Good Pipetting Practice: Mejor Resultados a través de la formación y la asistencia

La mayoría de las aplicaciones de las ciencias de la vida incluyen pasos críticos de manipulación líquidos en los que el volumen pipeteado influye directamente en el resultado. Si el pipeteo t es consistente y preciso, entonces el tiempo, el dinero y el material pueden desperdiciarse. Exacto pipeteo constituye el trabajo input de reproducible, que es esencial para generar datos significativos.

El primer paso para mejorar los exactitud de pipeteo es seleccionar el tipo appropriée de pipeta y el rango de volumen adecuado. Para determinar el tamaño, elija la pipeta de menor volumen que se adapte al volumen que está pipeteando. Por ejemplo, si está pipeteando 2 μL y tiene una pipeta de 5 μL y una pipeta de 20 μL, obtendrá un mejor exactitud usando la de 5 μL. 

Consulte este artículo técnico sobre la selección de pipetas para conocer cuál es la pipeta más adecuada para el líquido y otros factores específicos de su situación: Selección de la pipeta Derecha

Una vez que tenga el instrumento appropriée, ponga en práctica su buena técnica de pipeteo. Establezca un cronograma comprobaciones periódicas para maximizar la confianza en sus resultados a lo largo del tiempo y, como con cualquier instrumento de precisión, asegúrese de instituir un servicio regular y experto y un régimen de Calibración.

La forma más sencilla de comprobar rápida del s exactitud de una pipeta podría ser la Rainin SmartCheck. Encontrar más en mt.com/SmartCheck 

Elegir la pipeta appropriée implica evaluar sus requisitos. Primero, ¿qué tipo de muestras está pipeteando? ¿Son acuosas? O son viscosos, volátiles, espumosos, corrosivos o peligrosos? Para líquidos acuosos y casi acuosos, las pipetas de desplazamiento de aire más comunes (también llamadas pipetas de "cojín de aire") son una buena opción. Para líquidos viscosos, volátiles y otros tipos de líquidos inusuales, una pipeta de desplazamiento positivo sería una mejor opción tanto para el exactitud como para la seguridad. 

¿Qué volumen va a pipetear? ¿Cuántas muestras necesita transferir de un recipiente a otro? Consulte este artículo técnico sobre la selección de pipetas para saber cuál es la que mejor funciona según el líquido y otros factores específicos de su situación.

El pipeteo de los volúmenes más pequeños posibles implica el uso de instrumentos y técnicas especializadas. Una pipeta de repetición puede ser la mejor opción para repetir volúmenes de dispensar de hasta 100 nl. Otra pipeta también puede servir para unas pocas dispensaciones. Asegúrese de utilizar la pipeta del tamaño más pequeño que se adapte al volumen que desea pipetear. 

A volúmenes muy bajos, la técnica de pipeteo tiene un impacto proporcionalmente mayor en el exactitud y la reproducibilidad. Es importante controlar la profundidad de inmersión, el ángulo de pipeteo y la velocidad de aspiración. El póster de técnicas de pipeteo de Rainin puede ser de ayuda.

Rainin NanoRep dispensa de forma repetida partes alícuotas de hasta 100 nl. Encontrar más aquí: mt.com/NanoRep

El factor más importante para lograr un pipeteo multicanal exacto y reproducible es la integridad de la sellado de cada canal de la pipeta. Esto significa que todas las puntas encajan perfectamente en cada cuerpo sin fugas de aire. Los diferentes fabricantes logran esto de diferentes maneras, con diferentes niveles de facilidad ergonómica y sellado consistencia. Las puntas de pipeta LTS LiteTouch Sistema de Rainin requieren la menor fuerza para cargar y expulsar desde multicanal, y sellado de manera uniforme en todo momento.

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Al aspirar, sujete una pipeta lo más cerca posible de la posición vertical, evitando cualquier ángulo superior a 20° respecto al eje Y. Al dosificar, si está tocando la pared de el recipiente objetivo para extraer completamente todo el líquido de la punta, es s OK exceder el ángulo de 20 °.

