Doğru Pipetleme Uygulaması: Eğitim ve Destek ile Daha İyi Sonuçlar

Çoğu yaşam bilimi uygulaması, pipetlenmiş hacmin sonucu doğrudan etkilediği kritik sıvı işleme adımlarını içerir. Pipetleme tutarlı ve doğru değilse, zaman, para ve malzeme boşa gidebilir. Doğru pipetleme, anlamlı veriler üretmek için gerekli olan tekrarlanabilir çalışmanın temelini oluşturur.

Pipetleme doğruluğunu artırmanın ilk adımı, doğru pipet türünü ve uygun hacim aralığını seçmektir. Boyut için, pipetlediğiniz hacme uygun en düşük hacimli pipeti seçin. Örneğin, 2 μL'lik pipetleme yapıyorsanız ve 5 μL'lik bir pipetiniz ve 20 μL'lik bir pipetiniz varsa, 5 μL'yi kullanarak daha iyi doğruluk elde edersiniz. 

Sıvı ve durumunuza özgü diğer faktörler için hangi pipetin en iyi sonucu verdiğini anlamak için pipet seçimiyle ilgili bu teknik dokümana göz atın: Doğru Pipeti Seçme

Doğru cihaza sahip olduğunuzda, iyi pipetleme tekniğinizi uygulamaya koyun. Zaman içinde sonuçlarınıza olan güveni en üst düzeye çıkarmak için rutin bir test programı oluşturun ve herhangi bir hassas cihazda olduğu gibi, düzenli, uzman bir servis ve kalibrasyon rejimi uyguladığınızdan emin olun.

Bir pipetin doğruluğunu hızlı bir şekilde test etmenin en kolay yolu Rainin SmartCheck olabilir. Daha fazla bilgi için mt.com/SmartCheck adresini ziyaret edin

Doğru pipeti seçmek, gereksinimlerinizi değerlendirmeyi içerir. İlk olarak, ne tür numuneleri pipetliyorsunuz? Onlar sulu mu? Yoksa viskoz, uçucu, köpüren, aşındırıcı veya tehlikeli mi? Sulu ve suluğa yakın sıvılar için en yaygın hava yer değiştirmeli pipetler ("hava yastıklı" pipetler olarak da adlandırılır) iyi bir seçimdir. Viskoz, uçucu ve diğer olağandışı sıvı türleri için pozitif yer değiştirmeli pipet hem doğruluk hem de güvenlik açısından daha iyi bir seçim olacaktır. 

Hangi hacimde pipetleme yapacaksınız? Bir gemiden diğerine aktarmak için kaç numuneye ihtiyacınız var? Sıvıya ve durumunuza özgü diğer faktörlere bağlı olarak hangi pipetin en iyi sonucu verdiğini anlamak için pipet seçimiyle ilgili bu teknik incelemeye göz atın.

Mümkün olan en küçük hacimlerde pipetleme, özel aletler ve teknikler gerektirir. 100 nL'ye kadar olan hacimleri tekrar tekrar dağıtmak için bir tekrarlayıcı pipet en iyi seçiminiz olabilir. Başka bir pipet de yalnızca birkaç dağıtım için işe yarayabilir. Pipetlemek istediğiniz hacmi karşılayacak en küçük boyutlu pipeti kullandığınızdan emin olun. 

Çok düşük hacimlerde, pipetleme tekniğinin doğruluk ve tekrarlanabilirlik üzerinde orantılı olarak daha büyük bir etkisi vardır. Daldırma derinliği, pipetleme açısı ve aspirasyon hızının kontrol edilmesi önemlidir. Rainin'in Pipetleme Teknikleri posteri bu konuda size yardımcı olabilir.

Rainin NanoRep, 100 nL'ye kadar alikotları tekrar dağıtır. Daha fazla bilgi için : mt.com/NanoRep

Doğru, tekrarlanabilir çok kanallı pipetlemede en önemli faktör, pipetin her kanalı için contanın bütünlüğüdür. Bu, her ucun sıfır hava sızıntısı ile her şafta mükemmel şekilde oturduğu anlamına gelir. Farklı üreticiler bunu, değişen ergonomik kolaylık ve sızdırmazlık tutarlılığı seviyeleri ile farklı şekillerde başarır. Rainin'in LTS LiteTouch Sistemi pipet uçları, çok kanallı pipet uçlarını yüklemek ve çıkarmak için en az kuvvete ihtiyaç duyar ve her seferinde tutarlı bir şekilde sızdırmazlık sağlar.

Rainin'in çok kanallı pipet çeşitlerini görmek için buraya tıklayın.

