Good Pipetting Practice: 교육 및 지원을 통한 더 나은 결과

대부분의 생명 과학 응용 분야에는 피펫 부피가 결과에 직접적인 영향을 미치는 중요한 액체 처리 단계가 포함됩니다. 피펫팅이 일관되고 정확하지 않으면 시간, 비용 및 재료가 낭비될 수 있습니다. 정확한 피펫팅은 재현 가능한 작업의 기초를 형성하며, 이는 의미 있는 데이터를 생성하는 데 필수적입니다.

피펫팅 정확도를 개선하기 위한 첫 번째 단계는 올바른 유형의 피펫과 적절한 부피 범위를 선택하는 것입니다. 크기의 경우, 피펫팅하는 부피를 수용할 수 있는 가장 낮은 부피의 피펫을 선택하십시오. 예를 들어, 2 μL의 피펫팅을 하고 5 μL 피펫과 20 μL 피펫이 있는 경우 5 μL를 사용하면 더 나은 정확도를 얻을 수 있습니다. 

파이펫 선택에 대한 이 백서를 확인하여 어떤 파이펫이 액체에 가장 적합하고 상황에 고유한 기타 요인에 가장 적합한지 이해하십시오. 올바른 파이펫 선택

올바른 기기를 구입한 후에는 우수한 피펫팅 기법을 실제로 사용해 보십시오. 시간이 지남에 따라 결과에 대한 신뢰를 극대화하기 위해 일상 테스트 일정을 설정하고, 다른 정밀 기기와 마찬가지로 정기적이고 전문적인 서비스 및 교정 요법을 수립해야 합니다.

파이펫의 정확도를 빠르게 테스트하는 가장 쉬운 방법은 Rainin SmartCheck일 수 있습니다. mt.com/SmartCheck 에서 자세히 알아보기

올바른 파이펫 을 선택하려면 요구 사항을 평가해야 합니다. 먼저, 어떤 종류의 샘플을 피펫팅하고 있습니까? 그들은 수성입니까? 아니면 점성이 있거나, 휘발성이거나, 거품이 나거나, 부식성이 있거나, 위험합니까? 수성 및 수성에 가까운 액체의 경우 가장 일반적인 공기 치환 피펫("에어 쿠션" 피펫이라고도 함)을 선택하는 것이 좋습니다. 점성, 휘발성 및 기타 특이한 액체 유형의 경우 직접 치환 피펫이 정확성과 안전성 모두를 위해 더 나은 선택이 될 것입니다. 

어떤 부피의 피펫팅을 할 예정입니까? 한 용기에서 다른 용기로 옮기는 데 몇 개의 샘플이 필요합니까? 파이펫 선택에 대한 이 백서를 확인하여 액체 및 상황에 고유한 기타 요인에 따라 어떤 파이펫이 가장 잘 작동하는지 이해하십시오.

가능한 가장 작은 부피를 피펫팅하려면 특수 기기와 기술이 필요합니다. 리피터 피펫은 부피를 100nL까지 반복 분주하기 위한 최선의 선택일 수 있습니다. 다른 피펫도 몇 번의 분주에만 사용할 수 있습니다. 피펫화하려는 부피를 수용할 수 있는 가장 작은 크기의 피펫을 사용해야 합니다. 

매우 낮은 부피에서 피펫팅 기법은 정확도와 재현성에 비례적으로 더 큰 영향을 미칩니다. 침수 깊이, 피펫팅 각도 및 흡인 속도는 제어하는 데 중요합니다. Rainin의 피펫팅 기법 포스터 가 도움이 될 수 있습니다.

Rainin NanoRep은 100nL까지 부분 표본을 반복 분주합니다. 더 알아보기 : mt.com/NanoRep

정확하고 재현 가능한 멀티채널 피펫팅에서 가장 중요한 요소는 피펫의 모든 채널에 대한 씰의 무결성입니다. 즉, 모든 팁이 공기 누출 없이 각 샤프트에 완벽하게 맞습니다. 제조업체마다 다양한 인체공학적 용이성과 밀봉 일관성 수준으로 다양한 방식으로 이를 달성합니다. Rainin의 LTS LiteTouch 시스템 피펫 팁은 다중 채널에서 로딩 및 배출하는 데 최소한의 힘이 필요하며 항상 일관되게 밀봉됩니다.

Rainin의 다양한 멀티채널 파이펫을 보려면 여기를 클릭하십시오.

