 |
A hőmérséklet-szabályozás számos UV/VIS spektrofotometriás alkalmazásban fontos paraméternek számít,különösképpen a hőre érzékeny szerves anyagoknál. Jelen útmutató leírja, hogy miért annyira fontos tényező a hőmérséklet, továbbá bemutat számos gyakori alkalmazási lehetőséget, így például a lipázaktivitás mérését, a fehérjedenaturációt, DNS olvadáspont mérését és a béta-galaktozidáz Michaelis-Menten-féle enzimkinetikáját.
Az útmutató részletes információt nyújt mindemellett a METTLER TOLEDO UV/VIS Excellence spektrofotométerekhez jelenleg elérhető hőmérséklet-szabályozási megoldásokról:
- CuveT – Hőméséklet-szabályozás egyéni mintákhoz
- CuvetteChanger – Hőméséklet-szabályozás mintasorozatokhoz
1. Rövid összefoglalás
Az útmutató bemutatja a pontos hőmérséklet-meghatározás fontosságát az UV/VIS spektrofotometriában. Az egyes szempontokat olyan alkalmazási formákon keresztül mutatja be, amelyeket gyakran használnak az élettudomány területén. Mindemellett olyan gyakorlati tanácsokat és tippeket is tartalmaz a kiadvány, amelyekkel biztosítani lehet a magasabb hőmérsékleten elvégzett UV/VIS mérések pontosságát, különös tekintettel a METTLER TOLEDO Excellence készülékeihez elérhető CuveT és CuvetteChanger kiegészítők használatával.
2. Bevezetés
A UV/VIS spektrofotometriában alkalmazott a) mérés előtti, b) mérés közbeni vagy c) mérés utáni hőmérséklet-szabályozás általánosságban azt jelenti, hogy a méréshez a következőkben részletezett esetekben kontrollált hőmérsékleti feltételeket hoznak létre:
a) A mintát/analitot bizonyos hőmérsékleten kell tartani a bomlás késleltetéséhez vagy annak biztosításához, hogy a további (kémiai) reakciókhoz szükséges prekurzorok reakciója során megfelelő feltételek uralkodjanak. Az így kiváltott reakciót meghatározott hőmérséklet mellett spektrofotométerrel vizsgálják.
b) Létre lehet hozni állandó vagy bizonyos protokoll szerint változó hőmérsékleti feltételeket. Ilyen körülmények járulhatnak hozzá olyan reakciók katalizálásához, amelyeknél spektrofotométeres nyomon követésre van szükség.
c) Korábbi hőmérsékleti körülmények újbóli létrehozása vagy más hőmérsékleti feltételek kialakítása utánkövető spektrofotométeres vizsgálatokhoz, amelyek a reverzibilis (kémiai) reakciók monitorozását szolgálják.
[…]
Bővebb tájékoztatást az UV/VIS spektrofotometriás mérések helyes hőmérséklet-szabályozásáról szóló útmutatónkban találhat.
3. A hőmérséklet-szabályozott UV/VIS spektrofotometria alkalmazási lehetőségei
3.1 A lipázaktivitás mérése
A lipázaktivitás-meghatározás olyan mérés, amely során a környezeti feltételeknél magasabb hőmérsékletre van szükség, hogy ideális körülményeket biztosítsanak az enzimkatalizált kémiai reakciókhoz és azok spektrofotométeres monitorozásához.
[…]
3.2 Hőmérséklet-indukált fehérjedenaturáció
[…]
3.3 A béta-galaktozidáz Michaelis-Menten-féle enzimkinetikája
[…]
3.4 A DNS olvadáspontja
[…]
Bővebb tájékoztatást az UV/VISspektrofotometriás mérések helyes hőmérséklet-szabályozásáról szóló útmutatónkban találhat.
4. METTLER TOLEDO CuveT Peltier termosztátegység
A CuveT egy olyan egyküvettás (Peltier-) termosztát, amely hatékony hőmérséklet-szabályozást tesz lehetővé széles hőmérséklet-tartományban (4–95 ºC) az UV/VIS spektrofotometriás alkalmazásokban. A termosztátegység a METTLER TOLEDO UV7, UV5Bio és UV5 UV/VIS Excellence spektrofotométer készülékeivel használható. Az egység egyszerűen elhelyezhető a spektrofotométerek tetején, telepítéséhez nincs szükség további eszközre.
[…]
Bővebb tájékoztatást az UV/VIS spektrofotometriás mérések helyes hőmérséklet-szabályozásáról
szóló útmutatónkban találhat.
5. Gyakorlati tippek és tanácsok CuveT termosztáttal végzett hőmérséklet-szabályozáshoz
Ez a fejezet a rutinszerűen és hőmérséklet-szabályozással elvégzett UV/VIS spektrofotometriás mérésekhez ad olyan gyakorlati tanácsokat és tippeket, amelyeket a leggyakrabb előforduló kérdések alapján gyűjtöttek össze.
[…]
Bővebb tájékoztatást az UV/VIS spektrofotometriás mérések helyes hőmérséklet-szabályozásáról
szóló útmutatónkban találhat.
6. METTLER TOLEDO CuvetteChanger termosztáttal végzett hőmérséklet-szabályozás
A METTLER TOLEDO CuvetteChanger mintaváltó segítségével hatékony, akár 8 küvettás automatizált sorozatmérések végezhetők el vakoldatos méréseknél és komplex kinetikai alkalmazásoknál. Külső termosztát segítségével a küvettákban lévő minták hőmérséklete 10 és 80 °C közötti tartományban szabályozható.
[…]
Bővebb tájékoztatást az UV/VIS spektrofotometriás mérések helyes hőmérséklet-szabályozásáról
szóló útmutatónkban találhat.
7. Irodalomjegyzék
[1] www.mt.com/uv-vis
[2] www.mt.com/cuvet-peltier-uvvis
[3] Determination of Lipase Activity, Method PNAB-LIP39, Biocon Española S.A.
[4] Journal of Chemical Education, March 2000, DOI: 10.1021/ed077p 380
[5] 1. Enzyme Handbook, II, Barman, T. E., Springer- Verlag (Berlin-Heidelberg: 1969), p. 581.
