Kako pravilno koristiti pipetu?

Precizno pipetiranje zahtijeva svladavanje nekoliko osnovnih tehnika. To uključuje:

  • Uranjanje nastavka pipete na ispravnu dubinu u tekućinu, na temelju veličine nastavka i tekućeg tipa
  • Prethodno isperite svježi nastavak tekućinom koja se aspirira
  • Držanje pipete pod pravim kutom (ne više od 20° okomito) 
  • Aspiracija i dispenziranje brzinom koja minimizira stvaranje mjehurića
  • Uzimanje pauza kako bi se izbjeglo prekomjerno zagrijavanje instrumenta, što može biti posljedica dugotrajne uporabe i utjecati na točnost širenjem zraka unutar pipete

 

Zašto je točno pipetiranje važno?

Većina primjena znanosti o životu uključuje kritične korake rukovanja tekućinom u kojima volumen pipetted izravno utječe na rezultat. Ako pipetiranje nije dosljedno i točno, vrijeme, novac i materijal mogu propasti. Točno pipetiranje čini temelj ponovljivog rada, što je ključno za generiranje smislenih podataka.

Kako poboljšati točnost pipetiranja i smanjiti pogreške?

Prvi korak prema poboljšanju točnosti pipetiranja je odabir prave vrste pipete i odgovarajućeg raspona volumena. Za veličinu odaberite pipetu najniže glasnoće koja će odgovarati glasnoći koju pipetirate. Na primjer, ako pipetirate 2 μL i imate pipetu od 5 μL i pipetu od 20 μL, dobit ćete bolju točnost pomoću 5 μL. 

Pogledajte ovu stručnu studiju o odabiru pipeta kako biste razumjeli koja pipeta najbolje odgovara tekućini i drugim čimbenicima jedinstvenim za vašu situaciju: Odabir prave pipete

Nakon što dobijete pravi instrument, primijenite svoju dobru tehniku pipetiranja u praksi. Postavite rutinski raspored testiranja kako biste s vremenom povećali povjerenje u svoje rezultate i, kao i kod bilo kojeg preciznog instrumenta, obavezno uspostavite redoviti, stručni režim službe i kalibracije.

Najlakši način za brzo testiranje točnosti pipete može biti Rainin SmartCheck. Saznajte više na mt.com/SmartCheck 

Kako mogu znati koju pipetu koristiti?

Odabir prave pipete uključuje procjenu vaših zahtjeva. Prvo, kakve uzorke pipetirate? Jesu li vodeni? Ili su viskozni, hlapljivi, pjenasti, korozivni ili opasni? Za vodene i gotovo vodene tekućine dobar su izbor najčešće pipete za istiskivanje zraka (koje se nazivaju i pipete na "zračni jastuk). Za viskozne, hlapljive i druge neobične tipove tekućine, pipeta s pozitivnim pomakom bila bi bolji izbor i za točnost i za sigurnost. 

Koji volumen ćete pipetirati? Koliko uzoraka trebate prenijeti s jedne posude na drugu? Pogledajte ovu stručnu studiju o odabiru pipeta kako biste razumjeli koja pipeta najbolje funkcionira ovisno o tekućini i drugim čimbenicima jedinstvenim za vašu situaciju.

Kako pipetirati male količine?

Pipetiranje najmanjih mogućih volumena uključuje specijalizirane instrumente i tehnike. Repetitorska pipeta može biti vaš najbolji izbor za ponavljanje i dispenziranje volumena do 100 nL. Druga pipeta također može raditi za samo nekoliko točenja. Obavezno upotrijebite pipetu najmanje veličine koja će primiti volumen koji želite pipetirati. 

Pri vrlo malim količinama tehnika pipetiranja ima proporcionalno veći utjecaj na točnost i ponovljivost. Dubina uranjanja, kut pipetiranja i brzina aspiracije važni su za kontrolu. Poster Pipetting Techniques iz Rainina može pomoći.

Rainin NanoRep ponavlja-dijeli alikvote do 100 nL. Više saznajte ovdje: mt.com/NanoRep

Kako koristiti višekanalnu pipetu?

Najvažniji čimbenik u točnom, ponovljivom višekanalnom pipetiranju je cjelovitost brtve za svaki kanal pipete. To znači da se svaki nastavak savršeno uklapa u svaku osovinu s nultim propuštanjem zraka. Različiti proizvođači to postižu na različite načine, s različitim ergonomskim razinama lakoće i konzistencije brtvljenja. LTS LiteTouch System nastavci za pipete tvrtke Rainin zahtijevaju najmanju silu za učitavanje i izbacivanje s višekanalnih kanala, a svaki put se dosljedno zatvaraju.

