Boas Práticas de Pipetagem: Melhores Resultados através de Treinamento e Suporte

A maioria das aplicações de ciências biológicas inclui etapas críticas de manuseio de líquidos, onde o volume pipetado influencia diretamente o resultado. Se a pipetagem não for consistente e precisa, tempo, dinheiro e material podem ser desperdiçados. A pipetagem precisa forma a base do trabalho reprodutível, que é essencial para gerar dados significativos.

O primeiro passo para melhorar a precisão da pipetagem é escolher o tipo certo de pipeta e a faixa de volume adequada. Para tamanho, escolha a pipeta de menor volume que acomodará o volume que você está pipetando. Por exemplo, se você estiver pipetando 2 μL e tiver uma pipeta de 5 μL e uma pipeta de 20 μL, você obterá melhor precisão usando os 5 μL. 

Confira este informativo técnico sobre seleção de pipetas para entender qual pipeta funciona melhor para o líquido e outros fatores exclusivos da sua situação: Selecionando a pipeta certa

Depois de ter o instrumento certo, coloque em prática sua boa técnica de pipetagem. Configure um cronograma de testes de rotina para maximizar a confiança em seus resultados ao longo do tempo e, como em qualquer instrumento de precisão, certifique-se de instituir um serviço regular e especializado e um regime de calibração.

A maneira mais fácil de testar rapidamente a precisão de uma pipeta pode ser o Rainin SmartCheck. Saiba mais em mt.com/SmartCheck 

Escolher a pipeta certa envolve avaliar suas necessidades. Primeiro, que tipo de amostras você está pipetando? São aquosos? Ou são viscosos, voláteis, espumantes, corrosivos ou perigosos? Para líquidos aquosos e quase aquosos, as pipetas de deslocamento de ar mais comuns (também chamadas de pipetas de "almofada de ar") são uma boa escolha. Para tipos de líquidos viscosos, voláteis e outros tipos de líquidos incomuns, uma pipeta de deslocamento positivo seria uma escolha melhor para precisão e segurança. 

Que volume você vai pipetar? Quantas amostras você precisa transferir de um navio para outro? Confira este informativo técnico sobre seleção de pipetas para entender qual pipeta funciona melhor dependendo do líquido e outros fatores exclusivos da sua situação.

A pipetagem dos menores volumes possíveis envolve instrumentos e técnicas especializadas. Uma pipeta repetidora pode ser sua melhor escolha para distribuir volumes de até 100 nL. Outra pipeta também pode funcionar por apenas alguns dispenses. Certifique-se de usar a pipeta de menor tamanho que acomodará o volume que você deseja pipetar. 

Em volumes muito baixos, a técnica de pipetagem tem um impacto proporcionalmente maior na precisão e reprodutibilidade. A profundidade de imersão, o ângulo de pipetagem e a taxa de aspiração são importantes para o controle. O cartaz Técnicas de Pipetting da Rainin pode ajudar.

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O fator mais importante na pipetagem multicanal precisa e reprodutível é a integridade da vedação para cada canal da pipeta. Isso significa que cada ponta se encaixa perfeitamente em cada eixo com vazamento de ar zero. Diferentes fabricantes conseguem isso de maneiras diferentes, com diferentes níveis de facilidade ergonômica e consistência de vedação. As pontas de pipeta LTS LiteTouch System da Rainin exigem a menor força para carregar e ejetar de vários canais, e elas selam consistentemente todas as vezes.

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Ao aspirar, segure uma pipeta o mais próximo possível da vertical, evitando qualquer ângulo maior que 20° do eixo Y. Ao dispensar, se você estiver tocando na parede do recipiente alvo para puxar totalmente todo o líquido da ponta, não há problema em exceder o ângulo de 20°.

A pipetagem direta é a técnica de pipetagem padrão e a melhor escolha para amostras aquosas. Para amostras viscosas e voláteis, a pipetagem reversa proporciona melhor precisão.

Para avançar a pipeta, empurre o êmbolo para baixo até a primeira parada enquanto mantém a pipeta fora do líquido. Em seguida, mergulhe a ponta de 2 a 10 mm de profundidade no líquido com o qual você está trabalhando – nada mais profundo. Solte o êmbolo lentamente até a extensão total para aspirar todo o volume de líquido. Para dispensar em seu recipiente alvo, mova a pipeta para dentro do vaso e, em seguida, pressione o êmbolo a uma taxa uniforme através da primeira parada até a segunda parada – até onde o êmbolo vai. Com o êmbolo totalmente pressionado, arraste levemente a ponta da pipeta até a parede do vaso para "tocar". Isso ajuda a dispensar completamente todo o volume de líquido. Solte o êmbolo, ejete a ponta da pipeta, carregue uma nova ponta da pipeta e repita.

Para inverter a pipeta, empurre o êmbolo até a primeira parada até a segunda parada – até onde o êmbolo vai. Em seguida, mergulhe a ponta em líquido e solte lenta e uniformemente o êmbolo para aspirar. Mova para o recipiente receptor e pressione o êmbolo SOMENTE ATÉ A PRIMEIRA PARADA para dispensar o volume correto. Um pequeno volume residual permanecerá na ponta da pipeta. Mova a pipeta sobre um recipiente de dispensação de descarte e pressione o êmbolo o resto do caminho até a segunda parada, também chamada de parada de "explosão", para liberar qualquer líquido restante. 

Solte o êmbolo, ejete a ponta da pipeta, carregue uma nova ponta da pipeta e repita.

