Hvordan bruker jeg en pipette riktig?

Nøyaktig pipettering krever mestring av noen grunnleggende teknikker. Disse inkluderer:

  • Senking av pipettespissen til riktig dybde i en væske, basert på spissstørrelse og væsketype
  • Skyll en ny spiss med væsken som skal aspireres
  • Holde pipetten i riktig vinkel (ikke mer enn 20° av vertikal) 
  • Aspirerer og dispenserer med en hastighet som minimerer bobledannelse
  • Ta pauser for å unngå overoppvarming av instrumentet, som kan skyldes langvarig bruk og påvirke nøyaktigheten ved å utvide luften i pipetten


Hvorfor er nøyaktig pipettering viktig?

De fleste bruksområder innen biovitenskap inkluderer kritiske væskehåndteringstrinn der pipettert volum direkte påvirker resultatet. Hvis pipetteringen ikke er konsekvent og nøyaktig, kan tid, penger og materiale gå til spille. Nøyaktig pipettering danner grunnlaget for reproduserbart arbeid, noe som er avgjørende for å generere meningsfulle data.

Hvordan forbedrer jeg pipetteringsnøyaktigheten og reduserer feil?

Det første trinnet mot å forbedre pipetteringsnøyaktigheten er å velge riktig type pipette og riktig volumområde. For størrelse velger du pipetten med lavest volum som passer til volumet du pipetterer. Hvis du for eksempel pipetterer 2 μL og har en pipette på 5 μL og en pipette på 20 μL, får du bedre nøyaktighet ved hjelp av 5 μL. 

Ta en titt på dette white paperet om valg av pipette for å forstå hvilken pipette som fungerer best for væsken og andre faktorer som er unike for din situasjon: Velge riktig pipette

Når du har det riktige instrumentet, kan du sette den gode pipetteringsteknikken ut i praksis. Sett opp en rutinemessig testplan for å maksimere tilliten til resultatene dine over tid, og som med alle presisjonsinstrumenter, sørg for å innføre et regelmessig ekspertservice og kalibreringsregime.

Den enkleste måten å raskt teste pipettens nøyaktighet på, kan være Rainin SmartCheck. Finn ut mer på mt.com/SmartCheck 

Hvordan vet jeg hvilken pipette jeg skal bruke?

Å velge riktig pipette innebærer å evaluere dine behov. Først, hva slags prøver pipetterer du? Er de vandige? Eller er de tyktflytende, flyktige, skummende, etsende eller farlige? For vandige og nesten vandige væsker er de vanligste luftfortrengningspipettene (også kalt "luftputepipetter" pipetter) et godt valg. For tyktflytende, flyktige og andre uvanlige væsketyper vil en pipette med positiv fortrengning være et bedre valg for både nøyaktighet og sikkerhet. 

Hvilket volum skal du pipettere? Hvor mange prøver trenger du å overføre fra ett fartøy til et annet? Ta en titt på dette white paperet om valg av pipette for å forstå hvilken pipette som fungerer best, avhengig av væsken og andre faktorer som er unike for din situasjon.

Hvordan pipetterer du små volumer?

Pipettering av minst mulig volum involverer spesialiserte instrumenter og teknikker. En repeaterpipette kan være det beste valget for å gjenta volumet ned til 100 nL. En annen pipette kan også fungere for bare noen få dispensere. Sørg for å bruke den minste pipetten som passer til volumet du ønsker å pipette. 

Ved svært lave volumer har pipetteringsteknikken en proporsjonalt større innvirkning på nøyaktighet og reproduserbarhet. Nedsenkningsdybde, pipetteringsvinkel og aspirasjonshastighet er viktig å kontrollere. Plakaten for pipetteringsteknikker fra Rainin kan hjelpe.

Rainin NanoRep repetisjonsdispenserer alikoter ned til 100 nL. Finn ut mer her: mt.com/NanoRep

Hvordan bruker jeg en flerkanalspipett?

Den viktigste faktoren for nøyaktig, reproduserbar flerkanalspipetter er tetningens integritet for hver pipettkanal. Det betyr at hver spiss passer perfekt på hver aksel med null luftlekkasje. Ulike produsenter oppnår dette på forskjellige måter, med varierende ergonomisk letthet og tetningskonsistensnivåer. LTS LiteTouch System-pipettespisser fra Rainin krever minst kraft for å laste inn og løse ut fra flerkanals, og de forsegles konsekvent hver gang.

