Boas Práticas de Pipetagem: Melhores Resultados através de Treinamento e Suporte

A maioria das aplicações de ciências biológicas inclui etapas críticas de manuseio de líquidos em que o volume pipetado influencia diretamente o resultado. Se a pipetagem não for consistente e precisa, tempo, dinheiro e material podem ser desperdiçados. A pipetagem precisa forma a base do trabalho reprodutível, o que é essencial para gerar dados significativos.

O primeiro passo para melhorar a precisão da pipetagem é escolher o tipo certo de pipeta e a faixa de volume adequada. Para o tamanho, escolha a pipeta de menor volume que acomodará o volume que você está pipetando. Por exemplo, se você estiver pipetando 2 μL e tiver uma pipeta de 5 μL e uma pipeta de 20 μL, obterá melhor precisão usando os 5 μL. 

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Depois de ter o instrumento certo, coloque em prática sua boa técnica de pipetagem. Configure um cronograma de testes de rotina para maximizar a confiança em seus resultados ao longo do tempo e, como acontece com qualquer instrumento de precisão, certifique-se de instituir um serviço regular e especializado e um regime de calibração.

A maneira mais fácil de testar rapidamente a precisão de uma pipeta pode ser o Rainin SmartCheck. Saiba mais em mt.com/SmartCheck 

Escolher a pipeta certa envolve avaliar suas necessidades. Primeiro, que tipo de amostras você está pipetando? Eles são aquosos? Ou são viscosos, voláteis, espumantes, corrosivos ou perigosos? Para líquidos aquosos e quase aquosos, as pipetas de deslocamento de ar mais comuns (também chamadas de pipetas de "almofada de ar") são uma boa escolha. Para tipos de líquidos viscosos, voláteis e outros tipos de líquidos incomuns, uma pipeta de deslocamento positivo seria a melhor escolha para precisão e segurança. 

Qual volume você vai pipetar? Quantas amostras você precisa transferir de um vaso para outro? Confira este white paper sobre seleção de pipetas para entender qual pipeta funciona melhor, dependendo do líquido e de outros fatores exclusivos da sua situação.

A pipetagem dos menores volumes possíveis envolve instrumentos e técnicas especializadas. Uma pipeta repetidora pode ser sua melhor escolha para volumes de dispensação repetida de até 100 nL. Outra pipeta também pode funcionar para apenas algumas dispensações. Certifique-se de usar a pipeta de menor tamanho que acomode o volume que você deseja pipetar. 

Em volumes muito baixos, a técnica de pipetagem tem um impacto proporcionalmente maior na precisão e reprodutibilidade. A profundidade de imersão, o ângulo de pipetagem e a taxa de aspiração são importantes para controlar. O pôster de Técnicas de Pipetagem da Rainin pode ajudar.

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O fator mais importante na pipetagem multicanal precisa e reprodutível é a integridade da vedação para cada canal da pipeta. Isso significa que cada ponta se encaixa perfeitamente em cada eixo com vazamento de ar zero. Diferentes fabricantes conseguem isso de maneiras diferentes, com diferentes níveis de facilidade ergonômica e consistência de vedação. As ponteiras de pipeta LTS LiteTouch System da Rainin exigem o mínimo de força para carregar e ejetar do multicanal e vedam sempre de forma consistente.

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Ao aspirar, segure uma pipeta o mais próximo possível da vertical, evitando qualquer ângulo maior que 20° em relação ao eixo Y. Ao dispensar, se você estiver tocando na parede do recipiente alvo para puxar totalmente todo o líquido da ponta, não há problema em exceder o ângulo de 20°.

A pipetagem direta é a técnica de pipetagem padrão e a melhor escolha para amostras aquosas. Para amostras viscosas e voláteis, a pipetagem reversa oferece melhor precisão.

