Thực hành Pipetting tốt: Kết quả tốt hơn thông qua đào tạo và hỗ trợ

Hầu hết các ứng dụng khoa học đời sống bao gồm các bước xử lý chất lỏng quan trọng, trong đó thể tích khi hút pipet ảnh hưởng trực tiếp đến kết quả. Nếu đường ống không nhất quán và chính xác, thì thời gian, tiền bạc và vật liệu có thể bị lãng phí. Pipet chính xác tạo thành nền tảng của công việc có thể tái tạo, điều này rất cần thiết để tạo ra dữ liệu có ý nghĩa.

Bước đầu tiên để cải thiện độ chính xác của pipet là chọn đúng loại pipet và dải thể tích thích hợp. Đối với kích thước, hãy chọn pipet có thể tích thấp nhất phù hợp với thể tích bạn đang hút. Ví dụ: nếu bạn đang pipet 2 μL và có pipet 5 μL và pipet 20 μL, bạn sẽ có được độ chính xác tốt hơn khi sử dụng 5 μL. 

Trang trắng này sẽ hướng dẫn bạn cách lựa chọn pipet để hiểu được pipet nào sẽ hoạt động tốt với các loại chất lỏng khác nhau, đồng thời có thể đáp ứng được các yêu cầu riêng biệt của phòng thí nghiệm mà bạn đang công tác: Chọn đúng pipet

Khi đã chọn được dụng cụ phù hợp, hãy áp dụng kỹ thuật pipet tốt của bạn vào thực tế. Thiết lập lịch trình kiểm tra định kỳ để tối đa hóa sự đáng tin cậy trong kết quả của bạn theo thời gian, cũng như với bất kỳ thiết bị đo lường nào, hãy đảm bảo thiết lập chế độ hiệu chuẩn và dịch vụ thường xuyên bởi chuyên gia.

Cách dễ nhất để nhanh chóng kiểm tra độ chính xác của pipet có thể là sử dụng Rainin SmartCheck. Tìm hiểu thêm tại mt.com/SmartCheck 

Chọn pipet phù hợp liên quan đến việc đánh giá các yêu cầu của bạn. Đầu tiên, bạn đang lấy loại mẫu nào? Chúng có phải là nước không? Hay chúng nhớt, dễ bay hơi, tạo bọt, ăn mòn hoặc nguy hiểm? Đối với chất lỏng dạng nước và gần nước, pipet dịch chuyển không khí phổ biến nhất (còn được gọi là pipet "đệm khí") là một lựa chọn tốt. Đối với các loại chất lỏng nhớt, dễ bay hơi và các loại chất lỏng bất thường khác, pipet dịch chuyển dương sẽ là lựa chọn tốt hơn cho cả độ chính xác và an toàn. 

Bạn sẽ hút khối lượng bao nhiêu? Bạn cần bao nhiêu mẫu để chuyển từ vật chứa mẫu này sang vật chứa mẫu khác? Kiểm tra trang trắng này về lựa chọn pipet để hiểu pipet nào hoạt động tốt nhất tùy thuộc vào chất lỏng và các yếu tố khác trong trường hợp của bạn.

Pipetting khối lượng nhỏ nhất có thể liên quan đến các công cụ và kỹ thuật chuyên dụng. Pipet lặp lại có thể là lựa chọn tốt nhất của bạn để lặp lại thể tích phân phối xuống đến 100 nL. Một pipet khác cũng có thể hoạt động chỉ trong một vài lần phân phối. Đảm bảo sử dụng pipet có kích thước nhỏ nhất sẽ phù hợp với thể tích bạn muốn pipet. 

Ở khối lượng rất thấp, kỹ thuật pipet có tác động lớn hơn tương ứng đến độ chính xác và khả năng tái tạo. Độ sâu ngâm, góc pipet và tốc độ hít là rất quan trọng để kiểm soát. Áp phích Pipetting Techniques từ Rainin có thể giúp bạn.

Rainin NanoRep lặp lại phân phối aliquots xuống đến 100 nL. Tìm hiểu thêm tại đây: mt.com/NanoRep

Yếu tố quan trọng nhất trong pipet đa kênh chính xác, có thể tái tạo là tính toàn vẹn của phớt chặn cho mọi kênh của pipet. Điều đó có nghĩa là mọi đầu đều vừa vặn hoàn hảo trên mỗi trục mà không bị rò rỉ không khí. Các nhà sản xuất khác nhau đạt được điều này theo những cách khác nhau, với sự dễ dàng về công thái học và mức độ nhất quán niêm phong khác nhau. Đầu pipet của Hệ thống LTS LiteTouch từ Rainin yêu cầu ít lực nhất để tải và đẩy ra khỏi đa kênh, và chúng luôn bịt kín mọi lúc.

Nhấp vào đây để xem nhiều loại pipet đa kênh của Rainin.

