Good Pipetting Practice(Gpp™): 교육 및 지원을 통한 피펫팅 결과 개선

대부분의 생명 과학 어플리케이션에는 피펫으로 측정한 양이 결과에 직접적인 영향을 미치는 중요한 액체 취급 단계가 포함됩니다. 피펫팅이 일관되고 정확하지 않으면 시간, 비용 및 재료가 낭비될 수 있습니다. 정확한 피펫팅은 재현 가능한 작업의 기반을 형성하며, 이는 의미 있는 데이터를 생성하는 데 필수적입니다.

피펫팅 정확도 향상을 위한 첫 번째 단계는 올바른 유형의 피펫과 적절한 용량 범위를 선택하는 것입니다. 크기의 경우 피펫팅 용량을 수용할 수 있는 가장 낮은 볼륨의 피펫을 선택합니다. 예를 들어, 2 μL 피펫팅 시 5 μL 피펫과 20 μL 피펫이 있는 경우 5 μL을 사용하면 더 나은 정확도를 얻을 수 있습니다. 

피펫 선택에 대한 백서를 확인하여 어떤 피펫이 액체 및 귀하의 상황과 특수한 기타 요인에 가장 적합한지 알아보십시오: 올바른 피펫 선택

올바른 기기를 갖추었다면 올바른 파이펫팅 기술을 연습하십시오. 시간이 지남에 따라 결과에 대한 신뢰를 극대화하기 위해 일상적인 테스트 일정을 설정하고, 다른 정밀 기기와 마찬가지로 정기적이고 전문적인 서비스 및 교정 계획을 수립해야 합니다.

Rainin SmartCheck를 사용하면 피펫의 정확도를 가장 쉽고 빠르게 테스트할 수 있습니다. 더 많은 정보 보기: mt.com/SmartCheck

올바른 피펫을 선택하려면 귀하의 요구사항에 대한 평가가 필요합니다. 첫째, 어떤 종류의 샘플을 피펫팅 하십니까? 수용성입니까? 아니면 점성, 휘발성, 거품, 부식성 또는 위험한 액체입니까? 수용성 및 거의 수성 액체의 경우 가장 일반적인 공기 치환식 피펫("에어 쿠션" 피펫이라고도 함)을 선택하는 것이 좋습니다. 점성, 휘발성 및 기타 특수한 액체 유형의 경우 직접 치환식 피펫이 정확도와 안전성 모두에 더 나은 선택이 될 것입니다. 

얼마나 많은 양을 피펫팅 할 예정입니까? 한 용기에서 다른 용기로 얼마나 많은 샘플을 이동해야 합니까? 피펫 선택에 대한 백서를 확인하여 액체 및 상황에 따른 기타 요인에 따라 어떤 피펫이 가장 적합한지 알아보십시오.

가능한 최소 용량을 피펫팅하려면 특수 기기 및 기술이 필요합니다. 100nL까지의 용량을 반복 분주하기 위해서는 리피터 피펫이 최선의 선택일 수 있습니다. 또 다른 피펫은 몇 번의 분주에만 사용할 수도 있습니다. 피펫팅 하려는 용량을 수용할 수 있는 가장 작은 크기의 피펫을 사용해야 합니다. 

극소량에서 피펫팅 기술은 정확성과 재현성에 비례적으로 더 큰 영향을 미칩니다. 침수 깊이, 피펫팅 각도 및 로딩 속도를 제어하는 것이 중요합니다. Rainin 피펫팅 기법 포스터가 도움이 될 수 있습니다.

Rainin NanoRep은 100 nL까지 Aliquots를 반복 분주합니다. 자세한 내용은 여기를 참조하십시오: mt.com/NanoRep

정확하고 재현 가능한 멀티채널 피펫팅에서 가장 중요한 요소는 피펫의 모든 채널에 대한 밀봉의 무결성입니다. 이는 모든 팁이 공기 누출 없이 각 샤프트에 완벽하게 장착된다는 것을 의미합니다. 제조업체마다 다양한 인체공학적 용이성과 밀봉 일관성 수준이 다르기 때문에 다양한 방식으로 이를 달성합니다. Rainin의 LTS LiteTouch System 피펫 팁은 멀티채널에서 로딩하고 배출하는 데 최소한의 힘만 필요하며 항상 일관되게 밀봉합니다.

Rainin의 다양한 멀티채널 피펫을 보려면 여기를 클릭하십시오.