Uma pipeta de deslocamento de ar pode ser usada para pipetar líquidos levemente viscosos, incluindo sangue. Para obter a máxima precisão, use a técnica de pipetagem reversa descrita acima. Para líquidos mais viscosos, como glicerol 85% ou Triton X-100, uma pipeta de deslocamento positivo oferece a melhor precisão e consistência.

Líquidos levemente voláteis, como o etanol, podem ser pipetados com uma pipeta de deslocamento de ar usando a técnica de pipetagem reversa acima mencionada. No entanto, pipetas de deslocamento positivo são uma melhor escolha para líquidos voláteis. 

Se estiver usando uma pipeta de deslocamento de ar, pré-enxágue a ponta da pipeta (aspirar e dispensar) pelo menos cinco vezes antes de pipetar seu volume. Isso equilibra o ar dentro da pipeta, diminuindo a taxa de evaporação do líquido. A rápida evaporação de líquidos voláteis expande o ar dentro de uma pipeta e força o líquido da ponta sem que nenhuma pressão seja colocada sobre o êmbolo, e isso diminui a entrega precisa do volume.

Líquidos voláteis como acetonitrila são geralmente melhor manuseados com uma pipeta de deslocamento positivo.

Sim, pipetar com pipetas de deslocamento de ar pode criar aerossóis. Os aerossóis podem subir para o interior da pipeta e contaminar as paredes internas e o pistão. A aerossolização ocorre mais prontamente quando o êmbolo é liberado muito rapidamente durante a aspiração e também pode ocorrer na direção oposta fora da pipeta com dispensação excessivamente rápida. 

Para minimizar os aerossóis, aspirar e dispensar lenta e uniformemente. Use dicas filtradas. 

As pipetas de deslocamento positivo usam pontas estilo seringa que impedem a aerossolização. Uma pipeta de deslocamento positivo é a melhor escolha para pipetar líquidos perigosos e qualquer líquido de viscosidade ou volatilidade elevadas.

Líquidos muito frios ou quentes alteram a pressão do ar dentro das pipetas de deslocamento de ar, levando a pipetagem imprecisa. 

As pipetas de deslocamento positivo, com pontas tipo seringa que não têm bolsa de ar entre o líquido e o pistão, não são afetadas por diferentes temperaturas dos líquidos. As pipetas de deslocamento positivo fornecerão resultados precisos com líquidos que não sejam à temperatura ambiente.

Se você precisar pipetar um líquido muito quente ou frio com uma pipeta de deslocamento de ar, não enxágue previamente a ponta da pipeta — essa é normalmente a prática recomendada para a maior precisão. Em vez disso, aspirar e dispensar rapidamente para minimizar o efeito da temperatura do líquido no espaço de ar interior da pipeta.

Para evitar bolhas e formação de espuma ao pipetar, não mergulhe a ponta mais de 10mm no reservatório de líquido e aspirar lentamente.

A pipetagem reversa oferece proteção adicional porque, antes de aspirar, você pressiona totalmente o êmbolo até a 2ª parada, portanto, não há chance de injetar ar na amostra líquida. Para saber mais sobre pipetagem reversa, visite esta página. 

Uma pipeta de deslocamento positivo não cria bolhas ou espuma ao interagir com o líquido porque sua ponta em estilo seringa não apresenta ar para o líquido interagir.

Descontamine uma pipeta limpando-a com um pano molhado e um detergente como isopropanol ou uma solução de água sanitária a 10%. Evite a janela de plástico transparente do micrômetro.

A autoclavagem pode ser outra opção, mas verifique as especificações do instrumento da sua pipeta. Se for autoclavável, todo o instrumento é autoclavado ou apenas a extremidade líquida?  Muitas vezes, apenas a extremidade líquida pode ser autoclavada.

Para saber mais sobre como limpar uma pipeta, obtenha o pôster Cleaning A Pipeta .

A calibração é a medição controlada e documentada da taxa de erro sistemático (precisão) e da taxa de erro aleatório (precisão) de uma pipeta. Em muitos ambientes de laboratório, o desempenho da pipeta deve ser regularmente testado e documentado por lei sob condições específicas certificadas por um organismo acreditado. 

Fornecedores certificados pela ISO calibram pipetas em um ambiente controlado. Os resultados são documentados com segurança em um certificado de calibração, adicionando a um histórico de desempenho pronto para auditoria para cada instrumento. Quando ajustes são necessários, os laboratórios de calibração com certificação ISO fornecem serviço especializado com peças e lubrificantes recomendados pelo fabricante. 

A Rainin e a METTLER TOLEDO são a maior organização de serviços de pipetas do mundo, com rápido retorno das opções de serviço por correspondência e no local. Os laboratórios de serviço são certificados pela ISO 17025 e os procedimentos seguem a atualização de 2022 da ISO 8655. 

A precisão da pipeta — ou veracidade, como é chamada agora — é a diferença entre o volume médio de todas as medições (4-10 medições) e o volume definido. 

A precisão é o desvio padrão de todas as medidas realizadas. Quão distantes de cada leitura estão as outras?

A incerteza de uma pipeta é o termo quantitativo para sua precisão geral. É uma combinação de veracidade (uma medida de erro sistemático) e precisão (uma medida de erro aleatório). 

A equação para a incerteza é: 

Incerteza = Erro Sistemático + Erro Aleatório * k. k (fator de cobertura ou Z-score) depende do número de medições. k=3,31 para quatro medidas e 2 para dez medidas.

Armazene pipetas verticalmente, penduradas em uma prateleira ou suporte de pipeta. Mantenha as pipetas limpas e livres de contaminantes. Mantenha as prateleiras da ponta da pipeta fechadas.