Klikk her for å se Rainins brede utvalg av flerkanalspipetter.

Hva er den riktige måten å holde en pipette på?

Når du aspirerer, hold en pipette så nær vertikalt som mulig, og unngå vinkel større enn 20° utenfor Y-aksen. Når du dispenserer, hvis du berører veggen til målbeholderen for å trekke all væske helt fra spissen, er det OK å overskride 20 ° vinkelen.

Hva er forover- og bakoverpipettering?

Fremoverpipettering er standard pipetteringsteknikk og det beste valget for vandige prøver. For viskøse og flyktige prøver gir omvendt pipettering bedre nøyaktighet.

For å pipette fremover, skyv stempelet ned til første stopp mens du holder pipetten utenfor væsken. Deretter senker du spissen 2-10 mm dypt ned i væsken du jobber med – ikke dypere. Slipp stempelet langsomt til full forlengelse for å aspirere hele væskevolumet. For å dispensere inn i målbeholderen, flytt pipetten inn i beholderen, og trykk deretter stempelet i jevn hastighet gjennom første stopp helt til andre stopp - så langt stempelet går. Med stempelet helt presset, dra pipettens spiss lett opp på veggen av fartøyet for å "røre av". Dette bidrar til å dispensere hele væskevolumet fullstendig. Slipp stempelet, ta ut pipettespissen, sett i en ny pipettespiss og gjenta.

For å reversere pipetten, skyv stempelet helt ned gjennom første stopp til andre stopp – så langt stempelet går. Senk deretter spissen i væske og slipp stempelet sakte og jevnt for å aspirere. Flytt deg til mottaksbeholderen og trykk på stempelet KUN TIL FØRSTE STOPP for å dispensere riktig volum. Et lite restvolum vil forbli i pipettespissen. Beveg pipetten over en beholder for kast og trykk stempelet resten av veien ned til det andre stoppet, også kalt utblåsningsstoppet, for å frigjøre eventuell gjenværende væske. 

Slipp stempelet, ta ut pipettespissen, sett i en ny pipettespiss og gjenta.

Hvordan pipetterer jeg viskøse væsker?

En luftfortrengningspipette kan brukes til å pipette lett viskøse væsker, inkludert blod. For å oppnå maksimal nøyaktighet, bruk omvendt pipetteringsteknikk beskrevet ovenfor. For mer viskøse væsker, som 85 % glyserol eller Triton X-100, gir en positiv fortrengningspipette den beste nøyaktigheten og konsistensen.

Hvordan pipetterer jeg flyktige væsker?

Lett flyktige væsker som etanol kan pipetteres med en luftfortrengningspipette ved hjelp av ovennevnte omvendte pipetteringsteknikk. Pipetter med positiv fortrengning er imidlertid et bedre valg for flyktige væsker. 

Hvis du bruker en luftfortrengningspipette, må du skylle pipettespissen (aspirere og dispensere) minst fem ganger før du pipetterer volumet. Dette balanserer luften inne i pipetten og senker væskens fordampningshastighet. Rask fordampning av flyktige væsker utvider luften inne i en pipette og tvinger væske fra spissen uten at det legges noe trykk på stempelet, og dette reduserer nøyaktig volumlevering.

Flyktige væsker som acetonitril håndteres generelt bedre med en positiv fortrengningspipette.

Genererer pipettering aerosoler?

Ja, pipettering med luftfortrengningspipetter kan skape aerosoler. Aerosoler kan stige inn i pipettens indre og forurense innvendige vegger og stempel. Aerosolisering skjer lettere når stempelet slippes for raskt under aspirasjon og kan også forekomme i motsatt retning utenfor pipetten med altfor rask dispensering. 

For å minimere aerosoler, aspirer og dispenser sakte og jevnt. Bruk filtrerte tips. 

Pipetter med positiv forskyvning bruker sprøytelignende spisser som forhindrer aerosolisering. En pipette med positiv fortrengning er det beste valget for pipettering av farlige væsker og væsker med forhøyet viskositet eller flyktighet.

