Praktik Pemipetan yang Baik: Hasil yang Lebih Baik melalui Pelatihan dan Dukungan

Sebagian besar aplikasi ilmu hayati mencakup langkah-langkah penanganan cairan kritis di mana volume pipet secara langsung memengaruhi hasil. Jika pemipetan tidak konsisten dan akurat, maka waktu, uang, dan material dapat-. Pemipetan yang akurat membentuk dasar pekerjaan yang dapat direproduksi, yang penting untuk menghasilkan data yang bermakna.

Langkah pertama untuk meningkatkan akurasi pemipetan adalah memilih jenis pipet yang tepat dan rentang volume yang tepat. Untuk ukuran, pilih pipet dengan volume terendah yang akan mengakomodasi volume yang Anda pipet. Misalnya, jika Anda mempipet 2 μL dan memiliki pipet 5 μL dan pipet 20 μL, Anda akan mendapatkan akurasi yang lebih baik menggunakan pipet 5 μL. 

Lihat laporan resmi tentang pemilihan pipet ini untuk memahami pipet mana yang paling cocok untuk cairan dan faktor lain yang unik untuk situasi Anda: Memilih Pipet yang Tepat

Setelah Anda memiliki instrumen yang tepat, praktikkan teknik pemipetan Anda yang baik. Siapkan jadwal pengujian rutin untuk memaksimalkan kepercayaan pada hasil Anda dari waktu ke waktu, dan, seperti halnya instrumen presisi lainnya, pastikan untuk melembagakan layanan dan rejimen kalibrasi yang teratur dan ahli.

Cara termudah untuk menguji akurasi pipet dengan cepat adalah Rainin SmartCheck. Cari tahu lebih lanjut di mt.com/SmartCheck 

Memilih pipet yang tepat melibatkan evaluasi kebutuhan Anda. Pertama, jenis sampel apa yang Anda pipet? Apakah mereka berair? Atau apakah mereka kental, mudah menguap, berbusa, korosif, atau berbahaya? Untuk cairan berair dan mendekati air, pipet perpindahan udara yang paling umum (juga disebut pipet "bantalan udara") adalah pilihan yang baik. Untuk jenis cairan kental, mudah menguap, dan tidak biasa lainnya, pipet perpindahan positif akan menjadi pilihan yang lebih baik untuk akurasi dan keamanan. 

Berapa volume yang akan Anda pipet? Berapa banyak sampel yang Anda perlukan untuk mentransfer dari satu kapal ke kapal lainnya? Lihat laporan resmi tentang pemilihan pipet ini untuk memahami pipet mana yang paling cocok tergantung pada cairan dan faktor lain yang unik untuk situasi Anda.

Pemipetan volume sekecil mungkin melibatkan instrumen dan teknik khusus. Pipet repeater mungkin merupakan pilihan terbaik Anda untuk mengulangi volume pengeluaran hingga 100 nL. Pipet lain juga dapat bekerja hanya untuk beberapa pengeluaran. Pastikan untuk menggunakan pipet ukuran terkecil yang akan mengakomodasi volume yang ingin Anda pipet. 

Pada volume yang sangat rendah, teknik pemipetan memiliki dampak proporsional yang lebih besar pada akurasi dan reproduktifitas. Kedalaman perendaman, sudut pemipetan, dan laju aspirasi penting untuk dikendalikan. Poster Teknik Pipetan dari Rainin dapat membantu.

Rainin NanoRep berulang mengeluarkan alikuot hingga 100 nL. Cari tahu lebih lanjut di sini: mt.com/NanoRep

Faktor terpenting dalam pemipetan multisaluran yang akurat dan dapat direproduksi adalah integritas segel untuk setiap saluran pipet. Itu berarti setiap ujung pas di setiap poros tanpa kebocoran udara. Produsen yang berbeda mencapai ini dengan cara yang berbeda, dengan berbagai kemudahan ergonomis dan tingkat konsistensi penyegelan. Ujung pipet LTS LiteTouch System dari Rainin membutuhkan kekuatan paling sedikit untuk memuat dan dikeluarkan dari multisaluran, dan setiap saat menyegel secara konsisten.

Klik di sini untuk melihat berbagai macam pipet multisaluran Rainin.

