Kako pravilno koristiti pipetu?

Za precizno pipetiranje potrebno je svladati nekoliko osnovnih tehnika. To uključuje:

  • Uranjanje vrha pipete na ispravnu dubinu u tekućinu, ovisno o veličini nastavka i vrsti tekućine
  • Prethodno ispiranje svježeg vrha tekućinom koju treba usisati
  • Držite pipetu pod odgovarajućim kutom (ne više od 20° od okomite) 
  • Usisavanje i dispenziranje brzinom koja smanjuje stvaranje mjehurića
  • Pravljenje pauza kako bi se izbjeglo prekomjerno zagrijavanje rukom instrumenta, što može biti posljedica dulje uporabe i utjecati na točnost širenjem zraka unutar pipete


Zašto je važno precizno pipetiranje?

Većina primjena u znanosti o životu uključuje kritične korake rukovanja tekućinama u kojima volumen pipete izravno utječe na rezultat. Ako pipetiranje nije dosljedno i točno, vrijeme, novac i materijal mogu propasti. Precizno pipetiranje temelj je ponovljivog rada, što je ključno za generiranje smislenih podataka.

Kako mogu poboljšati točnost pipetiranja i smanjiti pogreške?

Prvi korak prema poboljšanju točnosti pipetiranja jest odabir prave vrste pipete i odgovarajućeg raspona volumena. Za veličinu odaberite pipetu s najmanjim volumenom koja će odgovarati volumenu koji pipetirate. Na primjer, ako pipetirate 2 μl i imate pipetu od 5 μl i pipetu od 20 μl, dobit ćete bolju točnost pomoću pipete od 5 μL. 

Pogledajte ovu studiju o odabiru pipeta kako biste saznali koja pipeta najbolje odgovara tekućini i druge čimbenike jedinstvene za vašu situaciju: Odabir prave pipete

Nakon što nabavite pravi instrument, primijenite svoju dobru tehniku pipetiranja u praksi. Postavite rutinski raspored testiranja kako biste povećali povjerenje u svoje rezultate tijekom vremena i, kao i kod svakog preciznog instrumenta, pobrinite se da uvedete redovitu, stručnu uslugu i režim kalibracije.

Najlakši način za brzo testiranje točnosti pipete može biti Rainin SmartCheck. Saznajte više na mt.com/SmartCheck 

Kako mogu znati koju pipetu koristiti?

Odabir prave pipete uključuje procjenu vaših zahtjeva. Prvo, kakve uzorke pipetirate? Jesu li vodeni? Ili su viskozni, hlapljivi, pjenasti, korozivni ili opasni? Za vodene i gotovo vodene tekućine dobar su izbor najčešće pipete s istiskivanjem zraka (koje se nazivaju i pipete sa zračnim jastucima). Za viskozne, hlapljive i druge neobične vrste tekućina, pipeta s pozitivnim pomakom bila bi bolji izbor i zbog točnosti i sigurnosti. 

Koji ćete volumen pipetirati? Koliko uzoraka trebate prenijeti s jedne posude na drugu? Pogledajte ovu studiju o odabiru pipeta da biste saznali koja pipeta najbolje funkcionira ovisno o tekućini i drugim čimbenicima jedinstvenim za vašu situaciju.

Kako pipetirate male količine?

Pipetiranje najmanjih mogućih volumena uključuje specijalizirane instrumente i tehnike. Repetitirajuća pipeta može biti vaš najbolji izbor za ponovljeno doziranje volumena do 100 nL. Druga pipeta također može raditi za samo nekoliko doziranja. Obavezno upotrijebite najmanju pipetu koja će odgovarati volumenu koji želite pipeti. 

Pri vrlo malim količinama tehnika pipetiranja ima proporcionalno veći utjecaj na točnost i ponovljivost. Dubina uranjanja, kut pipetiranja i brzina aspiracije važni su za kontrolu. Poster Tehnike pipetiranja tvrtke Rainin može vam pomoći.

Rainin NanoRep ponavlja alikvote do 100 nL. Saznajte više ovdje: mt.com/NanoRep

Kako upotrebljavati višekanalnu pipetu?

Najvažniji čimbenik u točnom i ponovljivom višekanalnom pipetiranju je cjelovitost brtve za svaki kanal pipete. To znači da svaki vrh savršeno pristaje na svaku osovinu bez curenja zraka. Različiti proizvođači to postižu na različite načine, s različitom ergonomskom lakoćom i razinama konzistencije brtvljenja. Nastavci za pipete LTS LiteTouch System tvrtke Rainin zahtijevaju najmanju silu za umetanje i izbacivanje iz višekanalnog sustava i svaki put se dosljedno zatvaraju.

