Good Pipetting Practice: Bättre resultat genom utbildning och support

De flesta life science-tillämpningar inkluderar kritiska vätskehanteringssteg där pipetterad volym direkt påverkar resultatet. Om pipetteringen inte är konsekvent och korrekt kan tid, pengar och material gå till spillo. Noggrann pipettering utgör grunden för reproducerbart arbete, vilket är avgörande för att generera meningsfull data.

Det första steget mot att förbättra pipetteringsnoggrannheten är att välja rätt typ av pipett och rätt volymintervall. När det gäller storlek väljer du den pipett med lägst volym som rymmer den volym du pipetterar. Om du till exempel pipetterar 2 μL och har en 5 μL pipett och en 20 μL pipett, får du bättre noggrannhet med 5 μL. 

Kolla in det här faktabladet om pipettval för att förstå vilken pipett som fungerar bäst för vätskan och andra faktorer som är unika för din situation: Välja rätt pipett

När du har rätt instrument kan du omsätta din goda pipetteringsteknik i praktiken. Ställ in ett rutinmässigt testschema för att maximera förtroendet för dina resultat över tid, och, som med alla precisionsinstrument, se till att införa en regelbunden, expertservice och kalibreringsrutin.

Det enklaste sättet att snabbt testa en pipetts noggrannhet kan vara Rainin SmartCheck. Läs mer på mt.com/SmartCheck 

Att välja rätt pipett innebär att utvärdera dina krav. För det första, vilken typ av prover pipetterar du? Är de vattenhaltiga? Eller är de trögflytande, flyktiga, skummande, frätande eller farliga? För vattenhaltiga och nästan vattenhaltiga vätskor är de vanligaste luftförskjutningspipetterna (även kallade "luftkudde"-pipetter) ett bra val. För viskösa, flyktiga och andra ovanliga vätsketyper skulle en pipett med positiv förskjutning vara ett bättre val för både noggrannhet och säkerhet. 

Vilken volym kommer du att pipettera? Hur många prover behöver du överföra från ett kärl till ett annat? Kolla in detta white paper om pipettval för att förstå vilken pipett som fungerar bäst beroende på vätskan och andra faktorer som är unika för din situation.

Att pipettera minsta möjliga volymer kräver specialiserade instrument och tekniker. En repeaterpipett kan vara ditt bästa val för att upprepa volymer ner till 100 nL. En annan pipett kan också fungera för bara några få dispenseringar. Se till att använda den minsta pipetten som rymmer den volym du vill pipettera. 

Vid mycket låga volymer har pipetteringstekniken en proportionellt större inverkan på noggrannhet och reproducerbarhet. Nedsänkningsdjup, pipetteringsvinkel och aspirationshastighet är viktiga att kontrollera. Affischen Pipetting Techniques från Rainin kan vara till hjälp.

Rainin NanoRep doserar alikvoter ner till 100 nL. Läs mer här: mt.com/NanoRep

Den viktigaste faktorn för exakt, reproducerbar flerkanalspipettering är tätningen för varje kanal i pipetten. Det betyder att varje spets passar perfekt på varje axel med noll luftläckage. Olika tillverkare uppnår detta på olika sätt, med varierande ergonomisk lätthet och tätningskonsistens. LTS LiteTouch System-pipettspetsar från Rainin kräver minst kraft för att laddas och matas ut från flerkanaliga enheter, och de tätar konsekvent varje gång.

Klicka här för att se Rainins breda utbud av flerkanalspipetter.

När du aspirerar, håll en pipett så nära vertikalt som möjligt och undvik alla vinklar som är större än 20° från Y-axeln. Vid dispensering, om du rör vid målkärlets vägg för att helt dra ut all vätska från spetsen, är det OK att överskrida 20°-vinkeln.

Framåtpipettering är standardpipetteringstekniken och det bästa valet för vattenhaltiga prover. För viskösa och flyktiga prover ger omvänd pipettering bättre noggrannhet.

För att föra pipetten framåt, tryck ner kolven till första stoppet samtidigt som du håller pipetten utanför vätskan. Sänk sedan ner spetsen 2-10 mm djupt i vätskan du arbetar med – inte djupare. Släpp kolven långsamt till full förlängning för att aspirera hela vätskevolymen. För att dosera i ditt målkärl, flytta pipetten in i kärlet och tryck sedan kolven i jämn takt genom det första stoppet hela vägen till det andra stoppet – så långt kolven går. Med kolven helt intryckt, dra lätt spetsen på pipetten uppför kärlets vägg för att "röra av". Detta hjälper till att helt fördela hela vätskevolymen. Släpp kolven, mata ut pipettspetsen, ladda en ny pipettspets och upprepa.

För att vända pipetten, tryck kolven hela vägen ner genom det första stoppet till det andra stoppet – så långt kolven går. Sänk sedan ner spetsen i vätska och släpp långsamt och jämnt kolven för att suga. Flytta till det mottagande kärlet och tryck ENDAST PÅ KOLVEN TILL FÖRSTA STOPPET för att mata ut rätt volym. En liten restvolym kommer att finnas kvar i pipettspetsen. Flytta pipetten över ett kasserat dispenseringskärl och tryck kolven resten av vägen ner till det andra stoppet, även kallat "blowout"-stoppet, för att släppa ut eventuell kvarvarande vätska. 

Släpp kolven, mata ut pipettspetsen, ladda en ny pipettspets och upprepa.