Khi hút, giữ pipet càng gần phương thẳng đứng càng tốt, tránh bất kỳ góc nào lớn hơn 20° so với trục Y. Khi phân phối, nếu bạn đang chạm vào thành của vật chứa mẫu mong muốn để hút tất cả chất lỏng từ đầu tip, bạn có thể vượt quá góc 20 °.

Pipet tiến là kỹ thuật pipet tiêu chuẩn và là sự lựa chọn tốt nhất cho các mẫu nước. Đối với các mẫu nhớt và dễ bay hơi, pipet ngược mang lại độ chính xác tốt hơn.

Để pipet tiến, đẩy pít tông xuống điểm dừng đầu tiên trong khi giữ pipet bên ngoài chất lỏng. Sau đó, nhúng đầu sâu 2-10mm vào chất lỏng mà bạn đang cần pipetting - không sâu hơn. Nhả pít tông từ từ cho đến mức mở rộng hoàn toàn để hút toàn bộ thể tích chất lỏng. Để phân phối vào bình mục tiêu của bạn, hãy di chuyển pipet vào bình, sau đó nhấn pít tông với tốc độ đồng đều qua điểm dừng đầu tiên đến điểm dừng thứ hai - nhấn đến chu trình của pít tông. Khi pít tông được ép hoàn toàn, kéo nhẹ đầu pipet lên thành vật dụng chứa để rút đầu típ ra khỏi dung dịch. Điều này giúp phân phối hoàn toàn thể tích chất lỏng đầy đủ. Nhả pít tông, đẩy đầu pipet ra, nạp đầu pipet mới và lặp lại.

Để đảo ngược pipet, hãy đẩy pít tông xuống hết điểm dừng đầu tiên đến điểm dừng thứ hai - cho đến hết chu trình của pít tông. Sau đó, nhúng đầu vào chất lỏng và từ từ và đều nhả pít tông để hút. Di chuyển đến bình nhận và nhấn pít tông CHỈ ĐẾN ĐIỂM DỪNG ĐẦU TIÊN để phân phối đúng âm lượng. Một thể tích nhỏ còn lại sẽ vẫn còn trong đầu pipet. Di chuyển pipet qua bình phân phối bỏ đi và nhấn pít tông phần còn lại của đường xuống điểm dừng thứ hai, còn được gọi là điểm dừng "xả khí", để giải phóng bất kỳ chất lỏng nào còn lại. 

Nhả pít tông, đẩy đầu pipet ra, nạp đầu pipet mới và lặp lại.

Một pipet dịch chuyển không khí có thể được sử dụng để pipet chất lỏng hơi nhớt, bao gồm cả máu. Để đạt được độ chính xác tối đa, hãy sử dụng kỹ thuật pipet ngược được mô tả ở trên. Đối với các chất lỏng nhớt hơn, chẳng hạn như 85% glycerol hoặc Triton X-100, pipet dịch chuyển dương mang lại độ chính xác và nhất quán tốt nhất.

Các chất lỏng hơi dễ bay hơi như ethanol có thể được hút pipet bằng pipet dịch chuyển không khí bằng kỹ thuật pipet ngược nói trên. Tuy nhiên, pipet dịch chuyển dương là lựa chọn tốt hơn cho chất lỏng dễ bay hơi. 

Nếu sử dụng pipet dịch chuyển không khí, hãy rửa trước đầu pipet (hút và phân phối) ít nhất năm lần trước khi hút thể tích của bạn. Điều này cân bằng không khí bên trong pipet, làm chậm tốc độ bay hơi của chất lỏng. Sự bay hơi nhanh chóng của chất lỏng dễ bay hơi làm giãn nở không khí bên trong pipet và đẩy chất lỏng ra khỏi đầu mà không có bất kỳ áp lực nào được đặt lên pít tông, và điều này làm giảm khả năng phân phối thể tích chính xác.

Các chất lỏng dễ bay hơi như acetonitril thường được xử lý tốt hơn với pipet dịch chuyển dương.

Có, pipet bằng pipet dịch chuyển không khí có thể tạo ra sol khí. Sol khí có thể bay vào bên trong pipet và làm ô nhiễm thành bên trong và piston. Quá trình sol khí xảy ra dễ dàng hơn khi pít tông được giải phóng quá nhanh trong quá trình hút và cũng có thể xảy ra theo hướng ngược lại bên ngoài pipet với sự phân phối quá nhanh. 

Để giảm thiểu sol khí, hút và phân phối từ từ và đều. Sử dụng các mẹo đã lọc. 

Pipet dịch chuyển dương sử dụng các mẹo kiểu ống tiêm ngăn chặn sự bình xịt. Pipet dịch chuyển dương là lựa chọn tốt nhất để pipet chất lỏng nguy hiểm và bất kỳ chất lỏng nào có độ nhớt hoặc độ bay hơi cao.

Chất lỏng rất lạnh hoặc nóng làm thay đổi áp suất không khí trong pipet dịch chuyển không khí, dẫn đến pipet không chính xác. 

