Good Pipetting Practice: Bessere Resultate durch Schulung und Support

Die meisten Life-Science-Anwendungen umfassen kritische Liquid-Handling-Schritte, bei denen das pipettierte Volumen das Ergebnis direkt beeinflusst. Wenn das Pipettieren nicht konsistent und genau ist, können Zeit, Geld und Material verschwendet werden. Genaues Pipettieren bildet die Grundlage für reproduzierbare Arbeit, die für die Generierung aussagekräftiger Daten unerlässlich ist.

Der erste Schritt zur Verbesserung der Pipettiergenauigkeit besteht darin, den richtigen Pipettentyp und den richtigen Volumenbereich zu wählen. Wählen Sie für die Größe die Pipette mit dem geringsten Volumen, die für das zu pipettierende Volumen geeignet ist. Wenn Sie beispielsweise 2 μl pipettieren und eine 5-μl-Pipette und eine 20-μl-Pipette haben, erhalten Sie mit der 5-μl-Pipette eine bessere Genauigkeit. 

Lesen Sie dieses White Paper zur Pipettenauswahl um zu erfahren, welche Pipette am besten für die Flüssigkeit und andere Faktoren geeignet ist die für Ihre Situation einzigartig sind: Auswahl der richtigen Pipette.

Sobald Sie das richtige Instrument haben, setzen Sie Ihre gute Pipettiertechnik in die Praxis um. Richten Sie einen Routinetestplan ein, um das Vertrauen in Ihre Ergebnisse im Laufe der Zeit zu maximieren, und stellen Sie wie bei jedem Präzisionsinstrument sicher, dass Sie ein regelmäßiges, fachkundiges Service- und Kalibrierungsprogramm einführen.

Der einfachste Weg, um die Genauigkeit eines Pipettiersystems schnell zu testen, ist der Rainin SmartCheck. Erfahren Sie mehr unter mt.com/SmartCheck 

Bei der Auswahl der richtigen Pipette müssen Sie Ihre Anforderungen bewerten. Erstens, welche Art von Proben pipettieren Sie? Sind sie wässrig? Oder sind sie viskos, flüchtig, schäumend, ätzend oder gefährlich? Für wässrige und nahezu wässrige Flüssigkeiten sind die gängigsten Luftpolsterpipetten (auch "Luftverdrängungspipetten" genannt) eine gute Wahl. Für viskose, flüchtige und andere ungewöhnliche Flüssigkeitstypen wäre eine Direktverdrängerpipette sowohl für die Genauigkeit als auch für die Sicherheit die bessere Wahl. 

Welches Volumen werden Sie pipettieren? Wie viele Proben müssen Sie von einem Gefäß in ein anderes umfüllen? Sehen Sie sich das White Paper zur Pipettenauswahl an, um zu verstehen, welche Pipette je nach Flüssigkeit und anderen Faktoren für Ihre Situation am besten funktioniert.

Das Pipettieren kleinstmöglicher Volumina erfordert spezielle Instrumente und Techniken. Eine Repeater-Pipette ist möglicherweise die beste Wahl, um Volumina bis zu 100 nL wiederholt zu dosieren. Eine andere Pipette kann auch für nur wenige Dosen funktionieren. Stellen Sie sicher, dass Sie die kleinste Pipette verwenden, die das Volumen aufnehmen kann, das Sie pipettieren möchten. 

Bei sehr geringen Volumina hat die Pipettiertechnik einen proportional größeren Einfluss auf die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit. Die Eintauchtiefe, der Pipettierwinkel und die Aspirationsrate sind wichtig zu kontrollieren. Das Poster "Pipetting Techniques " von Rainin kann Ihnen dabei helfen.

Die Rainin NanoRep Pipette dosiert Aliquots bis zu 100 nl. Hier erfharen Sie mehr: mt.com/NanoRep

Der wichtigste Faktor für ein genaues, reproduzierbares Mehrkanalpipettieren ist die Integrität der Dichtung für jeden Kanal der Pipette. Das bedeutet, dass jede Spitze perfekt passt, ohne dass Luft austritt. Verschiedene Hersteller erreichen dies auf unterschiedliche Weise, mit unterschiedlicher ergonomischer Leichtigkeit und Dichtungskonsistenz. Die LTS LiteTouch System-Pipettenspitzen von Rainin erfordern die geringste Kraft zum Aufstecken und Abwerfen bei Mehrkanalpipetten und dichten jedes Mal gleichmäßig ab.

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Halten Sie beim Aspirieren eine Pipette so nah wie möglich an der Senkrechten und vermeiden Sie einen Winkel von mehr als 20° von der Y-Achse. Wenn Sie beim Dosieren die Wand des Zielgefäßes berühren, um die gesamte Flüssigkeit vollständig von der Spitze zu ziehen, ist es in Ordnung, den 20°-Winkel zu überschreiten.