Hvordan påvirker temperaturen på væsker pipetteringen?

Svært kalde eller varme væsker endrer lufttrykket i luftfortrengningspipetter, noe som fører til unøyaktig pipettering. 

Pipetter med positiv fortrengning, med sprøytespisser som ikke har luftlomme mellom væske og stempel, påvirkes ikke av forskjellige væsketemperaturer. Pipetter med positiv fortrengning gir nøyaktige resultater med væsker som ikke er romtempererte.

Hvis du må pipette en veldig varm eller kald væske med en luftfortrengningspipette, må du ikke skylle pipettespissen på forhånd – dette er vanligvis den beste fremgangsmåten for høyest nøyaktighet. I stedet aspireres og dispenseres raskt for å minimere effekten av væskens temperatur på pipettens indre luftspalte.

Hvordan unngår jeg bobler når jeg pipetterer?

For å unngå bobler og skumdannelse når du pipetterer, må du ikke senke spissen mer enn 10 mm i væskebeholderen, og aspirere sakte.

Omvendt pipettering gir ekstra beskyttelse fordi du, før du aspirerer, presser stempelet helt inn til 2. stopp, slik at det ikke er noen sjanse for å injisere luft inn i væskeprøven. For mer om omvendt pipettering, besøk denne siden

En pipette med positiv fortrengning skaper ikke bobler eller skum når den interagerer med væske fordi sprøytespissen ikke gir luft som væsken kan samhandle med.

Hva er den beste måten å dekontaminere en pipette på?

Dekontaminer en pipette ved å tørke den med en våt klut og et vaskemiddel som isopropanol eller en 10% blekemiddelløsning. Unngå mikrometerets klare plastvindu.

Autoklavering kan være et annet alternativ, men sjekk pipettens instrumentspesifikasjoner. Hvis det er autoklaverbart, er hele instrumentet autoklavert eller bare væskeenden?  Ofte kan bare væskeenden autoklaveres.

For mer om rengjøring av en pipette, skaff deg plakaten Rengjør en pipette .

Hvordan kalibrerer jeg en pipette?

Kalibrering er kontrollert og dokumentert måling av pipettens systematiske feilrate (nøyaktighet) og tilfeldige feilrate (presisjon). I mange laboratoriemiljøer må pipettytelsen regelmessig testes og dokumenteres ved lov under spesifikke forhold sertifisert av et akkreditert organ. 

ISO-sertifiserte leverandører kalibrerer pipetter i kontrollerte omgivelser. Resultatene dokumenteres sikkert på et kalibreringssertifikat, i tillegg til en revisjonsklar ytelseshistorikk for hvert instrument. Når justeringer er nødvendige, gir ISO-sertifiserte kalibreringslaboratorier ekspertservice med produsentens anbefalte deler og smøremidler. 

Rainin og METTLER TOLEDO er verdens største organisasjon for pipetteservice med rask behandlingstid fra innsendings- og servicealternativer på stedet. Servicelaboratorier er ISO 17025-sertifisert, og prosedyrer følger 2022-oppdateringen til ISO 8655. 

Hvordan beregner jeg pipettens nøyaktighet og presisjon?

Pipettens nøyaktighet – eller sann som det kalles nå – er forskjellen mellom middelvolumet for alle målinger (4–10 målinger) og det innstilte volumet. 

Presisjon er standardavviket til alle utførte målinger. Hvor langt fra hverandre er de andre?

Hvordan beregner du usikkerheten til en pipette?

En pipettes usikkerhet er den kvantitative betegnelsen for den generelle nøyaktigheten. Det er en kombinasjon av sannhet (et mål på systematisk feil) og presisjon (et mål på tilfeldig feil). 

Ligningen for usikkerhet er: 

Usikkerhet = systematisk feil + tilfeldig feil * k. k (dekningsfaktor eller Z-skår) avhenger av antall målinger. k=3,31 for fire målinger og 2 for ti målinger.

Hva er den beste måten å oppbevare en pipette på?

Oppbevar pipetter vertikalt, hengende fra en hylle eller pipettestative. Hold pipettene rene og fri for forurensninger. Hold pipettespissstativene lukket.