Good Pipetting Practice: トレーニングとサポートによるより良い結果

ほとんどのライフサイエンスアプリケーションには、ピペッティングされた量が結果に直接影響を与える重要なピペッティングステップが含まれています。ピペッティング一貫性がなく正確でない場合、時間、お金、材料が廃棄、無駄になる可能性があります。正確なピペッティングは、有意義なデータを生成するために不可欠な再現性のある作業の基盤を形成します。

ピペッティング 正確さを改善するための第一歩は、適切なタイプのピペットと適切な容量範囲を選択することです。サイズについては、ピペッティングする容量に対応する最小容量のピペットを選択してください。たとえば、ピペッティング 2 μL で 5 μL ピペットと 20 μL ピペットを使用している場合は、5 μL を使用すると正確さが向上します。 

ピペットの選択に関する このホワイトペーパー をチェックして、液体に最適なピペットやお客様の状況に固有の他の要因をご確認ください。 適切なピペットの選定

適切な楽器ができたら、良いピペッティングテクニックを実践しましょう。時間の経過とともに結果の信頼性を最大化するために日常点検スケジュールを設定し、あらゆる 精度機器と同様に、定期的な専門家によるサービスと校正レジメンを必ず確立してください。

ピペットの正確さをすばやく試験、テストする最も簡単な方法は、Rainin SmartCheckでしょう。詳細は mt.com/SmartCheck をご覧ください

適切な ピペット の選定には、要件の評価が含まれます。まず、どのようなサンプルピペッティングですか?それらは水性ですか?それとも、粘性、揮発性、発泡性、腐食性、または危険性ですか?水性および水に近い液体の場合、最も一般的な空気置換式ピペット(「エアクッション」ピペットとも呼ばれます)が適しています。粘性、揮発性、その他の珍しい液体タイプの場合、ポジティブディスプレイスメント式ピペットは正確さと安全性の両方にとってより良い選択です。 

どのボリュームピペッティングされますか?ある容器から別の容器には何個のサンプルを移し替える必要がありますか? ピペットの選定に関するこのホワイトペーパー をチェックして、状況に固有の液体やその他の要因に応じてどのピペットが最適かを理解してください。

可能な限り少量をピペッティングするには、特殊な機器と技術が必要です。連続分注器は、100 nLまでの分吐出量にかけるのに最適です。また、数回の分注で分注できるもう1つのピペットもあります。必ず、ピペッティングする容量に合った最小サイズのピペットを使用してください。 

非常に少ない量では、ピペッティングテクニックは正確さと再現性に比例して大きな影響を及ぼします。浸漬深さ、ピペッティング角度、吸引速度を制御することが重要です。Raininの ピペッティングテクニック ポスターが役立ちます。

NanoRep Rainin、100 nLまでの分注を連続分注できます。詳細はこちらをご覧ください: mt.com/NanoRep

正確で再現性の高いマルチチャンネルピペッティングで最も重要な要素は、ピペットのすべてのチャンネルのシールの完全性です。つまり、エア液洩れゼロで各シャフトにすべてのチップが完全にフィットします。メーカーが異なれば、人間工学的の使いやすさとシーリング一貫性レベルも異なり、さまざまな方法でこれを実現します。RaininのLTS LiteTouchシステムピペットヒントとコツは、マルチチャンネルからのロードとイジェクトに最小限の力しか必要とせず、毎回一貫してシールします。

Raininの幅広いマルチチャンネルピペットはこちらをクリックしてください。

吸引するときは、Y軸から20°を超える角度を避けて、ピペットあらゆるできるだけ垂直に近づけてください。ディスペンスするとき、チップからすべての液体を完全に引き出すために目標値容器の壁に触れる場合は、20°の角度を超えてもかまいません。

順方向ピペッティングは標準的なピペッティングテクニックであり、水性サンプルに最適です。粘性および揮発性のサンプルの場合、リバースピペッティングはより良い正確さを提供します。

ピペットをフォワードするには、ピペットを液体の外側に保持しながら、プランジャーを最初のストップまで押し下げます。次に、チップを作業中の液体に2〜10mmの深さに浸します–深くはありません。プランジャーをゆっくりと伸ばして完全に伸ばし、液体全体を完全に吸引します。目標値容器の中に吐出するには、ピペットを容器の中に移し、最初の停止位置まで、プランジャー限り、最初の停止位置まで均等な速度でプランジャー押し込みます。プランジャーを完全に押した状態で、ピペットの先端を容器の壁に軽くドラッグして「タッチオフ」します。これにより、全液量を完全に吐出できます。プランジャーを放し、ピペットチップを取り外し、新しいピペットチップを装填して、繰り返します。

ピペットを逆にするには、プランジャーを最初のストップから2番目のストップまで、つまりプランジャー限り押し下げます。次に、チップを液体に浸し、ゆっくりと均等にプランジャーを放出して吸引します。受け容器に移動し、プランジャーを最初の停止位置まで押して正しい容量を吐出します。ピペットチップにわずかに残ります。廃棄吐出容器の上にピペットを移動し、残りのプランジャーを2番目のストップ(「ブローアウト」ストップとも呼ばれる)まで押し下げて、残りの液体あらゆる排出します。 

