Spectroscopie UV Vis

Comprendre l'essentiel sur la spectroscopie UV Vis et ses applications

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Spectroscopie uv
Spectre UV VIS
Qu'est-ce que la spectroscopie UV VIS ?

Convertisseur d'absorbance/de transmission

=

Absorption de la lumière selon la loi de Beer-Lambert
Spectrophotomètre à balayage
Spectrophotomètre à balayage

Les spectrophotomètres à balayage classiques réalisent des mesures consécutives de la transmission à chaque longueur d'onde définie. La lumière est séparée en plusieurs longueurs d'onde par un réseau de diffraction. Une cuvette contenant l'échantillon est placée entre le réseau de diffraction et le détecteur.

Spectrophotomètre à barrettes de diodes
Spectrophotomètre à barrettes de diodes

Dans un spectrophotomètre à barrettes de diodes, l'échantillon est éclairé par un continuum, c'est-à-dire par toutes les composantes spectrales de la lumière en même temps, et absorbe différentes longueurs d'onde simultanément. La lumière transmise est ensuite diffractée par un réseau de réflexion. Cet instrument permet d'acquérir le spectre UV VIS plus rapidement qu'à l'aide d'un spectrophotomètre à balayage classique.

Spectroscopie UV VIS à balayage et à barrettes de diodes

Test de performances

Matériau de référence certifié (MRC)

Paramètre de test de l'instrument

Critère d'acceptation

USP 42 NF 37

Ph. Eur. 10

Précision de la longueur d'onde et

répétabilité

Ho(ClO4)3 : 4 % Ho2O3 dans HClO4 10 % v/v

Blanc : air

14 longueurs d'onde

(240 nm – 650 nm)

Xe : 2 longueurs d'onde (260,6 nm, 528,6 nm)

UV (200 – 400 nm) : ± 1 nm

VIS (400 – 780 nm) : ± 2 nm

(É-T) < 0,5 nm

UV (< 400 nm) :

± 1 nm

VIS (> 400 nm) :

± 3 nm

Photométrique

Précision et

répétabilité**

K2Cr2O7 dans HClO4 à 0,001 M

Blanc : HClO4 à 0,001 M

60 mg/L

0 A – 2 A,

235, 257, 313, 350 nm

Pour l'absorbance ≤ 1 A

Précision : ± 0,010 A

Répétabilité :

É-T ≤ 0,005 A

 

Pour l'absorbance > 1 A

Précision : ± 1 %

Répétabilité :

É-T ≤ 0,5 %

 

Précision : ± 0,010 A ou ± 1 %, la valeur la plus élevée étant retenue

 

Acide nicotinique dans

HCl à 0,1 M

Blanc : HCl à 0,1 M

12 mg/L

0,26 A – 1,6 A

213, 261 nm

Linéarité photométrique

K2Cr2O7 dans HClO4 à 0,001 M

Blanc : HClO4 à 0,001 M

 

6 – 200 mg/L, jusqu'à 3,0 A,

235, 257, 313, 350 nm

Tous les filtres mesurés remplissent  les critères d'acceptation de précision photométrique

R2> 0,999

Acide nicotinique dans

Hcl à 0,1 M

Blanc : HCl à 0,1 M

6 – 60 mg/L, jusqu'à 2,5 A

213, 261 nm

Lumière diffuse selon la procédure A

(SFRM)

KCl/H2O à 1,2 % m/v ;

Longueur du trajet optique de 10 mm

Blanc : KCl/H2O à 1,2 % m/v, longueur du trajet optique de 5 mm

Amax à 198 nm

≥ 0,7 A

(NA)

Lumière diffuse selon la procédure B (SWM)

KCl/H2O à 1,2 % m/v ;

Longueur du trajet optique de 10 mm

Blanc : H2O, longueur du trajet optique de 10 mm

Amax à 198 nm

≥ 2,0 A

≥ 2,0 A

Résolution

Toluène à 0,02 % v/v dans du n-hexane

Blanc : n-hexane/

n-heptane (Ph. Eur. 10)

Amax, 269/Amin, 267

>1,3

Les niveaux sont spécifiés dans les normes correspondantes

** La Pharmacopée européenne ne spécifie pas de répétabilité photométrique (précision)

É-T - Écart-type

Les bases de la colorimétrie UV VIS
Numéro de couleur
Quelle est la couleur de cette rose ?