Kliknite ovdje da biste vidjeli širok asortiman višekanalnih pipeta tvrtke Rainin.

Koji je ispravan način držanja pipete?

Prilikom usisavanja držite pipetu što bliže okomitoj osi i izbjegavajte kut veći od 20° od osi Y. Prilikom doziranja, ako dodirujete stijenku ciljne posude kako biste u potpunosti izvukli svu tekućinu iz vrha, u redu je prekoračiti kut od 20°.

Što je pipetiranje naprijed i unatrag?

Pipetiranje prema naprijed standardna je tehnika pipetiranja i najbolji izbor za vodene uzorke. Za viskozne i hlapljive uzorke reverzno pipetiranje pruža bolju točnost.

Za prosljeđivanje pipete gurnite klip prema dolje do prvog graničnika dok držite pipetu izvan tekućine. Zatim uronite vrh 2-10 mm duboko u tekućinu s kojom radite – ne dublje. Polako otpustite klip do potpunog izvlačenja kako biste usisali cijeli volumen tekućine. Za doziranje u ciljnu posudu, pomaknite pipetu u posudu, a zatim ravnomjerno pritisnite klip kroz prvi graničnik sve do drugog zaustavljanja – dokle god klip ide. Dok je klip potpuno pritisnut, lagano povucite vrh pipete uz stijenku posude kako biste "dodirnuli". To pomaže u potpunom doziranju punog volumena tekućine. Otpustite klip, izbacite vrh pipete, umetnite novi vrh pipete i ponovite.

Za obrnutu pipetu gurnite klip do kraja kroz prvi graničnik do drugog graničnika – do kraja klipa. Zatim uronite vrh u tekućinu i polako i ravnomjerno otpustite klip za aspiraciju. Pomaknite se do prihvatne posude i pritisnite klip SAMO DO PRVOG ZAUSTAVLJANJA kako biste dozirali točan volumen. Mali preostali volumen ostat će u vrhu pipete. Pomaknite pipetu preko posude za odbacivanje i doziranje i pritisnite klip do kraja do drugog graničnika, koji se naziva i graničnik za ispuhavanje, kako biste oslobodili preostalu tekućinu. 

Otpustite klip, izbacite vrh pipete, umetnite novi vrh pipete i ponovite.

Kako pipetirati viskozne tekućine?

Pipeta za istiskivanje zraka može se koristiti za pipetiranje blago viskoznih tekućina, uključujući krv. Da biste postigli maksimalnu točnost, upotrijebite gore opisanu tehniku obrnutog pipetiranja. Za viskoznije tekućine, kao što je 85% glicerol ili Triton X-100, pipeta s pozitivnim pomakom nudi najbolju točnost i konzistenciju.

Kako pipetirati hlapljive tekućine?

Blago hlapljive tekućine kao što je etanol mogu se pipetirati pipetom za istiskivanje zraka primjenom gore navedene tehnike obrnutog pipetiranja. Međutim, pipete s pozitivnim istisnom bolji su izbor za hlapljive tekućine. 

Ako upotrebljavate pipetu za istiskivanje zraka, prethodno isperite vrh pipete (usisavajte i dozirajte) najmanje pet puta prije pipetiranja volumena. Time se uravnotežuje zrak unutar pipete, usporavajući brzinu isparavanja tekućine. Brzo isparavanje hlapljivih tekućina širi zrak unutar pipete i istiskuje tekućinu iz vrha bez ikakvog pritiska na klip, a to smanjuje točnu isporuku volumena.

S hlapljivim tekućinama kao što je acetonitril općenito je bolje rukovati pipetom s pozitivnim istiskivanjem.

Stvara li pipetiranje aerosole?

Da, pipetiranje pipetama za istiskivanje zraka može stvoriti aerosole. Aerosoli se mogu uzdići u unutrašnjost pipete i kontaminirati unutarnje zidove i klip. Aerosolizacija se događa lakše kada se klip prebrzo otpusti tijekom aspiracije, a može se dogoditi i u suprotnom smjeru izvan pipete s pretjerano brzim doziranjem. 

Da biste smanjili aerosole, aspirirajte i dozirajte polako i ravnomjerno. Koristite filtrirane savjete. 

Pipete s pozitivnim pomakom koriste vrhove u obliku štrcaljke koji sprječavaju aerosolizaciju. Pipeta s pozitivnim pomakom najbolji je izbor za pipetiranje opasnih tekućina i svih tekućina povišene viskoznosti ili hlapljivosti.