プランジャーを放し、ピペットチップを取り外し、新しいピペットチップを装填して、繰り返します。

空気置換式ピペットは、血液を含むわずかに粘性の高い液体のピペッティングに使用できます。最大値 正確さを実現するには、上記のリバースピペッティング手法を使用します。85%グリセロールやTriton X-100などのより粘性の高い液体の場合、ポジティブディスプレイスメント式ピペットは最高の正確さと一貫性を提供します。

エタノールなどのわずかに揮発性の高い液体は、前述のリバースピペッティング法を使用して、空気置換式ピペットでピペッティングできます。ただし、揮発性の液体にはポジティブディスプレイスメント式ピペットの方が適しています。 

空気置換式ピペットを使用する場合は、容量をピペッティングる前に、ピペットチップを少なくとも5回プレリンス(吸引と吐出)してください。これにより、ピペット内の空気が平衡化し、液体の蒸発速度が遅くなります。揮発性液体が急速に蒸発すると、ピペット内の空気が膨張し、プランジャーに圧力をかけずにチップから液体あらゆる押し出されるため、正確な容量の送達が低下します。

アセトニトリルなどの揮発性の液体は、通常はポジティブディスプレイスメント式ピペットを使用して処理した方がよいでしょう。

はい、空気置換式ピペットを使用したピペッティングはエアロゾルを生成する可能性があります。エアゾールがピペット内部に浸透し、内部壁とピストンを汚染することがあります。エアロゾル化は、吸引時にプランジャーの放出が速すぎると起こりやすくなります。また、吐出が速すぎると、ピペットの外側から逆方向にも発生します。 

エアロゾルを最小限に抑えるには、ゆっくりと均等に吸引および吐出します。フィルタ付きヒントとコツを使用します。 

ポジティブディスプレイスメント式ピペットは、エアゾール化を防ぐためにシリンジ形式のヒントとコツを使用します。ポジティブディスプレイスメント式ピペットは、ピペッティング危険な液体やあらゆる粘度や揮発性が高い液体に最適です。

非常に冷たいまたは熱い液体は、空気置換式ピペット内の空気圧を変化させ、不正確なピペッティングにつながります。 

液体とピストンの間にエアポケットのないシリンジ式のヒントとコツを備えたポジティブディスプレイスメント式ピペットは、液体の温度の違いの影響を受けません。ポジティブディスプレイスメント式ピペットは、室温以外の液体でも正確な結果を提供します。

非常に高温または低温の液体を空気置換式ピペットでピペッティングする必要がある場合は、ピペットチップを事前にすすぎないでください。通常、これは最高の正確さためのベストプラクティスです。代わりに、ピペット内部のエアギャップに与える液体の温度の影響を最小限に抑えるために、迅速に吸引および吐出してください。

ピペッティング時の気泡や泡立ちを防ぐため、チップを液体リザーバーに10mm以上浸さず、ゆっくりと吸引してください。

リバースピペッティングは、吸引する前にプランジャーを2番目のストップまで完全に押し込むため、液体サンプルに空気を注入する可能性がないため、追加の保護を提供します。リバースピペッティングの詳細については、 こちらのページをご覧ください。 

ポジティブディスプレイスメント式ピペットは、シリンジ型のチップには液体が相互作用する空気がないため、液体と相互作用しても気泡や泡を発生させません。

ピペットを濡れた布とイソプロパノールや10%漂白剤標準液などの洗浄剤で拭いて、ピペットの汚れを取り除きます。マイクロメーターの透明なプラスチック製の窓は避けてください。

オートクレーブは別のオプションかもしれませんが、ピペットの機器の仕様を確認してください。オートクレーブ可能な場合、機器全体がオートクレーブされますか、それともリキッドエンドのみになりますか?  多くの場合、オートクレーブ滅菌できるのはリキッドエンドのみです。

ピペット清掃の詳細については、 ピペット清掃 ポスターを入手してください。

校正は、ピペットの系統的エラー率(正確さ)と偶然誤差率(精度)の管理され、文書化された測定です。多くの研究室環境では、ピペットの性能は、認定機関によって校正済みされた特定の条件下で、法律によって定期的にテストおよび文書化されなければなりません。 

ISO校正済みプロバイダーは、管理された環境でピペットを校正します。結果は校正証明書に安全に文書化され、各機器の監査対応性能履歴に追加されます。調整が必要な場合、ISO-校正済み 校正ラボは、メーカーが推奨する部品と潤滑剤の専門家サービスを提供します。 

Rainin&METTLER TOLEDOは世界最大のピペットサービス組織で、 郵送とオンサイトサービスオプションを迅速に行うことができます。サービス ラボは ISO 17025 校正済みであり、手順は ISO 8655 の 2022 年の更新に従います。 

ピペット正確さ(または現在呼ばれている真度)は、すべての測定の平均容量(4〜10回の測定)と設定容量の差です。 

精度は、実行されるすべての測定の中で標準偏差です。各測定値からどれだけ離れていますか?

ピペットの不確かさは、ピペット全体の正確さを表す定量的な用語です。真度(系統誤差の尺度)と精度(偶然誤差の尺度)の組み合わせです。 

不確かさの式は次のとおりです。 

不確かさ = 系統誤差 + 偶然誤差 * k. k(包含係数またはZスコア)は測定回数に依存します。4回の測定ではk=3.31、10回の測定では2。

ピペットは垂直に保管し、棚またはピペットスタンドから吊るします。ピペットを清潔に保ち、あらゆる汚染物質が付着しないようにしてください。ピペットチップラックは閉じたままにしてください。