrza wewnątrz pipety i wypycha ciecz z końcówki bez wywierania nacisku na tłok, co zmniejsza dokładność dostarczania objętości.

Z cieczami lotnymi, takimi jak acetonitryl, na ogół lepiej radzić sobie za pomocą pipety wyporowej.

Tak, pipetowanie za pomocą pipet wyporowych może powodować powstawanie aerozoli. Aerozole mogą unosić się do wnętrza pipety i zanieczyszczać wewnętrzne ścianki i tłok. Aerozol zachodzi łatwiej, gdy tłok jest zwalniany zbyt szybko podczas zasysania, a także może wystąpić w przeciwnym kierunku poza pipetą przy zbyt szybkim dozowaniu. 

Aby zminimalizować ilość aerozoli, zasysaj i dozuj powoli i równomiernie. Korzystaj z filtrowanych końcówek. 

Pipety wyporowe wykorzystują końcówki w kształcie strzykawki, które zapobiegają aerozolowaniu. Pipeta wyporowa to najlepszy wybór do pipetowania niebezpiecznych cieczy i wszelkich cieczy o podwyższonej lepkości lub lotności.

Bardzo zimne lub gorące ciecze zmieniają ciśnienie powietrza w pipetach wyporowych, co prowadzi do niedokładnego pipetowania. 

Pipety wyporowe, z końcówkami w kształcie strzykawki, które nie mają kieszeni powietrznej między cieczą a tłokiem, nie mają wpływu na różne temperatury cieczy. Pipety wyporowe zapewniają dokładne wyniki w przypadku cieczy o temperaturze innej niż pokojowa.

Jeśli konieczne jest pipetowanie bardzo gorącej lub zimnej cieczy za pomocą pipety wyporowej z przepływem powietrza, nie należy wstępnie płukać końcówki pipety — jest to zazwyczaj najlepsza praktyka zapewniająca najwyższą dokładność. Zamiast tego należy szybko zasysać i dozować, aby zminimalizować wpływ temperatury cieczy na szczelinę powietrzną wewnątrz pipety.

Aby uniknąć pęcherzyków powietrza i pienienia się podczas pipetowania, nie zanurzaj końcówki na więcej niż 10 mm w zbiorniku cieczy i powoli zasysaj.

Pipetowanie odwrócone zapewnia dodatkową ochronę, ponieważ przed zasysaniem należy całkowicie nacisnąć tłok do 2. stopnia, dzięki czemu nie ma szans na wstrzyknięcie powietrza do próbki cieczy. Więcej informacji na temat pipetowania odwrotnego można znaleźć na tej stronie. 

Pipeta wyporowa nie tworzy pęcherzyków ani piany podczas interakcji z cieczą, ponieważ jej końcówka w kształcie strzykawki nie dostarcza powietrza, z którym ciecz mogłaby wchodzić w interakcję.

Odkadź pipetę, przecierając ją wilgotną szmatką i detergentem, takim jak izopropanol lub 10% roztwór wybielacza. Unikaj przezroczystego plastikowego okienka mikrometru.

Inną opcją może być autoklawowanie, ale sprawdź specyfikacje pipety. Jeśli można go sterylizować w autoklawie, to czy autoklawowanie odbywa się tylko na końcu płynu?  Często autoklawować można tylko końcówkę płynną.

Aby uzyskać więcej informacji na temat czyszczenia pipety, pobierz plakat Czyszczenie pipety .

Kalibracja to kontrolowany i udokumentowany pomiar wskaźnika błędów systematycznych (dokładności) i wskaźnika błędów losowych (precyzji) pipety. W wielu środowiskach laboratoryjnych działanie pipet musi być regularnie testowane i dokumentowane zgodnie z prawem w określonych warunkach, certyfikowanych przez akredytowaną jednostkę. 

Dostawcy z certyfikatem ISO kalibrują pipety w kontrolowanych warunkach. Wyniki są bezpiecznie dokumentowane na certyfikacie kalibracji, co uzupełnia historię działania każdego urządzenia gotową do audytu. Gdy konieczna jest regulacja, laboratoria kalibracyjne z certyfikatem ISO zapewniają fachową obsługę za pomocą zalecanych przez producenta części i smarów. 

Rainin i METTLER TOLEDO to największa na świecie organizacja zajmująca się serwisem pipet, która szybko przechodzi z opcji wysyłkowych i serwisowych na miejscu. Laboratoria serwisowe posiadają certyfikat ISO 17025, a procedury są zgodne z aktualizacją ISO 8655 z 2022 roku. 

Dokładność pipety — lub poprawność, jak to się teraz nazywa — to różnica między średnią objętością wszystkich pomiarów (4-10 pomiarów) a ustawioną objętością. 

Precyzja to odchylenie standardowe wszystkich wykonanych pomiarów. Jak bardzo różnią się od siebie pozostałe?

Niepewność pipety to termin ilościowy określający jej ogólną dokładność. Jest to połączenie poprawności (miary błędu systematycznego) i precyzji (miary błędu losowego). 

Równanie niepewności jest następujące: 

Niepewność = błąd systematyczny + błąd losowy * k. k (współczynnik pokrycia lub wskaźnik Z) zależy od liczby pomiarów. k=3,31 dla czterech pomiarów i 2 dla dziesięciu pomiarów.

Pipety należy przechowywać pionowo, zwisając z półki lub stojaka na pipety. Pipety należy utrzymywać w czystości i wolne od wszelkich zanieczyszczeń. Stojaki na końcówki do pipet powinny być zamknięte.