Différentes échelles de couleurs sont établies pour définir un produit de manière unique selon les normes du secteur. Parmi ces échelles figurent :

Échelle

Norme

Applications

Saybolt

ASTM D156, ASTM D6045

Pour déterminer si du carburant (kérosène, essence, diesel, naphta, etc.) est contaminé ou s'est dégradé pendant son stockage

APHA/Pt-Co/Hazen

ASTM D1209

L'indice de jaunissement est utilisé comme indicateur pour contrôler la pureté dans les secteurs de l'eau, l'industrie chimique, pétrolière et plastique

Gardner

ASTM D1544/D6166, DIN EN ISO 4630-2

Pour tester des produits, tels que des résines, des acides gras, des vernis et des huiles siccatives, qui se colorent en chauffant

CIELAB

DIN EN 11664-4, DIN 5033-3, 4630, ASTM Z 58.7.1 DIN 6174

Pour contrôler la qualité dans les segments des arômes et des parfums, ainsi que dans l'industrie agroalimentaire

Colorimétrie CIELab - Spectroscopie UV VIS

EBC

MEBAK Method 2.13.2, EBC Method 8.5, EBC Method 9,6

Pour mesurer l'intensité des couleurs et la turbidité (trouble) en unités EBC de la bière, du malt, du caramel, etc.

USP/EUP

USP-24 Monograph 631, EP méthode 2.2.2

Pour contrôler la qualité des médicaments

Hess-Ives

DGK test method F 050.2

Pour tester les produits chimiques et les liquides tensioactifs (principalement dans le secteur des cosmétiques)

 

Contrôle qualité des acides nucléiques
Cuvettes pour analyse UV VIS

Le tableau suivant fournit les domaines de transmission nominale des cuvettes :

Matière

Domaine de transmission théorique (nm)

Quartz UV lointain

170–2 700

Verre optique

320–2 500

Quartz proche IR

220–3 800

Silice UV

220–2 500

Plastique UV

220–900

Cellule jetable en PS

340–750

Cellule jetable en PMMA

285–750

 

Cuvette de spectroscopie UV VIS

 

Solutions aqueuses

Molécules organiques

Particules difficiles à éliminer

Protéines

Métaux lourds

Acides gras

Solutions de nettoyage

Parts égales en volume de HCl 3 M et d'éthanol

 

Laver avec 50 % d'acide nitrique

HNO3 concentré ou HCl 2 M

Parts égales en volume d'éthanol et de HCl 3 M

 

 

Incuber à température ambiante avec de la trypsine

 

(il n'est pas recommandé d'utiliser de l'éthanol et de l'acétone pour le nettoyage)

Parts égales en volume d'acide sulfurique 2 M et d'eau déionisée à 50 %

 

Eau régale

 

 

Parts égales en volume d'IPA et d'eau déionisée

Durée de trempage*

10 minutes

10 minutes

30 secondes

Toute la nuit

20 minutes

Essuyer

*La durée de trempage indiquée dans le tableau est une estimation très approximative ; cependant, il est uniquement recommandé de laisser tremper les cuvettes jusqu'à ce que les contaminants/souillures soient éliminés.

La spectroscopie UV VIS dans le secteur agroalimentaire
La spectroscopie UV VIS dans le secteur pharmaceutique
La spectroscopie UV VIS dans le secteur cosmétique
La spectroscopie UV VIS dans le secteur pétrochimique
La spectroscopie UV VIS dans le secteur chimique
La spectroscopie UV VIS dans le secteur des biotechnologies

Quels sont les différents types de spectroscopie ?

Les différentes techniques de spectroscopie se distinguent principalement par le type de rayonnements qu'elles utilisent, l'interaction entre l'énergie et le matériau, ainsi que le type de matériaux et les applications auxquelles ils sont destinés. Les techniques de spectroscopie couramment utilisées pour les analyses chimiques sont la spectroscopie atomique, la spectroscopie ultraviolet-visible (spectroscopie UV VIS), la spectroscopie infrarouge, la spectroscopie Raman et la spectroscopie par résonance magnétique nucléaire.

Type de spectroscopie

Type de rayonnement

Interactions

Longueur d'onde

Spectroscopie à rayons ϒ

Rayons ϒ

Noyau atomique

< 0,1 nm

Spectroscopie de fluorescence aux rayons X

Rayons X

Électrons des couches internes

0,01 – 2,0 nm

Spectroscopie UV sous vide

Ultraviolet (UV)

Ionisation

2,0 – 200 nm

Spectroscopie UV VIS

UV VIS

Électrons de valence

200 – 800 nm

Spectroscopie infrarouge et Raman

Infrarouge

Vibrations moléculaires

0,8 – 300 mm

Spectroscopie micro-onde 

Micro-ondes

Rotations moléculaires

1 mm à 30 cm

Spectroscopie par résonance paramagnétique électronique

Spin électronique

Spectroscopie par résonance magnétique nucléaire

Ondes radio

Spin nucléaire

0,6 – 10 m

 

Quelles sont les différentes interactions moléculaires dans la région UV ?