Aspirasyon yaparken, Y ekseninden 20°'den daha büyük bir açıdan kaçınarak pipeti mümkün olduğunca dikeye yakın tutun. Dağıtım yaparken, tüm sıvıyı uçtan tamamen çekmek için hedef kabın duvarına dokunuyorsanız, 20° açıyı aşmak sorun değil.

İleri pipetleme, standart pipetleme tekniğidir ve sulu numuneler için en iyi seçimdir. Viskoz ve uçucu numuneler için ters pipetleme daha iyi doğruluk sağlar.

Pipeti ileri taşımak için, pipeti sıvının dışında tutarken pistonu ilk dayanağa kadar aşağı doğru itin. Ardından, ucu çalıştığınız sıvının 2-10 mm derinliğine daldırın - daha derin değil. Tam sıvı hacmini aspire etmek için pistonu yavaşça tam uzatmaya bırakın. Hedef kabınıza dağıtmak için, pipeti kabın içine hareket ettirin, ardından pistonu ilk durdurucudan ikinci durdurucuya kadar eşit bir hızda bastırın - pistonun gittiği yere kadar. Piston tamamen bastırılmışken, "dokunmak" için pipetin ucunu kabın duvarından hafifçe yukarı sürükleyin. Bu, tam sıvı hacminin tamamen dağıtılmasına yardımcı olur. Pistonu serbest bırakın, pipet ucunu çıkarın, yeni bir pipet ucu yükleyin ve tekrarlayın.

Pipeti tersine çevirmek için, pistonu ilk durdurucudan ikinci durdurucuya kadar - pistonun gittiği yere kadar - sonuna kadar itin. Ardından, ucu sıvıya batırın ve aspire etmek için pistonu yavaşça ve eşit bir şekilde serbest bırakın. Alıcı kaba gidin ve doğru hacmi dağıtmak için pistona YALNIZCA İLK DURDURMAYA kadar bastırın. Pipet ucunda küçük bir artık hacim kalacaktır. Pipeti bir ıskarta dağıtma kabının üzerine getirin ve kalan sıvıyı boşaltmak için pistonu "üfleme" durdurucusu olarak da adlandırılan ikinci durdurucuya kadar geri kalan süre boyunca bastırın. 

Pistonu serbest bırakın, pipet ucunu çıkarın, yeni bir pipet ucu yükleyin ve tekrarlayın.

Kan da dahil olmak üzere hafif viskoz sıvıları pipetlemek için hava yer değiştirmeli bir pipet kullanılabilir. Maksimum doğruluk elde etmek için yukarıda açıklanan ters pipetleme tekniğini kullanın. %85 gliserol veya Triton X-100 gibi daha viskoz sıvılar için pozitif yer değiştirmeli pipet en iyi doğruluğu ve tutarlılığı sunar.

Etanol gibi hafif uçucu sıvılar, yukarıda belirtilen ters pipetleme tekniği kullanılarak hava yer değiştirmeli bir pipet ile pipetlenebilir. Bununla birlikte, pozitif yer değiştirmeli pipetler uçucu sıvılar için daha iyi bir seçimdir. 

Hava yer değiştirmeli bir pipet kullanıyorsanız, hacminizi pipetlemeden önce pipet ucunu en az beş kez önceden durulayın (aspire edin ve dağıtın). Bu, pipetin içindeki havayı dengeleyerek sıvının buharlaşma hızını yavaşlatır. Uçucu sıvıların hızlı buharlaşması, bir pipetin içindeki havayı genişletir ve pistona herhangi bir baskı uygulanmadan sıvıyı uçtan uzaklaştırır ve bu da doğru hacim dağıtımını azaltır.

Asetonitril gibi uçucu sıvılar genellikle pozitif yer değiştirmeli bir pipetle daha iyi kullanılır.

Evet, hava yer değiştirmeli pipetlerle pipetleme yapmak aerosol oluşturabilir. Aerosoller pipetin iç kısmına yükselebilir ve iç duvarları ve pistonu kirletebilir. Aerosolizasyon, piston aspirasyon sırasında çok hızlı bir şekilde serbest bırakıldığında daha kolay gerçekleşir ve aşırı hızlı dağıtma ile pipetin dışında ters yönde de meydana gelebilir. 

Aerosolleri en aza indirmek için, yavaş ve eşit bir şekilde aspire edin ve dağıtın. Filtrelenmiş ipuçları kullanın. 

Pozitif yer değiştirmeli pipetler, aerosolizasyonu önleyen şırınga tarzı uçlar kullanır. Pozitif yer değiştirmeli pipet, tehlikeli sıvıları ve yüksek viskoziteli veya uçuculuktaki sıvıları pipetlemek için en iyi seçimdir.