Kliknite ovdje da biste vidjeli Raininov širok raspon višekanalnih pipeta.

Koji je ispravan način držanja pipete?

Kada aspirirate, držite pipetu što bliže vertikali, izbjegavajući bilo koji kut veći od 20 ° od osi Y. Prilikom doziranja, ako dodirujete zid ciljne posude kako biste u potpunosti izvukli svu tekućinu iz nastavaka, u redu je prekoračiti kut od 20°.

Što je pipetiranje naprijed i natrag?

Pipetiranje naprijed je standardna tehnika pipetiranja i najbolji izbor za vodene uzorke. Za viskozne i hlapljive uzorke, obrnuto pipetiranje pruža bolju točnost.

Da biste proslijedili pipetu, gurnite klip do prvog zaustavljanja dok držite pipetu izvan tekućine. Zatim uronite nastavak 2-10 mm duboko u tekućinu s kojom radite - ne dublje. Polako otpustite klip do punog produžetka kako biste aspirirali cijeli volumen tekućine. Da biste se raspršili u svoju ciljnu posudu, pomaknite pipetu u posudu, a zatim ravnomjerno pritisnite klip kroz prvu stanicu sve do druge stanice - što se tiče klipa. S potpuno pritisnutim klipom, lagano povucite nastavak pipete uz zid posude kako biste se "dodirnuli". To pomaže u potpunom dispenziranju punog volumena tekućine. Otpustite klip, izbacite nastavak pipete, umetnite novi nastavak pipete i ponovite.

Da biste preokrenuli pipetu, gurnite klip sve do prve stanice do druge stanice - što se tiče klipa. Zatim uronite nastavak u tekućinu i polako i ravnomjerno otpustite klip da aspirira. Pomaknite se na prijemnu posudu i pritisnite klip SAMO DO PRVOG ZAUSTAVLJANJA kako biste otpustili ispravan volumen. Mali preostali volumen ostat će u nastavaku pipete. Pomaknite pipetu preko posude za odbacivanje i pritisnite klip ostatak puta do drugog zaustavljanja, koje se naziva i zaustavljanje "ispuhivanja", kako biste oslobodili preostalu tekućinu. 

Otpustite klip, izbacite nastavak pipete, umetnite novi nastavak pipete i ponovite.

Kako pipetirati viskozne tekućine?

Pipeta za istiskivanje zraka može se koristiti za pipetiranje blago viskoznih tekućina, uključujući krv. Da biste postigli maksimalnu točnost, koristite gore opisanu tehniku obrnutog pipetiranja. Za više viskoznih tekućina, kao što su 85% glicerol ili Triton X-100, pipeta s pozitivnim pomakom nudi najbolju točnost i konzistenciju.

Kako pipetirati hlapljive tekućine?

Blago hlapljive tekućine poput etanola mogu se pipetirati pipetom pipetom za istiskivanje zraka pomoću gore navedene tehnike obrnutog pipetiranja. Međutim, pipete s pozitivnim pomakom bolji su izbor za hlapljive tekućine. 

Ako koristite pipetu za istiskivanje zraka, prethodno isperite nastavak pipete (aspirat i dispenzirajte) najmanje pet puta prije pipetiranja volumena. To uravnotežuje zrak unutar pipete, usporavajući brzinu isparavanja tekućine. Brzo isparavanje hlapljivih tekućina proširuje zrak unutar pipete i tjera tekućinu iz nastavka bez pritiska na klip, a to smanjuje točnu isporuku volumena.

Hlapljive tekućine kao što je acetonitril općenito se bolje rukuju pipetom s pozitivnim pomakom.

Stvara li pipetiranje aerosole?

Da, pipetiranje pipetama za istiskivanje zraka može stvoriti aerosole. Aerosoli se mogu uzdići u unutrašnjost pipete i kontaminirati unutarnje stjenke i klip. Aerosolizacija se odvija lakše kada se klip prebrzo otpušta tijekom aspiracije, a može se pojaviti iu suprotnom smjeru izvan pipete s pretjerano brzim doziranjem. 

Da biste smanjili aerosole, aspirirajte i dispenzirajte polako i ravnomjerno. Koristite filtrirane nastavke. 

Za pipete s pozitivnim pomakom koriste nastavke u stilu štrcaljke koji sprječavaju aerosolizaciju. Pipeta s pozitivnim pomakom najbolji je izbor za pipetiranje opasnih tekućina i bilo koje tekućine povišene viskoznosti ili volatilnosti.