Saat menyedot, pegang pipet sedekat mungkin dengan vertikal, hindari sudut yang lebih besar dari 20° dari sumbu Y. Saat mengeluarkan, jika Anda menyentuh dinding bejana target untuk menarik semua cairan sepenuhnya dari ujungnya, tidak apa-apa untuk melebihi sudut 20°.

Pemipetan maju adalah teknik pemipetan standar dan pilihan terbaik untuk sampel berair. Untuk sampel kental dan mudah menguap, pemipetan terbalik memberikan akurasi yang lebih baik.

Untuk memajukan pipet, dorong pendorong ke bawah ke pemberhentian pertama sambil menahan pipet di luar cairan. Kemudian, rendam ujungnya sedalam 2-10mm ke dalam cairan yang Anda kerjakan – tidak lebih dalam. Lepaskan pendorong perlahan hingga ekstensi penuh untuk menyedot volume cairan lengkap. Untuk mengeluarkan ke dalam wadah target Anda, pindahkan pipet ke dalam bejana, lalu tekan pendorong dengan kecepatan yang sama melalui pemberhentian pertama hingga pemberhentian kedua – sejauh pendorong berjalan. Dengan pendorong ditekan sepenuhnya, seret perlahan ujung pipet ke dinding bejana untuk "menyentuh". Ini membantu sepenuhnya mengeluarkan volume cairan penuh. Lepaskan pendorong, keluarkan ujung pipet, muat ujung pipet baru, dan ulangi.

Untuk membalikkan pipet, dorong pendorong ke bawah sepenuhnya melalui pemberhentian pertama ke pemberhentian kedua – sejauh pendorong berjalan. Kemudian, rendam ujungnya dalam cairan dan lepaskan pendorong secara perlahan dan merata untuk menyedot. Pindah ke bejana penerima dan tekan pendorong HANYA KE PEMBERHENTIAN PERTAMA untuk mengeluarkan volume yang benar. Volume residu kecil akan tetap ada di ujung pipet. Pindahkan pipet di atas wadah pembuangan-pembuangan dan tekan pendorong selebihnya ke pemberhentian kedua, juga disebut penghenti "ledakan", untuk melepaskan cairan yang tersisa. 

Lepaskan pendorong, keluarkan ujung pipet, muat ujung pipet baru, dan ulangi.

Pipet perpindahan udara dapat digunakan untuk memotret cairan yang sedikit kental, termasuk darah. Untuk mencapai akurasi maksimum, gunakan teknik pemipetan terbalik yang dijelaskan di atas. Untuk cairan yang lebih kental, seperti gliserol 85% atau Triton X-100, pipet perpindahan positif menawarkan akurasi dan konsistensi terbaik.

Cairan yang sedikit mudah menguap seperti etanol dapat dipipet dengan pipet perpindahan udara menggunakan teknik pemipetan terbalik yang disebutkan di atas. Namun, pipet perpindahan positif adalah pilihan yang lebih baik untuk cairan yang mudah menguap. 

Jika menggunakan pipet perpindahan udara, bilas ujung pipet terlebih dahulu (aspirasi dan keluarkan) setidaknya lima kali sebelum memipet volume Anda. Ini menyeimbangkan udara di dalam pipet, memperlambat laju penguapan cairan. Penguapan cepat cairan yang mudah menguap mengembang udara di dalam pipet dan memaksa cairan dari ujungnya tanpa tekanan apa pun yang ditempatkan pada pendorong, dan ini mengurangi pengiriman volume yang akurat.

Cairan yang mudah menguap seperti asetonitril umumnya lebih baik ditangani dengan pipet perpindahan positif.

Ya, pemipetan dengan pipet perpindahan udara dapat menghasilkan aerosol. Aerosol dapat naik ke bagian dalam pipet dan mencemari dinding interior dan piston. Aerosolisasi lebih mudah terjadi ketika pendorong dilepaskan terlalu cepat selama aspirasi dan juga dapat terjadi dalam arah yang berlawanan di luar pipet dengan pengeluaran yang terlalu cepat. 

Untuk meminimalkan aerosol, aspirasi dan keluarkan secara perlahan dan merata. Gunakan tips yang difilter. 

Pipet perpindahan positif menggunakan ujung bergaya jarum suntik yang mencegah aerosolisasi. Pipet perpindahan positif adalah pilihan terbaik untuk memipet cairan berbahaya dan cairan apa pun dengan viskositas atau volatilitas tinggi.

