在许多紫外可见分光光度计应用中,温度控制是一个重要的参数,尤其是对温度敏感的有机样品。本指南描述了为什么其是重要影响因素的原因,同时也例举了常用应用,比如脂肪酶活发生、蛋白质变性、DNA的熔点以及β-半乳糖苷的米曼氏动力学。
本指南也详述了梅特勒托利多现有超越系列紫外可见分光光度计恒温解决方案。
1. 摘要
本指南通过生命科学中常用的应用实例来描述紫外可见分光光度计中准确温度测量的重要性。同时还讲述了使用梅特勒托利多超越系列紫外可见分光光度计酷T控温系统在升温过程中进行准确分光光度计分析的操作实践与技巧。
2. 前言
恒温的分光光度法分析通常指在分光光度a)分析前, b)分析时, c)分析后进行设定的温度控制,正如下面例子所示:
- 样品/分析物需要在特定温度下恒温以延缓分解或为后续(化学)反应所需的前提反应提供理想的条件,然后在特定温度下对其进行分光光度法分析。
- 根据设定的升温过程创建恒定或变化的温度条件。这种条件催化化学反应需要进行分光光度法监控。
- 为了监测可逆(化学)反应,重新设定先前的或不同的温度条件用于随后的分光光度法测量。
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3. 温控分光光度计的应用实例
3.1 检测脂肪酶活性
列举了脂肪酶测定的实例,其需要在高于环境温度下检测,为酶催化化学反应提供理想的条件以便于进行分光光度法监测。
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3.2 温度诱导的蛋白质变性
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3.3 β-半乳糖苷的米曼氏动力学
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3.4 DNA的熔解温度
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4. 梅特勒托利多酷T帕尔贴恒温系统
酷T是一种单槽(基于帕尔贴原理的)恒温系统,可以为分光光度法分析提供4 °C-95 °C的温度范围。该恒温系统可以用于梅特勒托利多超越系列分光光度计UV7、UV5Bio和UV5上。安装时无需额外工具,只需将该设备置于分光光度计顶部即可使用。
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5. 酷T恒温系统的操作技巧
6. 梅特勒托利多多联池恒温系统
梅特勒托利多的多联池系统可以有效的自动进行高达8个比色皿的测量,可用于减空白或者复杂的动力学分析。配置外部恒温系统,它可以对比色皿中样品进行10–80 °C温度范围的恒温。
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7. 参考文献
[1] www.mt.com/uv-vis
[2] www.mt.com/cuvet-peltier-uvvis
[3] Determination of Lipase Activity, Method PNAB-LIP39, Biocon Española S.A.
[4] Journal of Chemical Education, March 2000, DOI: 10.1021/ed077p 380
[5] 1. Enzyme Handbook, II, Barman, T. E., Springer- Verlag (Berlin-Heidelberg: 1969), p. 581.