Das Vorwärtspipettieren ist die Standard-Pipettiertechnik und die beste Wahl für wässrige Proben. Bei viskosen und flüchtigen Proben bietet das Rückwärtspipettieren eine bessere Genauigkeit.

Beim Vorwärtspipettieren drücken Sie den Kolben bis zum ersten Anschlag, während Sie die Pipette außerhalb der Flüssigkeit halten. Tauchen Sie dann die Spitze 2-10 mm tief in die Flüssigkeit, mit der Sie arbeiten – nicht tiefer. Lassen Sie den Kolben langsam bis zur vollen Ausdehnung los, um das gesamte Flüssigkeitsvolumen anzusaugen. Um in Ihr Zielgefäß zu dosieren, bewegen Sie die Pipette in das Gefäß und drücken Sie dann den Kolben gleichmäßig durch den ersten Anschlag bis zum zweiten Anschlag – so weit der Kolben geht. Wenn der Kolben vollständig gedrückt ist, ziehen Sie die Spitze der Pipette leicht an der Wand des Gefäßes nach oben, um "abzustreifen". Dies hilft, das volle Flüssigkeitsvolumen vollständig abzugeben. Lassen Sie den Kolben los, werfen Sie die Pipettenspitze aus, legen Sie eine neue Pipettenspitze ein und wiederholen Sie den Vorgang.

Um rückwärts zu pipettieren drücken Sie den Kolben ganz nach unten durch den ersten Anschlag bis zum zweiten Anschlag – so weit der Kolben reicht. Tauchen Sie dann die Spitze in Flüssigkeit und lassen Sie den Kolben langsam und gleichmäßig los, um ihn anzusaugen. Gehen Sie zum Aufnahmegefäß und drücken Sie den Kolben NUR BIS ZUM ERSTEN STOPP, um das richtige Volumen abzugeben. In der Pipettenspitze verbleibt ein kleines Restvolumen. Bewegen Sie die Pipette über ein Dosiergefäß und drücken Sie den Kolben den Rest des Weges bis zum zweiten Anschlag, auch "Blowout"-Anschlag genannt, um die restliche Flüssigkeit freizusetzen. 

Lassen Sie den Kolben los, werfen Sie die Pipettenspitze ab, stecken Sie eine neue Pipettenspitze auf und wiederholen Sie den Vorgang.

Eine Luftpolsterpipette kann zum Pipettieren von leicht viskosen Flüssigkeiten, einschließlich Blut, verwendet werden. Um maximale Genauigkeit zu erreichen, verwenden Sie das obene geschriebene Rückwärtspipettieren. Für viskosere Flüssigkeiten, wie z. B. 85 % Glycerin oder Triton X-100, bietet eine Direktverdrängerpipette die beste Genauigkeit und Konsistenz.

Leicht flüchtige Flüssigkeiten wie Ethanol können mit einer Luftpolsterpipette mit dem oben erwähnten Rückwärtspipettieren pipettiert werden. Verdrängerpipetten sind jedoch die bessere Wahl für flüchtige Flüssigkeiten. 

Wenn Sie eine  Luftpolsterpipette verwenden, spülen Sie die Pipettenspitze mindestens fünfmal vor dem Pipettieren des Volumens vor (aspirieren und dispensieren). Dadurch wird die Luft in der Pipette ausgeglichen und die Verdunstungsrate der Flüssigkeit verlangsamt. Die schnelle Verdunstung flüchtiger Flüssigkeiten dehnt die Luft in einer Pipette aus und drückt Flüssigkeit aus der Spitze, ohne dass Druck auf den Kolben ausgeübt wird, was die genaue Volumenabgabe verringert.

Flüchtige Flüssigkeiten wie Acetonitril lassen sich im Allgemeinen besser mit einer Direktverdrängerpipette handhaben.

Ja, beim Pipettieren mit Luftpolsterpipetten können Aerosole entstehen. Aerosole können in das Innere der Pipette aufsteigen und die Innenwände und den Kolben verunreinigen. Die Aerosolisierung tritt leichter auf, wenn der Kolben während der Aspiration zu schnell losgelassen wird, und kann auch in die entgegengesetzte Richtung außerhalb der Pipette bei zu schneller Abgabe auftreten. 

Um Aerosole zu minimieren, aspirieren und dosieren Sie langsam und gleichmäßig. Verwenden Sie gefilterte Spitzen. 

Pipetten mit positiver Verdrängung verwenden spritzenartige Spitzen, die eine Aerosolisierung verhindern. Eine Direktverdrängerpipette ist die beste Wahl für das Pipettieren gefährlicher Flüssigkeiten und aller Flüssigkeiten mit erhöhter Viskosität oder Flüchtigkeit.