로딩할 때는 피펫을 가능한 한 수직에 가깝게 잡고 Y축에서 20° 이상의 각도를 벗어나지 않게 하십십시오. 분주할 때 팁에서 모든 액체를 완전히 빼내기 위해 대상 용기의 벽에 터치오프하는 경우에는 20°를 초과해도 무방합니다.

정방향 피펫팅은 표준 피펫팅 기법이며 수용성 샘플에 가장 적합한 선택입니다. 점성이 있고 휘발성이 있는 샘플의 경우 역방향(리버스) 피펫팅이 더 나은 정확도를 제공합니다.

정방향(forward): 피펫을 액체 외부에 두고 플런저를 첫 번째 정지 지점까지 누릅니다. 그런 다음 팁을 작업하려는 액체에 2-10mm 깊이로 담그십시오(더 깊이 담그지 마십시오). 플런저를 천천히 완전히 풀어서 전체 액체량을 로딩합니다. 대상 용기에 분주하려면 피펫을 해당 용기로 옮긴 다음 플런저를 첫 번째 정지 지점부터 두 번째 정지 지점까지 균일한 속도로 누릅니다. 플런저를 완전히 누른 상태에서 피펫 팁을 용기 벽 위로 가볍게 끌어 올려 "터치오프(Touch Off)"합니다. 이렇게 하면 전체 액체 용량을 완전히 분주하는 데 도움이 됩니다. 플런저를 풀고 피펫 팁을 배출하고 새 피펫 팁을 장착한 다음 반복합니다.

역방향(reverse): 플런저를 첫 번째 정지 지점에서 두 번째 정지 지점까지 완전히 누릅니다. 그런 다음 팁을 액체에 담그고 플런저를 천천히 균일하게 놓아서 로딩합니다. 수용 용기로 이동하고 플런저를 첫 번째 정지 지점까지만 눌러 올바른 용량을 분주합니다. 피펫 팁에 소량의 잔량이 남게 됩니다. 피펫을 폐기-분주 용기 위로 옮기고 플런저를 두 번째 정지 지점("블로우아웃" 스톱이라고도 함)까지 눌러 남은 액체를 배출합니다. 플런저를 풀고 피펫 팁을 배출하고 새 피펫 팁을 장착한 다음 반복합니다.

공기 치환식 피펫은 혈액을 포함한 약간의 점성이 있는 액체를 피펫팅하는 데 사용할 수 있습니다. 최대한의 정확도를 얻으려면 위에서 설명한 역방향 피펫팅 기법을 사용하십시오. 85% 글리세롤 또는 Triton X-100과 같이 점성이 더 높은 액체의 경우 직접 치환식 피펫이 최고의 정확성과 일관성을 제공합니다.

에탄올과 같이 약간의 휘발성이 있는 액체는 위에서 언급한 역방향 피펫팅 기법을 사용하여 공기 치환식 피펫으로 피펫팅할 수 있습니다. 그러나 휘발성 액체에는 직접 치환식 피펫이 더 나은 선택입니다. 

공기 치환식 피펫을 사용하는 경우 용량을 피펫팅하기 전에 피펫 팁을 최소 5회 미리 헹구십시오(로딩 및 분주). 이렇게 하면 피펫 내부의 공기가 평형을 이루어 액체의 증발 속도를 늦춥니다. 휘발성 액체의 빠른 증발은 피펫 내부의 공기를 팽창시켜 플런저에 압력을 가하지 않고도 팁에서 액체를 밀어내므로 정확한 용량 전달을 감소시킵니다.

아세토니트릴과 같은 휘발성 액체는 일반적으로 직접 치환식 피펫을 이용하는 것이 좋습니다.

예, 공기 치환 피펫으로 피펫팅 시 에어로졸이 생성될 수 있습니다. 에어로졸은 피펫 내부로 올라가 내부 벽과 피스톤을 오염시킬 수 있습니다. 에어로졸화는 로딩 중 플런저를 너무 빨리 풀 때 더 쉽게 발생하며, 너무 빠르게 분주하면 피펫 외부에서 반대 방향으로 발생할 수도 있습니다. 

에어로졸을 최소화하려면 천천히 고르게 로딩하고 분주하십시오. 필터 팁을 사용하십시오.

직접 치환식 피펫은 에어로졸화를 방지하는 주사기 팁을 사용합니다. 직접 치환식 피펫은 위험한 액체 및 점성 또는 휘발성이 높은 액체를 피펫팅하는 데 가장 적합한 선택입니다.