Kako temperatura tekućina utječe na pipetiranje?

Vrlo hladne ili vruće tekućine mijenjaju tlak zraka u pipetama za istiskivanje zraka, što dovodi do netočnog pipetiranja. 

Na pipete s pozitivnim pomakom, s vrhovima u obliku štrcaljke koji nemaju zračni džep između tekućine i klipa, ne utječu različite temperature tekućina. Pipete s pozitivnim pomakom daju točne rezultate s tekućinama koje nisu sobne temperature.

Ako morate pipetirati vrlo vruću ili hladnu tekućinu pipetom za istiskivanje zraka, nemojte prethodno ispirati vrh pipete – to je obično najbolja praksa za najveću točnost. Umjesto toga, brzo usisavajte i dozirajte kako biste smanjili učinak temperature tekućine na unutarnji zračni razmak pipete.

Kako izbjeći mjehuriće prilikom pipetiranja?

Kako biste izbjegli mjehuriće i pjenjenje tijekom pipetiranja, nemojte uranjati vrh više od 10 mm u spremnik za tekućinu i polako usisavajte.

Obrnuto pipetiranje nudi dodatnu zaštitu jer prije usisavanja do kraja pritisnete klip do 2. graničnika, tako da nema šanse za ubrizgavanje zraka u tekući uzorak. Za više informacija o obrnutom pipetiranju posjetite ovu stranicu

Pipeta s pozitivnim pomakom ne stvara mjehuriće ili pjenu u interakciji s tekućinom jer njezin vrh u obliku štrcaljke ne predstavlja zrak s kojim tekućina može stupiti u interakciju.

Koji je najbolji način za dekontaminaciju pipete?

Dekontaminirajte pipetu brisanjem mokrom krpom i deterdžentom poput izopropanola ili 10% otopine izbjeljivača. Izbjegavajte prozirni plastični prozor mikrometra.

Autoklaviranje može biti još jedna opcija, ali provjerite specifikacije instrumenta pipete. Ako se može autoklavirati, je li cijeli instrument autoklaviran ili samo tekući kraj?  Često se može autoklavirati samo tekući kraj.

Za više informacija o čišćenju pipete nabavite plakat Čišćenje pipete A .

Kako mogu kalibrirati pipetu?

Umjeravanje je kontrolirano i dokumentirano mjerenje stope sustavne pogreške pipete (točnost) i stope slučajne pogreške (preciznosti). U mnogim laboratorijskim okruženjima učinkovitost pipeta mora se redovito ispitivati i dokumentirati zakonom pod posebnim uvjetima koje je certificiralo akreditirano tijelo. 

Davatelji usluga s ISO certifikatom kalibriraju pipete u kontroliranom okruženju. Rezultati su sigurno dokumentirani na potvrdi o kalibraciji, dodajući povijest performansi spremnu za reviziju za svaki instrument. Kada su potrebne prilagodbe, ISO certificirani laboratoriji za umjeravanje pružaju stručnu uslugu dijelovima i mazivima koje preporučuje proizvođač.

Rainin i METTLER TOLEDO najveća su svjetska tvrtka za servisiranje pipeta s brzim mogućnostima slanja poštom i servisa na licu mjesta. Servisni laboratoriji imaju certifikat ISO 17025, a postupci slijede ažuriranje ISO 8655 iz 2022. 

Kako mogu izračunati točnost i preciznost pipete?

Točnost pipeta - ili istinitost, kako se sada naziva - razlika je između srednjeg volumena svih mjerenja (4-10 mjerenja) i zadanog volumena. 

Preciznost je standardna devijacija svih izvršenih mjerenja. Koliko su udaljeni od svakog čitanja?

Kako izračunati nesigurnost pipete?

Nesigurnost pipete kvantitativni je izraz za njezinu ukupnu točnost. To je kombinacija istinitosti (mjera sustavne pogreške) i preciznosti (mjera slučajne pogreške). 

Jednadžba za neizvjesnost je: 

Nesigurnost = sustavna pogreška + slučajna pogreška * k. k (faktor pokrivenosti ili Z-rezultat) ovisi o broju mjerenja. k=3,31 za četiri mjerenja i 2 za deset mjerenja.

Koji je najbolji način za pohranu pipete?

Pipete čuvajte okomito, obješene s police ili stalka za pipete. Pipete održavajte čistima i bez kontaminanata. Držite police za nastavke za pipete zatvorene.