흡입할 때 피펫을 가능한 한 수직에 가깝게 잡고 Y축에서 20° 이상 벗어난 각도를 피하십시오. 디스펜싱할 때 팁에서 모든 액체를 완전히 빼내기 위해 대상 용기의 벽을 터치하는 경우 20° 각도를 초과해도 됩니다.

전방 피펫팅은 표준 피펫팅 기법이며 수용성 샘플에 가장 적합한 선택입니다. 점성이 있고 휘발성이 있는 샘플의 경우, 역 피펫팅이 더 나은 정확도를 제공합니다.

피펫을 앞으로 이동시키려면 피펫을 액체 밖으로 잡고 플런저를 첫 번째 스톱까지 밀어 넣습니다. 그런 다음 팁을 작업 중인 액체에 2-10mm 깊이로 담그십시오. 플런저를 천천히 풀어 전체 액체 부피를 흡입합니다. 대상 용기에 분주하려면 피펫을 용기 안으로 이동한 다음 첫 번째 스톱을 통해 두 번째 스톱까지 플런저가 가는 한도 내에서 균일한 속도로 플런저를 누릅니다. 플런저를 완전히 누른 상태에서 피펫 끝을 용기 벽 위로 가볍게 끌어 올려 "터치합니다." 이것은 전체 액체 부피를 완전히 분배하는 데 도움이 됩니다. 플런저를 풀고, 피펫 팁을 배출하고, 새 피펫 팁을 로드하고, 반복합니다.

피펫을 역전시키려면 플런저를 첫 번째 스톱을 통해 두 번째 스톱까지 플런저가 가는 곳까지 끝까지 밀어 넣습니다. 그런 다음 팁을 액체에 담그고 플런저를 천천히 고르게 풀어 흡입합니다. 수용 용기로 이동하고 플런저를 첫 번째 정지까지만 눌러 올바른 양을 분배합니다. 피펫 팁에 작은 잔류 부피가 남아 있습니다. 피펫을 폐기-분주 용기 위로 이동하고 플런저를 "분출" 정지라고도 하는 두 번째 정지까지 나머지 부분을 눌러 남아 있는 액체를 방출합니다. 

플런저를 풀고, 피펫 팁을 배출하고, 새 피펫 팁을 로드하고, 반복합니다.

공기 치환 피펫은 혈액을 포함하여 약간 점성이 있는 액체를 피펫팅하는 데 사용할 수 있습니다. 최대의 정확도를 얻으려면 위에서 설명한 역 피펫팅 기법을 사용하십시오. 85% 글리세롤 또는 Triton X-100과 같은 점성이 높은 액체의 경우 간접 치환 피펫이 최고의 정확도와 일관성을 제공합니다.

에탄올과 같은 약간 휘발성이 강한 액체는 위에서 언급한 역 피펫팅 기술을 사용하여 공기 치환 피펫으로 피펫팅할 수 있습니다. 그러나 직접 치환식 피펫은 휘발성 액체에 더 나은 선택입니다. 

공기 치환 피펫을 사용하는 경우, 부피를 피펫팅하기 전에 피펫 팁을 최소 5번 미리 헹구십시오(흡입 및 분주). 이렇게 하면 피펫 내부의 공기가 평형을 이루어 액체의 증발 속도가 느려집니다. 휘발성 액체의 빠른 증발은 피펫 내부의 공기를 팽창시키고 플런저에 압력을 가하지 않고 팁에서 액체를 밀어내며, 이로 인해 정확한 부피 전달이 감소합니다.

아세토니트릴과 같은 휘발성 액체는 일반적으로 직접 치환 피펫으로 더 잘 취급됩니다.

예, 공기 치환 피펫을 사용한 피펫팅은 에어로졸을 생성할 수 있습니다. 에어로졸은 피펫 내부로 상승하여 내부 벽과 피스톤을 오염시킬 수 있습니다. 에어로졸화는 흡인 중에 플런저가 너무 빨리 해제될 때 더 쉽게 발생하며, 지나치게 빠른 분주로 인해 피펫 외부의 반대 방향에서도 발생할 수 있습니다. 

에어로졸을 최소화하려면 천천히 고르게 흡입하고 분주하십시오. 필터링된 팁을 사용합니다. 

직접 치환 피펫은 에어로졸화를 방지하는 주사기 스타일의 팁을 사용합니다. 직접 치환식 피펫은 위험한 액체와 점도 또는 휘발성이 높은 액체를 피펫팅하는 데 가장 적합한 선택입니다.