매우 차갑거나 뜨거운 액체는 공기 치환식 피펫 내부의 공기압을 변화시켜 부정확한 피펫팅을 초래합니다. 

액체와 피스톤 사이에 공기 포켓이 없는 주사기 팁이 있는 직접 치환식 피펫은 액체의 온도 차이에 영향을 받지 않습니다. 직접 치환식 피펫은 실온이 아닌 액체에서도 정확한 결과를 제공합니다.

공기 치환식 피펫으로 매우 뜨겁거나 차가운 액체를 피펫팅해야 하는 경우 피펫 팁을 미리 헹구지 마십시오. 이는 일반적으로 정확도를 높이기 위한 가장 좋은 방법입니다. 대신, 액체 온도가 피펫 내부 공극에 미치는 영향을 최소화하기 위해 신속하게 로딩 및 분주하십시오.

피펫팅 시 기포와 거품이 생기는 것을 방지하려면 액체 저장소에 팁을 10mm 이상 담그지 말고 천천히 로딩하십시오.

리버스(역방향) 피펫팅은 로딩 전에 플런저를 2번째 정지 지점까지 완전히 눌러 액체 샘플에 공기를 주입할 가능성이 없기 때문에 추가적인 보호 기능을 제공합니다. 역방향 피펫팅에 대한 자세한 내용은 이 페이지를 참조하십시오. 

직접 치환식 피펫의 경우 주사기 형태의 팁에는 액체가 상호 작용할 수 있는 공기가 없기 때문에 액체와 상호 작용할 때 기포나 거품이 발생하지 않습니다.

젖은 천과 이소프로판올 등의 세제 또는 10% 표백제로 닦아 피펫의 오염을 제거하십시오. 마이크로미터의 투명한 플라스틱 창은 피하십시오.

또 다른 옵션으로는 오토클레이브(고압멸균)가 있지만 피펫 기기 사양을 확인하십시오. 오토클레이브가 가능한 경우 기기 전체를 오토클레이브 합니까 아니면 리퀴드 엔드만 오토클레이브 합니까?  종종 리퀴드 엔드만 오토클레이브 할 수 있습니다.

피펫 세척에 대한 자세한 내용은 피펫 세척 포스터를 참조하십시오.

교정(Calibration)는 피펫의 체계적 오류율(정확도) 및 무작위 오류율(정밀도)을 제어하고 문서화 한 측정입니다. 많은 실험실 환경에서 피펫 성능은 공인된 기관에서 인증한 특정 조건에서 법률에 따라 정기적으로 테스트하고 문서화해야 합니다. 

ISO 인증 제공업체는 통제된 환경에서 피펫을 교정합니다. 결과는 교정 인증서에 안전하게 문서화되어 각 기기에 대한 감사 준비 성능 기록에 추가됩니다. 조정(adjustment)이 필요한 경우 ISO 인증 교정 실험실에서 제조업체에서 권장하는 부품 및 윤활유로 전문 서비스를 제공합니다. 

Rainin 및 METTLER TOLEDO는 우편 접수 및 현장 서비스 옵션을 통해 신속한 처리를 제공하는 세계 최대의 피펫 서비스 조직입니다. 서비스 실험실은 ISO 17025 인증을 받았으며 절차는 ISO 8655에 대한 2022 업데이트를 따릅니다. 

피펫 정확도(accuracy, 또는 "trueness"라고도 함)는 모든 측정(4-10회 측정)의 평균 용량와 설정 용량 간의 차이입니다. 

정밀도(precision)는 수행된 모든 측정의 표준 편차입니다. 각 판독값은 다른 판독값과 얼마나 떨어져 있습니까?

피펫 측정불확도(uncertainty)는 전체 정확도를 정량적으로 나타내는 용어입니다. 이것은 진실성(계통 오차의 척도)과 정밀도(무작위 오차의 척도)의 조합입니다. 

측정불확도 방정식은 다음과 같습니다. 

측정불확도 = 계통 오차 + 무작위 오차 * k. k(검사 계수 또는 Z-점수, 측정 횟수에 따라 달라짐). 4회 측정 시 k=3.31, 10회 측정 시 k=2 입니다.

피펫은 선반이나 피펫 스탠드에 매달아 수직으로 보관하십시오. 피펫을 깨끗하고 오염 물질이 없도록 유지하십시오. 피펫 팁 랙은 닫아둡니다.