優れたピペッティング実践:トレーニングとサポートによるより良い結果

ほとんどのライフサイエンスアプリケーションには、ピペットで操作した量が結果に直接影響する重要なリキッドハンドリングステップが含まれています。ピペッティングが一貫性と精度でなければ、時間、お金、材料が無駄になる可能性があります。正確なピペッティングは、意味のあるデータを生成するために不可欠な再現性のある作業の基礎を形成します。

ピペッティング精度を向上させるための最初のステップは、適切なタイプのピペットと適切な容量範囲を選択することです。サイズについては、ピペッティングする容量に対応する最小容量のピペットを選択してください。例えば、2 μLのピペットをピペッティングし、5 μLのピペットと20 μLのピペットをお持ちの場合、5 μLを使用すると精度が向上します。 

ピペットの選択に関するこの ホワイトペーパー をチェックして、液体に最適なピペットや、お客様の状況に固有のその他の要因を理解し てください。

適切な装置を手に入れたら、優れたピペッティング技術を実践してください。定期的なテストスケジュールを設定して、時間の経過とともに結果の信頼性を最大化し、他の精密機器と同様に、定期的な専門家によるサービスと校正計画を必ず実施してください。

ピペットの精度を迅速にテストする最も簡単な方法は、レイニンのSmartCheckです。詳細については、mt.com/SmartCheck をご覧ください。

適切な ピペット を選択するには、要件を評価する必要があります。まず、どのようなサンプルをピペッティングしていますか?それらは水性ですか?それとも、粘性、揮発性、発泡性、腐食性、または危険性がありますか?水性および水系に近い液体の場合、最も一般的な空気置換式ピペット(「エアクッション」ピペットとも呼ばれます)が適しています。粘性液体、揮発性液体、およびその他の異常な液体タイプの場合、精度と安全性の両方の観点から、容積式ピペットの方が適しています。 

ピペッティングする容量はどれくらいですか?ある容器から別の容器に移すには、いくつのサンプルが必要ですか? ピペットの選択に関するこのホワイトペーパー をチェックして、液体や状況に固有のその他の要因に応じてどのピペットが最適かを理解してください。

可能な限り小さな容量でピペッティングするには、特殊な機器と技術が必要です。リピーターピペットは、100 nLまでのリピート分注に最適な選択肢です。別のピペットも数回の分注で機能します。ピペットを挟みたい容量に対応する最小サイズのピペットを使用してください。 

非常に少量の場合、ピペッティング技術は精度と再現性に比例して大きな影響を与えます。浸漬深さ、ピペッティング角度、吸引速度を制御することが重要です。レイニンの ピペッティングテクニックのポスター がお役に立ちます。

レイニンのNanoRepは、100 nLまでのアリコートを繰り返し分注します。詳細については、 こちらをご覧ください mt.com/NanoRep

正確で再現性のあるマルチチャンネルピペッティングの最も重要な要素は、ピペットの各チャンネルのシールの完全性です。つまり、すべてのチップが各シャフトに完全にフィットし、空気漏れがゼロです。メーカーが異なれば、人間工学的な容易さやシーリングの一貫性レベルも異なり、さまざまな方法でこれを達成しています。レイニンのLTS LiteTouchシステムピペットチップは、マルチチャンネルへのロードと排出に必要な力が最も少なく、毎回一貫してシールします。

ここをクリックして、レイニンの幅広いマルチチャンネルピペットをご覧ください。

吸引するときは、ピペットをできるだけ垂直に近づけて保持し、Y軸から20°を超える角度を避けてください。分注する際、先端からすべての液体を完全に引き抜くために対象容器の壁に触れている場合は、20°の角度を超えても問題ありません。

フォワードピペッティングは標準的なピペッティング技術であり、水性サンプルに最適です。粘性サンプルや揮発性サンプルの場合、リバースピペッティングにより精度が向上します。

ピペットを前進させるには、ピペットを液体の外側に保持しながら、プランジャーを最初のストップまで押し下げます。次に、作業している液体に先端を2〜10mmの深さまで浸します。プランジャーをゆっくりと完全に伸ばして、全液量を吸引します。ターゲット容器に分注するには、ピペットを容器に移動し、プランジャーが進む限り、最初のストップから2番目のストップまでプランジャーを均等な速度で押します。プランジャーを完全に押した状態で、ピペットの先端を容器の壁に軽く引きずり込み、「タッチオフ」します。これにより、全量の液体を完全に分注できます。プランジャーを放し、ピペットチップを取り出し、新しいピペットチップをロードして、繰り返します。

リバースピペットを装着するには、プランジャーを最初のストップから2番目のストップまで、プランジャーが進むまで押し下げます。次に、先端を液体に浸し、プランジャーをゆっくりと均一に離して吸引します。受け取り容器に移動し、プランジャーを最初のストップまで押して、正しい量を分配します。ピペットチップに少量の残留物が残ります。ピペットを廃棄分注容器の上に移動し、プランジャーを「ブローアウト」ストップとも呼ばれる2番目のストップまで押し下げて、残っている液体を放出します。 