Types de transitions dans la région UV

Quelle est l'incidence des groupes fonctionnels sur les spectres ?

Prenons un groupe fonctionnel contenant des atomes avec une ou plusieurs paires isolées d'électrons qui n'absorbent pas le rayonnement ultraviolet/visible. Lorsque ce groupe fonctionnel est relié à un chromophore, il altère l'intensité et la longueur d'onde d'absorption. Ce phénomène est baptisé un auxochrome, c'est-à-dire un groupe qui intensifie la couleur.

La présence d'un auxochrome provoque le décalage de la position d'un pic ou d'un signal vers une longueur d'onde plus grande, ce qui est désigné par le terme de décalage bathochromique ou de décalage rouge. Les groupes fonctionnels contribuant aux groupes bathochromiques sont des substituants, tels que les groupes méthyle, hydroxyle, alcoxyle, halogène et aminé.

Le décalage de la position d'un pic ou d'un signal vers une longueur d'onde plus courte entraîné par un auxochrome est appelé décalage hypsochromique ou décalage bleu. En fait, la combinaison du chromophore et de l'auxochrome se comporte comme un nouveau chromophore avec un maximum d'absorption différent (λmax). Par exemple, le benzène présente un λmax à 256 nm, contre un λmax à 280 nm pour l'aniline. De ce fait, le groupe NH2 agit comme un auxochrome et provoque le décalage de λmax vers une valeur plus élevée.

Quelle est la différence entre la bande passante spectrale et la résolution en spectroscopie UV VIS ?

La bande passante spectrale (BPS) d'un spectrophotomètre est liée à la largeur physique de la fente et à la dispersion optique du monochromateur. La résolution est la capacité d'un instrument à séparer la lumière en régions de longueurs d'onde distinctes et finies, ainsi qu'à distinguer chaque région finie. La bande passante spectrale est généralement utilisée pour les instruments à balayage et la résolution pour les instruments à barrettes de diodes.

Pour les besoins de quantification de la plupart des pharmacopées, une bande passante spectrale de moins de 2 nm suffit et le critère d'acceptation pour le rapport est de 1.3. La résolution spectrale peut être utilisée à des fins de comparaison avec la bande passante spectrale.

Le tableau indique la résolution des spectrophotomètres Excellence UV VIS de METTLER TOLEDO, qui est mesurée en utilisant du toluène dans de l'hexane, et la BPS équivalente.

Dimensions

Résolution spectrale

BPS équivalente (nm)

UV5

> 1,5

< 2,0

UV5Bio

> 1,5

< 2,0

UV5Nano

> 1,7

< 1,5

UV7

> 1,9

≤ 1,0

 

Quelles sont les différentes sources lumineuses utilisées dans un spectrophotomètre UV VIS ?

La meilleure source lumineuse est celle qui offre une bonne intensité pour un faible bruit sur toutes les longueurs d'ondes des ultraviolets et de la lumière visible, tout en garantissant une bonne stabilité sur de longues périodes. De nombreuses sources lumineuses sont couramment employées comme indiqué ci-dessous.

Source de lumière

Plage de longueurs d'onde

(nm)

Région

Durée de vie

Lampe à incandescence

350 - 2 500

VIS + IR

3 000 h

Lampe à arc au deutérium

190 - 400

UV

1 000 h

Lampe à hydrogène

190 - 400

UV

1 000 h

Lampe flash xénon

190 - 1 100

UV + VIS + NIR

5 500 h*

* Correspond à des flashs de 50 Hz en utilisation constante

Dans quelle mesure un réseau de diffraction est-il meilleur qu'un prisme ?

Les prismes et les réseaux de diffraction sont des éléments de dispersion classiques. Un prisme permet la dispersion grâce à la différence d'indice de réfraction du matériau en fonction de la longueur d'onde. Le réseau de diffraction, quant à lui, s'appuie sur la différence de sens de diffraction pour chaque longueur d'onde due aux interférences. Les prismes et les réseaux de diffraction peuvent tous deux décomposer les spectres lumineux en différentes couleurs en vue de l'analyse. Cependant, un réseau de diffraction est moins sensible à la couleur de la lumière et peut séparer les couleurs sur un angle plus large qu'un prisme. Le verre du prisme est transparent à la lumière visible, mais il absorbe et bloque la lumière dans la région infrarouge et ultraviolette du spectre. Un réseau de diffraction pourvu de quelques centaines de raies par centimètre peut dévier la lumière dans la partie centrale du spectre visible d'au moins 20 degrés. L'angle de déflexion d'un prisme en verre est généralement beaucoup plus petit.