Pipet dịch chuyển dương, với các đầu kiểu ống tiêm không có túi khí giữa chất lỏng và piston, không bị ảnh hưởng bởi nhiệt độ khác nhau của chất lỏng. Pipet dịch chuyển dương sẽ mang lại kết quả chính xác với chất lỏng không ở nhiệt độ phòng.

Nếu bạn phải pipet một chất lỏng rất nóng hoặc lạnh bằng pipet dịch chuyển không khí, không rửa trước đầu pipet — đây thường là cách tốt nhất để có độ chính xác cao nhất. Thay vào đó, hãy hút và phân phối nhanh chóng để giảm thiểu ảnh hưởng của nhiệt độ của chất lỏng lên khe hở không khí bên trong của pipet.

Để tránh bong bóng và tạo bọt khi pipet, không nhúng đầu quá 10mm vào bình chứa chất lỏng và hút chậm.

Pipet ngược cung cấp sự bảo vệ bổ sung bởi vì, trước khi hút, bạn nhấn hoàn toàn pít tông đến điểm dừng thứ 2, do đó không có cơ hội bơm không khí vào mẫu chất lỏng. Để biết thêm về pipet ngược, hãy truy cập trang này. 

Pipet dịch chuyển dương không tạo ra bong bóng hoặc bọt khi tương tác với chất lỏng vì đầu ống tiêm của nó không có không khí để chất lỏng tương tác.

Khử trùng pipet bằng cách lau bằng vải ướt và chất tẩy rửa như isopropanol hoặc dung dịch tẩy 10%. Tránh cửa sổ nhựa trong suốt của micromet.

Nồi hấp tiệt trùng có thể là một lựa chọn khác, nhưng hãy kiểm tra thông số kỹ thuật dụng cụ của pipet của bạn. Nếu nó có thể hấp tiệt trùng, toàn bộ dụng cụ được hấp tiệt trùng hay chỉ có phần hút đẩy chất lỏng (liquid end)?  Thông thường, chỉ có phần hút đẩy chất lỏng có thể được hấp tiệt trùng.

Để biết thêm về cách làm sạch pipet, hãy tải áp phích Làm sạch pipet .

Hiệu chuẩn là phép đo được kiểm soát và ghi lại tỷ lệ sai số một cách có hệ thống (độ chính xác) và tỷ lệ lỗi ngẫu nhiên (độ chính xác) của pipet. Trong nhiều môi trường phòng thí nghiệm, hiệu suất pipet phải được kiểm tra thường xuyên và ghi lại bởi pháp luật trong các điều kiện cụ thể được chứng nhận bởi một cơ quan được công nhận. 

Các nhà cung cấp được chứng nhận ISO hiệu chuẩn pipet trong một môi trường được kiểm soát. Kết quả được đảm bảo ghi lại chắc chắn trên chứng chỉ hiệu chuẩn, bổ sung vào lịch sử hiệu suất sẵn sàng kiểm tra cho từng thiết bị. Khi cần điều chỉnh, các phòng thí nghiệm hiệu chuẩn được chứng nhận ISO sẽ cung cấp dịch vụ được thực hiện bởi chuyên gia, sẽ sử dụng đúng các bộ phận và chất bôi trơn được khuyến nghị bởi nhà sản xuất. 

Rainin và METTLER TOLEDO là tổ chức dịch vụ pipet lớn nhất thế giới với sự thay đổi nhanh chóng từ các tùy chọn dịch vụ gửi thư và tại chỗ. Các phòng thí nghiệm dịch vụ được chứng nhận ISO 17025 và các quy trình tuân theo bản cập nhật năm 2022 lên ISO 8655. 

Độ chính xác của pipet — hoặc tính chân thật, như nó được gọi bây giờ — là sự khác biệt giữa thể tích trung bình của tất cả các phép đo (4-10 phép đo) và thể tích được cài đặt. 

Độ chính xác là độ lệch chuẩn của tất cả các phép đo được thực hiện. Kết quả của các phép đo khác nhau bao nhiêu?

Độ không chắc chắn của pipet là thuật ngữ định lượng cho độ chính xác tổng thể của nó. Nó là sự kết hợp giữa tính đúng (thước đo lỗi hệ thống) và độ chính xác (thước đo lỗi ngẫu nhiên). 

Phương trình cho sự không chắc chắn là: 

Độ không chắc chắn = Lỗi hệ thống + Lỗi ngẫu nhiên * k. k (hệ số bao phủ hoặc điểm Z) phụ thuộc vào số lượng phép đo. k = 3,31 cho bốn phép đo và 2 cho mười phép đo.

Bảo quản pipet theo chiều dọc, treo trên kệ hoặc giá đỡ pipet. Giữ pipet sạch sẽ và không có bất kỳ chất gây ô nhiễm nào. Đóng nắp hộp giá đỡ đầu típ pipet.