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Richtiges Thermostatisieren von UV/VIS-Analysen

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Genaue Temperaturkontrolle für die UV/VIS-Spektroskopie

Die Temperaturkontrolle ist ein wichtiger Parameter bei vielen Anwendungen in der UV/VIS-Spektroskopie, insbesondere bei temperaturempfindlichen organischen Proben. In diesem Leitfaden wird beschrieben, warum die Temperatur so ein wichtiger Faktor ist, und es werden häufige Anwendungen wie die Lipaseaktivität, die Denaturierung von Proteinen, der Schmelzpunkt von DNA und die Michaelis-Menten-Kinetik von beta-Galactosidase näher erläutert. 
 

Dieser Leitfaden informiert ausserdem detailliert über die verfügbaren Thermostatisierlösungen für Excellence-UV/VIS-Spektrometer von METTLER TOLEDO:

  • CuveT – Temperaturkontrolle für Einzelproben
  • CuvetteChanger – Temperaturkontrolle für mehrere Proben
Laden Sie sich den kostenlosen Leitfaden zur UV/VIS-Thermostatisierung herunter und profitieren Sie ausserdem von praktischen Tipps & Hinweisen für die routinemässige thermostatisierte UV/VIS-Spektroskopie auf der Basis von FAQ.

1. Kurzfassung

Dieser Leitfaden beschreibt die Bedeutung einer exakten Messung der Temperatur für die UV/VIS-Spektroskopie beispielhaft anhand häufiger Anwendungen aus den Biowissenschaften. Darüber hinaus werden praktische Tipps und Hinweise für genaue UV/VIS-Messungen bei erhöhten Temperaturen gegeben, insbesondere für METTLER TOLEDO Excellence-UV/VIS-Spektrometer mit CuveT und CuvetteChanger.  

2. Einführung

Thermostatisierung bedeutet in der UV/VIS-Spektroskopie üblicherweise, wie nachfolgend erläutert a) vor, b) während oder c) nach der spektroskopischen Messung definierte Temperaturbedingungen herzustellen:

a) Proben/Analyte können eine exakte Temperatur erforderlich machen, bei der die Zersetzung verzögert wird oder ideale Reaktionsbedingungen für Vorstufen herrschen, die für eine (chemische) Folgeraktion erforderlich sind. Diese Folgereaktion kann durch Thermostatisierung spektroskopisch analysiert werden.     

b) Es können konstante Temperaturbedingungen hergestellt werden oder die Temperatur folgt einem zuvor definierten Protokoll. Solche Bedingungen können chemische Reaktionen, die spektroskopisch beobachtet werden sollen, katalysieren.  

c) Vorherige oder andere Temperaturbedingungen können für nachfolgende spektroskopische Messungen wiederhergestellt werden, um reversible (chemische) Reaktionen zu beobachten.

[…]

Erhalten Sie weitere Informationen im Leitfaden zur richtigen Thermostatisierung von UV/VIS-Analysen

 

3. Anwendungsbeispiele für temperaturabhängige UV/VIS-Spektroskopie

3.1 Bestimmung der Lipaseaktivität

Die Bestimmung der Lipaseaktivität dient als Beispiel, in dem erhöhte Temperaturen oberhalb der Umgebungsbedingungen benötigt werden, um ideale Bedingungen für eine Enzym-katalysierte chemische Reaktion, die spektroskopisch beobachtet werden soll, herzustellen.

[…]

3.2 Temperaturinduzierte Denaturierung von Proteinen

[…]

3.3 Michaelis-Menten-Kinetik von beta-Galactosidase

[…]

3.4 Schmelztemperatur von DNA

[…]

Erhalten Sie weitere Informationen im Leitfaden zur richtigen Thermostatisierung von UV/VIS-Analysen

 

4. METTLER TOLEDO CuveT Peltier-Thermostatisiereinheit

CuveT ist ein thermoelektrischer (Peltier-basierter) Thermostat für eine einzelne Küvette, der die Temperatur bei Anwendungen in der UV/VIS-Spektroskopie effizient kontrolliert. Dabei wird ein Temperaturbereich von 4 °C bis 95 °C abgedeckt. Dieses System zur Thermostatisierung kann an die UV7, UV5Bio und UV5 Excellence-UV/VIS-Spektrometer von METTLER TOLEDO angeschlossen werden. Die Einheit wird oben auf dem Spektrometer angebracht, wobei zur Installation keinerlei Werkzeug erforderlich ist.

[…]

Erhalten Sie weitere Informationen im Leitfaden zur richtigen Thermostatisierung von UV/VIS-Analysen

 

5. Praktische Tipps & Hinweise zur Thermostatisierung mit dem CuveT

Dieses Kapitel bietet praktische Tipps & Hinweise für routinemässige thermostatisierte UV/VIS-Spektroskopie-Messungen mit dem CuveT auf der Basis von FAQ. 

[…]

Erhalten Sie weitere Informationen im Leitfaden zur richtigen Thermostatisierung von UV/VIS-Analysen

6. Thermostatisierung mit dem METTLER TOLEDO CuvetteChanger

Der CuvetteChanger von METTLER TOLEDO erlaubt für Messungen mit Blindwertabzug oder komplexe kinetische Anwednungen effiziente automatische Messungen von Serien mit bis zu 8 Küvetten. Bei der Verwendung eines externen Thermostaten ist es möglich, die Proben in den Küvetten im Temperaturbereich von 10 - 80 °C zu thermostatisieren.

[…]

Erhalten Sie weitere Informationen im Leitfaden zur richtigen Thermostatisierung von UV/VIS-Analysen

 

7. Quellen

[1] www.mt.com/uv-vis

[2] www.mt.com/cuvet-peltier-uvvis

[3] Determination of Lipase Activity, Method PNAB-LIP39, Biocon Española S.A.

[4] Journal of Chemical Education, March 2000, DOI: 10.1021/ed077p 380

[5] 1. Enzyme Handbook, II, Barman, T. E., Springer- Verlag (Berlin-Heidelberg: 1969), p. 581.