Quels composés inorganiques peuvent être mesurés par spectroscopie UV VIS ?

Les molécules peuvent être analysées par spectroscopie UV VIS dès lors qu'elles possèdent un groupe fonctionnel ou une conjugaison ou qu'elles produisent un complexe coloré. Comme les composés inorganiques ne contiennent pas de groupe fonctionnel ni de conjugaison, la méthode courante utilisée pour les analyser consiste à les soumettre à une réaction avec un composé approprié. Cette réaction génère un complexe coloré dont l'absorbance peut être mesurée par un spectrophotomètre dans la région visible et corrélée à sa concentration réelle. Par exemple, le fer est généralement analysé par réaction avec de la 1,10-phénanthroline afin de produire un complexe de couleur rouge. L'absorbance du complexe est mesurée à 570 nm pour estimer la concentration de fer.

Qu'est-ce qui distingue les spectrophotomètres à simple et à double faisceau ?

La principale différence entre un spectrophotomètre à simple faisceau et son homologue à double faisceau est la suivante :

Spectrophotomètre à simple faisceau - Un seul faisceau de lumière traverse l'échantillon

Spectrophotomètre à double faisceau - Le faisceau de lumière est divisé en deux parties : la première traverse l'échantillon, tandis que la seconde traverse le matériau de référence

La division du faisceau peut être réalisée de deux manières :

  1. de manière statique, à l'aide de miroirs partiellement transmetteurs ou un dispositif analogue ;
  2. en atténuant les faisceaux à l'aide de dispositifs mécaniques et optiques mobiles.

Comment analyser un film polymère solide par UV VIS ?

Comment analyser un film polymère solide par UV VIS ?

La température a-t-elle une incidence sur l'analyse UV VIS ?

La température affecte les valeurs d'absorbance. Différents solvants subissent différentes interactions à différentes températures. Les paramètres de solution qui changent sous l'effet de la température sont les suivants :

  • Vitesse de réaction. La vitesse change en cas de hausse de la température, ce qui provoque une modification de l'activité de l'échantillon. Les réactions enzymatiques/biomoléculaires sont très sensibles à la température.
  • Solubilité d'un soluté. La solubilité est affectée par les variations de température. Une mauvaise solubilité peut entraîner une absorption imprécise.
  • Expansion ou contraction du solvant. Cela peut entraîner une modification de la concentration de la solution et avoir un effet sur l'absorbance, cette dernière étant en relation linéaire avec la concentration.
  • Effet Schlieren. Cet effet peut survenir en cas de variation de la température et provoquer une série de courants de convection pouvant modifier la valeur vraie d'absorbance.

Les paramètres de performances optiques, tels que le bruit photométrique, la précision/répétabilité des longueurs d'onde, la répétabilité photométrique et la lumière diffuse, ne sont pas influencés par la température sur une plage de 10 à 40 °C.

En revanche, les paramètres optiques, comme la résolution photométrique (rapport de toluène-hexane) et la précision photométrique (K2Cr2O7 dans du HClO4), présentent une dépendance à la température allant de 0,014 à -0,034/unité sur la plage comprise entre 10 et 40 °C.

Certains systèmes thermostatiques hautes performances, comme CuveT et CuvetteChanger, permettent de contrôler la température pour la spectrophotométrie UV VIS. En savoir plus ici.

Qu'est-ce que la lumière diffuse ?

Qu'est-ce que la lumière diffuse ?

Pourquoi le compartiment d'échantillon est-il ouvert sur les spectrophotomètres UV VIS à barrettes de diodes ?

Le compartiment d'échantillon reste ouvert, car les instruments à barrettes de diodes utilisent une lentille inversée et procèdent à la détection simultanée de toutes les longueurs d'onde du spectre.

Lentille inversée : la lumière est diffractée après avoir traversé l'échantillon. De ce fait, seule une petite fraction de la lumière ambiante externe contribue au signal dans une région de longueurs d'onde donnée.

Détection simultanée : un détecteur à barrettes de diodes fournit 2 048 signaux d'intensité lumineuse en même temps, ce qui permet d'enregistrer l'ensemble du spectre en l'espace d'une seconde. Comme la mesure est très rapide, l'effet de la lumière ambiante s'en voit réduit de manière significative.

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