En luftförskjutningspipett kan användas för att pipettera lätt trögflytande vätskor, inklusive blod. För att uppnå maximal noggrannhet, använd den omvända pipetteringstekniken som beskrivs ovan. För mer trögflytande vätskor, såsom 85 % glycerol eller Triton X-100, ger en pipett med positiv förskjutning den bästa noggrannheten och konsistensen.

Lätt flyktiga vätskor som etanol kan pipetteras med en luftförskjutningspipett med hjälp av den ovan nämnda omvända pipetteringstekniken. Pipetter med positiv förskjutning är dock ett bättre val för flyktiga vätskor. 

Om du använder en pipett med luftförskjutning, förskölj pipettspetsen (aspirera och dispensera) minst fem gånger innan du pipetterar din volym. Detta balanserar luften inuti pipetten, vilket bromsar vätskans avdunstningshastighet. Snabb avdunstning av flyktiga vätskor expanderar luften inuti en pipett och tvingar vätska från spetsen utan att något tryck läggs på kolven, och detta minskar den exakta volymleveransen.

Flyktiga vätskor som acetonitril hanteras i allmänhet bättre med en pipett med positiv förskjutning.

Ja, pipettering med luftförskjutningspipetter kan skapa aerosoler. Aerosoler kan stiga in i pipettens inre och förorena innerväggarna och kolven. Aerosolisering sker lättare när kolven släpps för snabbt under aspiration och kan också ske i motsatt riktning utanför pipetten med alltför snabb utmatning. 

För att minimera aerosoler, aspirera och fördela långsamt och jämnt. Använd filtrerade tips. 

Pipetter med positiv förskjutning använder sprutliknande spetsar som förhindrar aerosolisering. En pipett med positiv förskjutning är det bästa valet för pipettering av farliga vätskor och alla vätskor med förhöjd viskositet eller flyktighet.

Mycket kalla eller varma vätskor ändrar lufttrycket i luftförskjutningspipetter, vilket leder till felaktig pipettering. 

Pipetter med positiv förskjutning, med sprutliknande spetsar som inte har någon luftficka mellan vätska och kolv, påverkas inte av olika vätsketemperaturer. Pipetter med positiv förskjutning ger exakta resultat med vätskor som inte är rumstempererade.

Om du måste pipettera en mycket varm eller kall vätska med en luftförskjutningspipett, förskölj inte pipettspetsen – detta är vanligtvis den bästa metoden för högsta noggrannhet. Aspirera och dosera istället snabbt för att minimera effekten av vätskans temperatur på pipettens inre luftspalt.

För att undvika bubblor och skumbildning vid pipettering, sänk inte ner spetsen mer än 10 mm i vätskebehållaren och aspirera långsamt.

Omvänd pipettering ger ytterligare skydd eftersom du, innan du aspirerar, trycker kolven helt till det 2:a stoppet, så det finns ingen chans att injicera luft i vätskeprovet. Mer information om omvänd pipettering finns på den här sidan. 

En pipett med positiv förskjutning skapar inte bubblor eller skum när den interagerar med vätska eftersom dess sprutliknande spets inte presenterar luft för vätskan att interagera med.

Dekontaminera en pipett genom att torka av den med en våt trasa och ett rengöringsmedel som isopropanol eller en 10% blekmedelslösning. Undvik mikrometerns genomskinliga plastfönster.

Autoklavering kan vara ett annat alternativ, men kontrollera pipettens instrumentspecifikationer. Om den är autoklaverbar, är hela instrumentet autoklaverat eller bara vätskeänden?  Ofta kan endast vätskeänden autoklaveras.

Om du vill veta mer om hur du rengör en pipett kan du skaffa affischen Rengöring av pipett .

Kalibrering är den kontrollerade och dokumenterade mätningen av en pipetts systematiska felfrekvens (noggrannhet) och slumpmässiga felfrekvens (precision). I många laboratoriemiljöer måste pipettens prestanda regelbundet testas och dokumenteras enligt lag under specifika förhållanden som certifierats av ett ackrediterat organ. 

ISO-certifierade leverantörer kalibrerar pipetter i en kontrollerad miljö. Resultaten dokumenteras på ett säkert sätt på ett kalibreringscertifikat, vilket bidrar till en revisionsklar prestandahistorik för varje instrument. När justeringar är nödvändiga tillhandahåller ISO-certifierade kalibreringslaboratorier expertservice med delar och smörjmedel som rekommenderas av tillverkaren. 

Rainin och METTLER TOLEDO är världens största pipettserviceorganisation med snabb leverans från post- och platsservicealternativ. Servicelaboratorier är ISO 17025-certifierade och procedurerna följer 2022 års uppdatering till ISO 8655. 

Pipettnoggrannhet – eller riktighet, som det kallas nu – är skillnaden mellan medelvolymen av alla mätningar (4-10 mätningar) och den inställda volymen. 

Precision är standardavvikelsen för alla mätningar som utförs. Hur långt ifrån varje läsning är de andra?

En pipetts osäkerhet är den kvantitativa termen för dess totala noggrannhet. Det är en kombination av riktighet (ett mått på systematiskt fel) och precision (ett mått på slumpmässiga fel). 

Ekvationen för osäkerhet är: 

Osäkerhet = Systematiskt fel + Slumpmässigt fel * k. k (täckningsfaktor eller Z-poäng) beror på antalet mätningar. k=3,31 för fyra mätningar och 2 för tio mätningar.

Förvara pipetter vertikalt, hängande från en hylla eller pipettställ. Håll pipetterna rena och fria från föroreningar. Håll pipettspetsställen stängda.