El pipeteo de avance es la técnica de pipeteo estándar y la mejor opción para muestras acuosas. Para muestras viscosas y volátiles, el pipeteo inverso ofrece mejores exactitud.

A pipeta hacia adelante, empuje el émbolo hacia abajo hasta el primer tope mientras mantiene la pipeta fuera del líquido. Luego, sumerja la punta 2-10 mm de profundidad en el líquido con el que está trabajando, no más profundo. Suelte el émbolo lentamente hasta la extensión completa para aspirar todo el volumen de líquido. A dispensar en el recipiente objetivo, mueva la pipeta hacia el interior de él y, a continuación, presione el émbolo a una velocidad uniforme por el primer tope hasta el segundo tope hasta el tope. Con el émbolo completamente presionado, arrastre ligeramente la punta de la pipeta por la pared de el recipiente para "tocarla". Esto ayuda a dispensar completamente el volumen total de líquido. Suelte el émbolo, expulse la punta de la pipeta, cargue una nueva punta de pipeta y repita.

A pipeta invertida, empuje el émbolo hacia abajo hasta el primer tope hasta el segundo hasta el tope. Luego, sumerja la punta en líquido y suelte lenta y uniformemente el émbolo para aspirar. Desplácese hasta el recipiente receptor y presione el émbolo SOLO HASTA EL PRIMER TOPE para dispensar el volumen correcto. Un pequeño volumen residual permanecerá en la punta de la pipeta. Desplace la pipeta sobre un recipiente dispensar desecho y presione el émbolo el resto de descenso hasta el segundo tope, también conocido como tope de "soplado", para liberar cualquier resto de líquido. 

Suelte el émbolo, expulse la punta de la pipeta, cargue una nueva punta de pipeta y repita.

Se puede utilizar una pipeta de desplazamiento de aire para pipetear líquidos ligeramente viscosos, incluida la sangre. A alcanzar el máximo exactitud, utilice la técnica de pipeteo inverso descrita anteriormente. Para líquidos más viscosos, como el 85% de glicerol o Triton X-100, una pipeta de desplazamiento positivo ofrece la mejor exactitud y consistencia.

Los líquidos ligeramente volátiles como el etanol pueden pipetearse con una pipeta de desplazamiento de aire mediante la técnica de pipeteo inverso mencionada anteriormente. Sin embargo, las pipetas de desplazamiento positivo son una mejor opción para líquidos volátiles. 

Si utiliza una pipeta de desplazamiento de aire, enjuague previamente la punta de la pipeta (aspire y dispensar) al menos cinco veces antes de pipetear el volumen. Esto equilibra el aire dentro de la pipeta, disminuyendo la tasa s evaporación del líquido. La evaporación rápida de líquidos volátiles expande el aire dentro de una pipeta y fuerza el líquido desde la punta sin ejercer ninguna presión sobre el émbolo, lo que disminuye el suministro de volumen preciso.

Los líquidos volátiles como el acetonitrilo suelen manejarse mejor con pipetas de desplazamiento directo.

Si, el pipeteo con pipetas de desplazamiento de aire puede crear aerosoles. Los aerosoles pueden subir al interior de la pipeta y contaminar las paredes interiores y el émbolo. La aerosolización se produce con mayor facilidad cuando el émbolo se suelta demasiado rápido durante la aspiración y también puede ocurrir en la dirección opuesta fuera de la pipeta con una dosificación demasiado rápida. 

A minimizar los aerosoles, aspirar y dispensar lenta y uniformemente. Use puntas filtradas. 

Las pipetas de desplazamiento positivo usan puntas tipo jeringa que evitan la aerosolización. Una pipeta de desplazamiento positivo es la mejor opción para el pipeteo de líquidos peligrosos y cualquier líquido de viscosidad o volatilidad elevadas.