매우 차갑거나 뜨거운 액체는 공기 치환 피펫 내의 공기 압력을 변화시켜 부정확한 피펫팅을 유발합니다. 

액체와 피스톤 사이에 에어 포켓이 없는 주사기 스타일 팁이 있는 간접 치환 피펫은 액체의 다양한 온도에 영향을 받지 않습니다. 직접 치환식 피펫은 비실온 액체에서 정확한 결과를 제공합니다.

공기 치환 피펫으로 매우 뜨겁거나 차가운 액체를 피펫팅해야 하는 경우, 피펫 팁을 미리 헹구지 마십시오 - 이는 일반적으로 최고의 정확도를 위한 최상의 방법입니다. 대신, 액체의 온도가 피펫의 내부 에어 갭에 미치는 영향을 최소화하기 위해 신속하게 흡입 및 분주하십시오.

피펫팅 시 기포와 거품이 발생하지 않도록 팁을 액체 저장소에 10mm 이상 담그지 말고 천천히 흡입하십시오.

역 피펫팅은 흡입하기 전에 플런저를 2번째 스톱까지 완전히 누르기 때문에 액체 샘플에 공기를 주입할 가능성이 없기 때문에 추가적인 보호 기능을 제공합니다. 역방향 피펫팅에 대한 자세한 내용은 이 페이지를 참조하십시오. 

직접 치환식 피펫은 주사기 스타일의 팁이 액체가 상호 작용할 수 있는 공기를 제공하지 않기 때문에 액체와 상호 작용할 때 기포나 거품을 생성하지 않습니다.

젖은 천과 이소프로판올 또는 10% 표백제 용액과 같은 세제로 피펫을 닦아 오염을 제거합니다. 마이크로미터의 투명한 플라스틱 창을 피하십시오.

오토클레이브는 또 다른 옵션일 수 있지만 파이펫의 기기 사양을 확인하십시오. 고압멸균이 가능한 경우, 전체 기기가 고압멸균됩니까, 아니면 액체 끝단만 고압멸균됩니까?  종종 액체 끝단만 고압멸균할 수 있습니다.

파이펫 세척에 대한 자세한 내용은 파이펫 세척 포스터를 참조하십시오.

교정은 파이펫의 체계적 오류율(정확도) 및 무작위 오류율(정밀도)을 제어하고 문서화한 측정입니다. 많은 실험실 환경에서 파이펫 성능은 공인 기관에서 인증한 특정 조건 하에서 법률에 따라 정기적으로 테스트하고 문서화해야 합니다. 

ISO 인증 제공자는 통제된 환경에서 파이펫을 교정합니다. 결과는 교정 인증서에 안전하게 문서화되어 각 기기에 대한 감사 준비 성능 기록에 추가됩니다. 조정이 필요한 경우 ISO 인증 교정 연구소에서 제조업체에서 권장하는 부품 및 윤활유에 대한 전문 서비스를 제공합니다. 

Rainin과 메틀러 토레도는 우편 접수 및 현장 서비스 옵션을 통해 빠른 처리 시간을 제공하는 세계 최대의 파이펫 서비스 조직입니다. 서비스 랩은 ISO 17025 인증을 받았으며 절차는 ISO 8655에 대한 2022년 업데이트를 따릅니다. 

파이펫 정확도(또는 현재 trueness라고 함)는 모든 측정의 평균 부피(4-10회 측정)와 설정된 부피 간의 차이입니다. 

정밀도는 수행된 모든 측정의 표준 편차입니다. 각 판독 값에서 다른 판독 값에서 얼마나 멀리 떨어져 있습니까?

파이펫의 불확실성은 파이펫의 전반적인 정확도에 대한 정량적 용어입니다. 이는 진실성(체계적 오류의 척도)과 정밀도(무작위 오류의 척도)의 조합입니다. 

불확실성에 대한 방정식은 다음과 같습니다. 

불확실성 = 시스템 오류 + 무작위 오류 * k. k(커버리지 계수 또는 Z-점수)는 측정 횟수에 따라 다릅니다. k=3.31은 4회 측정이고 2는 10회 측정입니다.

파이펫을 수직으로 보관하고 선반이나 파이펫 스탠드에 매달아 보관합니다. 파이펫을 깨끗하고 오염 물질이 없는 상태로 유지하십시오. 파이펫 팁 랙을 닫아 두십시오.