Kako temperatura tekućina utječe na pipetiranje?

Vrlo hladne ili vruće tekućine mijenjaju tlak zraka unutar pipeta za istiskivanje zraka, što dovodi do netočnog pipetiranja. 

Na pipete s pozitivnim pomakom, s nastavcima u stilu štrcaljke koji nemaju zračni džep između tekućine i klipa, ne utječu različite temperature tekućina. Pipete s pozitivnim pomakom pružit će točne rezultate s tekućinama koje nisu sobne temperature.

Ako morate pipetirati vrlo vruću ili hladnu tekućinu pipetom za pomicanje zraka, nemojte prethodno isprati nastavak pipete - to je obično najbolja praksa za najveću točnost. Umjesto toga, žurno aspirirajte i ispustite kako biste smanjili učinak temperature tekućine na unutarnji zračni razmak pipete.

Kako izbjeći mjehuriće prilikom pipetiranja?

Da biste izbjegli mjehuriće i pjenjenje prilikom pipetiranja, ne uranjajte nastavak više od 10 mm u spremnik tekućine i polako aspirirajte.

Obrnuto pipetiranje pruža dodatnu zaštitu jer prije aspiracije u potpunosti pritisnete klip na 2. zaustavljanje, tako da nema šanse za ubrizgavanje zraka u tekući uzorak. Za više informacija o obrnutom pipetiranju posjetite ovu stranicu

Pipeta s pozitivnim pomakom ne stvara mjehuriće ili pjenu u interakciji s tekućinom jer njezin nastavak u obliku štrcaljke ne dopušta zrak s kojim bi tekućina mogla djelovati.

Koji je najbolji način dekontaminacije pipete?

Dekontaminirajte pipetu brisanjem mokrom krpom i deterdžentom poput izopropanola ili 10% otopine izbjeljivača. Izbjegavajte prozirno plastično okno mikrometra.

Autoklaviranje može biti druga opcija, ali provjerite specifikacije instrumenta pipete. Ako se može autoklavirati, je li cijeli instrument autoklaviran ili samo nastavak?  Često se može autoklavirati samo nastavak.

Za više informacija o čišćenju pipete, nabavite poster Čišćenje pipete .

Kako kalibrirati pipetu?

Kalibracija je kontrolirano i dokumentirano mjerenje sustavne brzine pogreške (točnosti) pipete i brzine slučajne pogreške (preciznost). U mnogim laboratorijskim okruženjima učinkovitost pipeta mora se redovito ispitivati i dokumentirati zakonom pod posebnim uvjetima koje je certificiralo akreditirano tijelo. 

Davatelji ISO certifikata kalibriraju pipete u kontroliranom okruženju. Rezultati su sigurno dokumentirani na kalibracijskom certifikatu, dodajući povijest izvedbe spremnu za reviziju za svaki instrument. Kada su potrebna podešavanja, kalibracijski laboratoriji s ISO certifikatom pružaju stručnu uslugu s dijelovima i mazivima koje preporučuje proizvođač. 

Rainin i METTLER TOLEDO najveća su svjetska organizacija za usluge pipeta  s brzim obrtom od opcija slanja poštoma i usluga na licu mjesta. Servisni laboratoriji imaju certifikat ISO 17025, a postupci slijede ažuriranje norme ISO 8655 za 2022. godinu. 

Kako mogu izračunati točnost i preciznost pipete?

Točnost pipete - ili istinitost, kako se sada naziva - razlika je između srednjeg volumena svih mjerenja (4-10 mjerenja) i postavljenog volumena. 

Preciznost je standardna devijacija svih provedenih mjerenja. Koliko su udaljeni od svakog čitanja?

Kako izračunati nesigurnost pipete?

Nesigurnost pipete kvantitativni je izraz za njezinu ukupnu točnost. To je kombinacija istinitosti (mjera sustavne pogreške) i preciznosti (mjera slučajne pogreške). 

Jednadžba nesigurnosti je: 

Nesigurnost = sustavna pogreška + slučajna pogreška * k. k (faktor pokrivenosti ili Z-rezultat) ovisi o broju mjerenja. k=3,31 za četiri mjerenja i 2 za deset mjerenja.

Koji je najbolji način spremanja pipete?

Pipete čuvajte okomito, viseći s police ili postolja za pipete. Držite pipete čistima i bez onečišćenja. Držite police za nastavke pipeta zatvorene.