Cairan yang sangat dingin atau panas mengubah tekanan udara di dalam pipet perpindahan udara, yang menyebabkan pemipetan yang tidak akurat. 

Pipet perpindahan positif, dengan ujung gaya jarum suntik yang tidak memiliki kantong udara antara cairan dan piston, tidak terpengaruh oleh suhu cairan yang berbeda. Pipet perpindahan positif akan memberikan hasil yang akurat dengan cairan non-suhu kamar.

Jika Anda harus mempipet cairan yang sangat panas atau dingin dengan pipet perpindahan udara, jangan membilas ujung pipet terlebih dahulu—ini biasanya merupakan praktik terbaik untuk akurasi tertinggi. Sebagai gantinya, menyedot dan mengeluarkan dengan cepat untuk meminimalkan efek suhu cairan pada celah udara interior pipet.

Untuk menghindari gelembung dan berbusa saat pemipetan, jangan merendam ujungnya lebih dari 10mm di reservoir cairan, dan menyedot perlahan.

Pemipetan terbalik menawarkan perlindungan tambahan karena, sebelum menyedot, Anda menekan penuh pendorong ke stop ke-2, sehingga tidak ada kemungkinan untuk menyuntikkan udara ke dalam sampel cairan. Untuk informasi lebih lanjut tentang pemipetan terbalik, kunjungi halaman ini. 

Pipet perpindahan positif tidak menghasilkan gelembung atau busa saat berinteraksi dengan cairan karena ujung bergaya jarum suntiknya tidak menghadirkan udara untuk berinteraksi dengan cairan.

Dekontaminasi pipet dengan menyekanya dengan kain basah dan deterjen seperti isopropanol atau larutan pemutih 10%. Hindari jendela plastik bening mikrometer.

Autoklaf mungkin merupakan pilihan lain, tetapi periksa spesifikasi instrumen pipet Anda. Jika dapat diautoklaf, apakah seluruh instrumen diautoklaf atau hanya ujung  cair? Seringkali, hanya ujung cairan yang dapat diautoklaf.

Untuk informasi selengkapnya tentang membersihkan pipet, dapatkan poster Membersihkan Pipet.

Kalibrasi adalah pengukuran yang terkontrol dan didokumentasikan dari tingkat kesalahan sistematis (akurasi) dan tingkat kesalahan acak pipet (presisi). Di banyak lingkungan laboratorium, kinerja pipet harus diuji secara teratur dan didokumentasikan oleh hukum dalam kondisi tertentu yang disertifikasi oleh badan terakreditasi. 

Penyedia bersertifikat ISO mengkalibrasi pipet dalam pengaturan terkontrol. Hasil didokumentasikan dengan aman pada sertifikat kalibrasi, menambah riwayat kinerja siap audit untuk setiap instrumen. Jika penyesuaian diperlukan, laboratorium kalibrasi bersertifikat ISO menyediakan layanan ahli dengan suku cadang dan pelumas yang direkomendasikan pabrikan. 

Rainin dan METTLER TOLEDO adalah organisasi layanan pipet terbesar di dunia dengan perputaran cepat dari opsi layanan melalui pos dan di tempat. Laboratorium servis bersertifikat ISO 17025, dan prosedurnya mengikuti pembaruan 2022 ke ISO 8655. 

Akurasi pipet—atau kebenaran, seperti yang disebut sekarang—adalah perbedaan antara volume rata-rata dari semua pengukuran (4-10 pengukuran) dan volume yang ditetapkan. 

Presisi adalah standar deviasi dari semua pengukuran yang dilakukan. Seberapa jauh dari setiap bacaan yang lain?

Ketidakpastian pipet adalah istilah kuantitatif untuk akurasinya secara keseluruhan. Ini adalah kombinasi dari kebenaran (ukuran kesalahan sistematis) dan presisi (ukuran kesalahan acak). 

Persamaan untuk ketidakpastian adalah: 

Ketidakpastian = Kesalahan Sistematis + Kesalahan Acak * k. k (faktor cakupan atau skor-Z) tergantung pada jumlah pengukuran. k=3.31 untuk empat pengukuran dan 2 untuk sepuluh pengukuran.

Simpan pipet secara vertikal, digantung di rak atau dudukan pipet. Jaga agar pipet tetap bersih dan bebas dari kontaminan. Tutup rak ujung pipet.