Çok soğuk veya sıcak sıvılar, hava yer değiştirmeli pipetlerdeki hava basıncını değiştirerek hatalı pipetlemeye yol açar. 

Sıvı ve piston arasında hava cebi olmayan şırınga tarzı uçlara sahip pozitif yer değiştirmeli pipetler, sıvıların farklı sıcaklıklarından etkilenmez. Pozitif yer değiştirmeli pipetler, oda sıcaklığında olmayan sıvılarla doğru sonuçlar verir.

Çok sıcak veya soğuk bir sıvıyı hava yer değiştirmeli bir pipetle pipetlemeniz gerekiyorsa, pipet ucunu önceden durulamayın - bu genellikle en yüksek doğruluk için en iyi uygulamadır. Bunun yerine, sıvının sıcaklığının pipetin iç hava boşluğu üzerindeki etkisini en aza indirmek için hızlı bir şekilde aspire edin ve dağıtın.

Pipetleme sırasında kabarcıkları ve köpürmeyi önlemek için, ucu sıvı haznesine 10 mm'den fazla daldırmayın ve yavaşça aspire edin.

Ters pipetleme ek koruma sağlar, çünkü aspire etmeden önce pistonu 2. durdurucuya kadar tam olarak bastırırsınız, böylece sıvı numuneye hava enjekte etme şansınız yoktur. Ters pipetleme hakkında daha fazla bilgi için bu sayfayı ziyaret edin. 

Pozitif yer değiştirmeli bir pipet, sıvı ile etkileşime girdiğinde kabarcık veya köpük oluşturmaz çünkü şırınga tarzı ucu sıvının etkileşime girmesi için hava sunmaz.

Bir pipeti ıslak bir bez ve izopropanol veya %10'luk bir ağartıcı solüsyon gibi bir deterjanla silerek dekontamine edin. Mikrometrenin şeffaf plastik penceresinden kaçının.

Otoklavlama başka bir seçenek olabilir, ancak pipetinizin cihaz özelliklerini kontrol edin. Otoklavlanabilir ise, tüm cihaz otoklavlanmış mı yoksa sadece sıvı ucu mu?  Çoğu zaman, sadece sıvı uç otoklavlanabilir.

Pipet temizleme hakkında daha fazla bilgi için Pipet Temizleme posterini edinin.

Kalibrasyon, bir pipetin sistematik hata oranının (doğruluk) ve rastgele hata oranının (hassasiyet) kontrollü ve dokümante edilmiş ölçümüdür. Birçok laboratuvar ortamında, pipet performansı, akredite bir kuruluş tarafından onaylanmış belirli koşullar altında düzenli olarak test edilmeli ve yasalarca belgelenmelidir. 

ISO sertifikalı sağlayıcılar pipetleri kontrollü bir ortamda kalibre eder. Sonuçlar, bir kalibrasyon sertifikasında güvenli bir şekilde belgelenir ve her cihaz için denetime hazır bir performans geçmişine eklenir. Ayarlamalar gerektiğinde, ISO sertifikalı kalibrasyon laboratuvarları, üretici tarafından önerilen parçalar ve yağlayıcılar konusunda uzman servis sağlar. 

Rainin ve METTLER TOLEDO, postayla ve yerinde servis seçenekleriyle hızlı geri dönüş imkanı sunan dünyanın en büyük pipet servis kuruluşudur. Servis laboratuvarları ISO 17025 sertifikalıdır ve prosedürler ISO 8655'e yönelik 2022 güncellemesini takip eder. 

Pipet doğruluğu veya şimdiki adıyla doğruluk, tüm ölçümlerin ortalama hacmi (4-10 ölçüm) ile ayarlanan hacim arasındaki farktır. 

Hassasiyet, gerçekleştirilen tüm ölçümlerin standart sapmasıdır. Diğerleri her okumadan ne kadar uzakta?

Bir pipetin belirsizliği, genel doğruluğu için nicel bir terimdir. Doğruluk (sistematik hatanın bir ölçüsü) ve kesinliğin (rastgele hatanın bir ölçüsü) birleşimidir. 

Belirsizlik denklemi şu şekildedir: 

Belirsizlik = Sistematik Hata + Rastgele Hata * k. k (kapsama faktörü veya Z-skoru) ölçüm sayısına bağlıdır. Dört ölçüm için K=3.31 ve on ölçüm için 2.

Pipetleri bir rafa veya pipet standına asarak dikey olarak saklayın. Pipetleri temiz tutun ve kirletici maddelerden uzak tutun. Pipet ucu raflarını kapalı tutun.