Sehr kalte oder heiße Flüssigkeiten verändern den Luftdruck in  Luftpolsterpipetten, was zu ungenauem Pipettieren führt. 

Direktverdrängerpipetten mit spritzenartigen Spitzen, die keine Lufteinschlüsse zwischen Flüssigkeit und Kolben haben, werden von unterschiedlichen Flüssigkeitstemperaturen nicht beeinflusst. Verdrängerpipetten liefern genaue Ergebnisse mit Flüssigkeiten außerhalb der Raumtemperatur.

Wenn Sie eine sehr heiße oder kalte Flüssigkeit mit einer Luftpolsterpipette pipettieren müssen, spülen Sie die Pipettenspitze nicht vor – dies ist in der Regel die beste Methode für höchste Genauigkeit. Saugen und dosieren Sie stattdessen zügig, um die Auswirkungen der Flüssigkeitstemperatur auf den inneren Luftspalt der Pipette zu minimieren.

Um Blasen und Schaumbildung beim Pipettieren zu vermeiden, tauchen Sie die Spitze nicht mehr als 10 mm in das Flüssigkeitsreservoir und saugen Sie langsam an.

Das Rückwärtspipettieren bietet zusätzlichen Schutz, da Sie vor dem Ansaugen den Kolben bis kurz hinter den 1. Anschlag drücken, sodass keine Luft in die flüssige Probe injiziert werden kann. Weitere Informationen zum Rückwärtspipettieren finden Sie auf dieser Seite. 

Eine Direktverdrängerpipette erzeugt bei der Interaktion mit Flüssigkeit keine Blasen oder Schaum, da ihre spritzenartige Spitze keine Luft für die Wechselwirkung der Flüssigkeit enthält.

Dekontaminieren Sie eine Pipette, indem Sie sie mit einem feuchten Tuch und einem Reinigungsmittel wie Isopropanol oder einer 10%igen Bleichlösung abwischen. Vermeiden Sie das durchsichtige Kunststofffenster des Mikrometers.

Autoklavieren kann eine weitere Option sein, aber überprüfen Sie die Gerätespezifikationen Ihrer Pipette. Wenn es autoklavierbar ist, ist die ganze Pipette autoklavierbar oder nur das Unterteil? Oft ist nur das Unterteil autoklavierbar.

Weitere Informationen zum Reinigen einer Pipette finden Sie auf dem Poster zur Reinigung einer Pipette .

Die Kalibrierung ist die kontrollierte und dokumentierte Messung der systematischen Fehlerrate (Genauigkeit) und der zufälligen Fehlerrate (Präzision) einer Pipette. In vielen Laborumgebungen muss die Pipettenleistung regelmäßig getestet und gesetzlich unter bestimmten Bedingungen dokumentiert werden, die von einer akkreditierten Stelle zertifiziert werden. 

ISO-zertifizierte Anbieter kalibrieren Pipetten in einer kontrollierten Umgebung. Die Ergebnisse werden sicher auf einem Kalibrierzertifikat dokumentiert und zu einer auditfähigen Leistungshistorie für jedes Gerät hinzugefügt. Wenn Anpassungen erforderlich sind, bieten ISO-zertifizierte Kalibrierlabore fachkundigen Service mit vom Hersteller empfohlenen Teilen und Schmiermitteln. 

Rainin und METTLER TOLEDO sind die weltweit größte Pipettenserviceorganisatzion mit schnellen Reparaturen via Send-In- oder Vor-Ort-Serviceoptionen auszeichnet. Die Servicelabore sind nach ISO 17025 zertifiziert, und die Verfahren folgen der Aktualisierung von ISO 8655 im Jahr 2022. 

Die Pipettengenauigkeit – oder Richtigkeit, wie sie heute genannt wird – ist die Differenz zwischen dem mittleren Volumen aller Messungen (4-10 Messungen) und dem eingestellten Volumen. 

Die Präzision ist die Standardabweichung aller durchgeführten Messungen. 

Die Unsicherheit einer Pipette ist der quantitative Begriff für ihre Gesamtgenauigkeit. Es ist eine Kombination aus Richtigkeit (ein Maß für systematische Fehler) und Präzision (ein Maß für zufällige Fehler). 

Die Gleichung für die Unsicherheit lautet: 

Unsicherheit = Systematischer Fehler + Zufallsfehler * k. k (Korrekturfaktor oder Z-Score) hängt von der Anzahl der Messungen ab. k=3,31 für vier Messungen und 2 für zehn Messungen.

Bewahren Sie Pipetten vertikal an einem Regal oder Pipettenständer auf. Halten Sie die Pipetten sauber und frei von Verunreinigungen. Halten Sie die Pipettenracks geschlossen.