Los líquidos muy fríos o calientes cambian la presión del aire dentro de las pipetas de desplazamiento de aire, lo que provoca un pipeteo inexacto. 

Las pipetas de desplazamiento positivo, con puntas de tipo jeringa que no tienen bolsas de aire entre el líquido y la émbolo, no se ven afectadas por las diferentes temperaturas de líquidos. Las pipetas de desplazamiento positivo ofrecerán resultados exactos con líquidos que no sean a temperatura ambiente.

Si debe pipetear un líquido muy caliente o frío con una pipeta de desplazamiento de aire, no preenjuague la punta de la pipeta; esta suele ser la mejor práctica para los exactitud más altos. En su lugar, aspire y dispensar de forma expedita para minimizar el efecto de la temperatura s del líquido sobre el espacio de aire interior s la pipeta.

A evitar las burbujas y la espuma al pipetear, no sumerja la punta más de 10 mm en el depósito de líquido y aspire lentamente.

El pipeteo inverso ofrece una protección adicional porque, antes de aspirar, se presiona completamente el émbolo hasta el 2.º tope, por lo que no hay posibilidad de inyectar aire en la muestra líquida. Para obtener más información sobre el pipeteo inverso, visite esta página. 

Las pipetas de desplazamiento positivo no crean burbujas ni espuma al interactuar con el líquido porque su punta de tipo jeringa no presenta aire con el que pueda interactuar el líquido.

Descontamine una pipeta limpiándola con un paño húmedo y un detergente Como isopropanol o una solución de lejía al 10 %. Evite la ventana s plástico transparente del micrómetro.

La autoclavización puede ser otra opción, pero control las especificaciones s instrumento de su pipeta. Si es esterilizable en autoclave, ¿está todo el instrumento en autoclave o solo el extremo líquido?  A menudo, solo el extremo líquido puede ser autoclave.

Para obtener más información sobre la limpieza de una pipeta, obtenga el póster Limpieza de una pipeta .

Calibración es la medición de controlada y documentada de la tasa s error sistemático (exactitud) y la tasa precisión errores aleatorios de una pipeta. Dentro muchos entornos de laboratorio, el rendimiento de las pipetas debe comprobarse y documentarse periódicamente por ley bajo condiciones específicas y certificadas por un organismo acreditado. 

Los proveedores con certificación ISO calibran las pipetas en un entorno controlado. Resultados se documentan de forma segura en un certificado de Calibración, lo que se suma a un historial de rendimiento listo para auditorías para cada instrumento. Cuando es necesario realizar ajustes, los laboratorios de Calibración con certificación ISO brindan un servicio experto con piezas y lubricantes recomendados por el fabricante. 

Rainin y METTLER TOLEDO son la organización de mantenimiento s de pipetas más grande del mundo con rápidos plazos de entrega por correo y opciones de mantenimiento in situ. Los laboratorios de servicio cuentan con la certificación ISO 17025 y los procedimientos siguen la actualización de 2022 a ISO 8655. 

La exactitud de pipetas, o veracidad, como se s le llama ahora, es la diferencia entre el volumen medio de todas las mediciones (4-10 mediciones) y el volumen establecido. 

Precisión es la desviación estándar de todas las mediciones realizadas. ¿A qué distancia de cada lectura están las otras?

La incertidumbre s una pipeta es el término cuantitativo para su exactitud global. Es una combinación de veracidad (medida de error sistemático) y precisión (medida de error aleatorio). 

La ecuación para la incertidumbre es: 

Incertidumbre = error sistemático + error aleatorio * k. k (factor de cobertura o Z-score) depende del número de mediciones. k = 331 para cuatro mediciones y 2 para diez mediciones.

Guarde las pipetas verticalmente colgando de un estante o stand de pipetas. Mantenga las pipetas limpias y libres de contaminantes. Mantenga cerrados los racks de puntas de pipeta.