プランジャーを放し、ピペットチップを取り出し、新しいピペットチップをロードして、繰り返します。

空気置換式ピペットは、血液を含むわずかに粘性のある液体をピペットするために使用できます。最高の精度を得るには、上記のリバースピペッティング技術を使用します。85%グリセロールやTriton X-100など、より粘性の高い液体の場合、容積式ピペットが最高の精度と一貫性を提供します。

エタノールなどのわずかに揮発性の液体は、上記のリバースピペッティング技術を使用して、空気置換式ピペットでピペッティングできます。ただし、容積式ピペットは揮発性液体に適しています。 

エアディスプレイス式ピペットを使用する場合は、容量をピペッティングする前に、ピペットチップを少なくとも5回事前にすすぎます(吸引して分注します)。これにより、ピペット内の空気が平衡化され、液体の蒸発速度が遅くなります。揮発性液体が急速に蒸発すると、ピペット内の空気が膨張し、プランジャーに圧力がかからずにチップから液体が押し出されるため、正確な体積供給が減少します。

アセトニトリルなどの揮発性液体は、一般的に容積式ピペットでより適切に処理できます。

はい、空気置換式ピペットを使用したピペッティングでは、エアロゾルが発生する可能性があります。エアロゾルはピペットの内部に上昇し、内壁とピストンを汚染する可能性があります。エアロゾル化は、吸引中にプランジャーが急激に放出されるとより容易に発生し、過度に迅速に分注するとピペットの外側で反対方向にも発生する可能性があります。 

エアロゾルを最小限に抑えるには、吸引してゆっくりと均一に分注します。フィルターをかけたヒントを使用します。 

容積式ピペットは、エアロゾルの発生を防ぐシリンジスタイルのチップを使用しています。容積式ピペットは、危険な液体や粘度や揮発性の高い液体のピペッティングに最適です。

非常に冷たい液体または高温の液体は、空気置換式ピペット内の空気圧を変化させ、ピペッティングの精度が損なわれます。 

容積式ピペットは、液体とピストンの間にエアポケットがないシリンジスタイルのチップを備えているため、液体の温度の違いの影響を受けません。容積式ピペットは、室温以外の液体でも正確な結果を提供します。

非常に高温または低温の液体を空気置換式ピペットでピペットする必要がある場合は、ピペットチップを事前にすすぎないでください。これは通常、最高の精度を得るためのベストプラクティスです。代わりに、液体の温度がピペットの内部のエアギャップに与える影響を最小限に抑えるために、迅速に吸引して分注してください。

ピペッティング時の気泡や泡立ちを避けるため、チップをリザーバーに10mm以上浸さず、ゆっくりと吸引してください。

リバースピペッティングでは、吸引する前にプランジャーを2番目のストップまで完全に押すため、液体サンプルに空気が注入される可能性がないため、追加の保護が提供されます。リバースピペッティングの詳細については、 こちらのページをご覧ください。 

容積式ピペットは、シリンジスタイルの先端が液体と相互作用する空気を提供しないため、液体と相互作用するときに気泡や泡を発生させません。

ピペットは、濡れた布とイソプロパノールなどの洗剤または10%漂白剤溶液で拭いて除染します。マイクロメータの透明なプラスチック製の窓は避けてください。

オートクレーブも選択肢の一つかもしれませんが、ピペットの装置の仕様を確認してください。オートクレーブ可能な場合、装置全体がオートクレーブ滅菌されていますか、それとも液体の端部のみがオートクレーブ処理されていますか?  多くの場合、オートクレーブできるのは液体の端部のみです。

ピペットのクリーニングの詳細については、 ピペットのクリーニング ポスターを入手してください。

キャリブレーションとは、ピペットの系統誤差率(精度)とランダム誤差率(精度)を制御し、文書化した測定です。多くのラボ環境では、ピペットの性能は、認定機関によって認定された特定の条件下で、定期的にテストされ、法律によって文書化されなければなりません。 

ISO認定プロバイダーは、管理された環境でピペットを校正します。結果は校正証明書にしっかりと文書化され、各機器の監査に対応した性能履歴が追加されます。調整が必要な場合は、ISO認定の校正ラボがメーカー推奨の部品と潤滑剤を使用して専門的なサービスを提供します。 

レイニンとメトラー・トレドは、 郵送およびオンサイトサービスオプションから迅速に対応できる世界最大のピペットサービス組織です。サービスラボはISO 17025の認証を取得しており、手順は2022年のISO 8655の更新に従います。 

ピペットの精度(または現在呼ばれているように真度)は、すべての測定値(4〜10回の測定値)の平均容量と設定容量の差です。 

精度は、実行されるすべての測定の標準偏差です。各読み取り値は、他の読み取り値からどのくらい離れていますか?

ピペットの不確かさは、その全体的な精度の定量的な用語です。これは、真性 (系統誤差の尺度) と精度 (ランダム誤差の尺度) の組み合わせです。 

不確実性の方程式は次のとおりです。 

不確かさ = 系統誤差 + ランダム誤差 * k. k (カバレッジ係数または Z スコア) は、測定回数によって異なります。k=3.31 は 4 回の測定で、2 回の測定では 10 回の測定です。

ピペットは垂直に保管し、棚やピペットスタンドから吊るします。ピペットを清潔に保ち、汚染物質が付着しないようにしてください。ピペットチップラックは閉じたままにしてください。