Para avançar a pipeta, empurre o êmbolo para baixo até o primeiro batente, enquanto segura a pipeta fora do líquido. Em seguida, mergulhe a ponta de 2 a 10 mm de profundidade no líquido com o qual você está trabalhando – não mais fundo. Solte o êmbolo lentamente até a extensão total para aspirar o volume total do líquido. Para dispensar em seu recipiente alvo, mova a pipeta para dentro do recipiente e, em seguida, pressione o êmbolo a uma taxa uniforme através da primeira parada até a segunda parada - até o êmbolo ir. Com o êmbolo totalmente pressionado, arraste levemente a ponta da pipeta pela parede do recipiente para "tocar". Isso ajuda a dispensar completamente todo o volume de líquido. Solte o êmbolo, ejete a ponta da pipeta, carregue uma nova ponta da pipeta e repita.

Para inverter a pipeta, empurre o êmbolo totalmente para baixo através da primeira parada até a segunda parada – até onde o êmbolo vai. Em seguida, mergulhe a ponta no líquido e solte lenta e uniformemente o êmbolo para aspirar. Mova para o recipiente receptor e pressione o êmbolo SOMENTE ATÉ A PRIMEIRA PARADA para dispensar o volume correto. Um pequeno volume residual permanecerá na ponta da pipeta. Mova a pipeta sobre um recipiente de descarte e distribuição e pressione o êmbolo até o segundo batente, também chamado de batente de "explosão", para liberar qualquer líquido restante. 

Solte o êmbolo, ejete a ponta da pipeta, carregue uma nova ponta da pipeta e repita.

Uma pipeta de deslocamento de ar pode ser usada para pipetar líquidos levemente viscosos, incluindo sangue. Para obter a máxima precisão, use a técnica de pipetagem reversa descrita acima. Para líquidos mais viscosos, como glicerol a 85% ou Triton X-100, uma pipeta de deslocamento positivo oferece a melhor precisão e consistência.

Líquidos ligeiramente voláteis, como o etanol, podem ser pipetados com uma pipeta de deslocamento de ar usando a técnica de pipetagem reversa mencionada acima. No entanto, as pipetas de deslocamento positivo são a melhor escolha para líquidos voláteis. 

Se estiver usando uma pipeta de deslocamento de ar, pré-enxágue a ponta da pipeta (aspire e dispense) pelo menos cinco vezes antes de pipetar o volume. Isso equilibra o ar dentro da pipeta, diminuindo a taxa de evaporação do líquido. A evaporação rápida de líquidos voláteis expande o ar dentro de uma pipeta e força o líquido da ponta sem que nenhuma pressão seja colocada no êmbolo, e isso diminui a entrega precisa do volume.

Líquidos voláteis, como acetonitrila, geralmente são melhor manuseados com uma pipeta de deslocamento positivo.

Sim, a pipetagem com pipetas de deslocamento de ar pode criar aerossóis. Os aerossóis podem subir para o interior da pipeta e contaminar as paredes internas e o pistão. A aerossolização ocorre mais prontamente quando o êmbolo é liberado muito rapidamente durante a aspiração e também pode ocorrer na direção oposta fora da pipeta com dispensação excessivamente rápida. 

Para minimizar os aerossóis, aspire e dispense lenta e uniformemente. Use dicas filtradas. 

As pipetas de deslocamento positivo usam pontas do tipo seringa que evitam a aerossolização. Uma pipeta de deslocamento positivo é a melhor escolha para pipetar líquidos perigosos e qualquer líquido de viscosidade ou volatilidade elevada.

Líquidos muito frios ou quentes alteram a pressão do ar dentro das pipetas de deslocamento de ar, levando a uma pipetagem imprecisa. 

As pipetas de deslocamento positivo, com pontas tipo seringa que não têm bolsa de ar entre o líquido e o pistão, não são afetadas por diferentes temperaturas dos líquidos. As pipetas de deslocamento positivo fornecerão resultados precisos com líquidos que não sejam à temperatura ambiente.

Se você precisar pipetar um líquido muito quente ou frio com uma pipeta de deslocamento de ar, não enxágue previamente a ponta da pipeta - essa é normalmente a prática recomendada para a mais alta precisão. Em vez disso, aspire e dispense rapidamente para minimizar o efeito da temperatura do líquido no entreferro interno da pipeta.

Para evitar bolhas e formação de espuma ao pipetar, não mergulhe a ponta mais de 10 mm no reservatório de líquido e aspire lentamente.

A pipetagem reversa oferece proteção adicional porque, antes de aspirar, você pressiona totalmente o êmbolo até a 2ª parada, para que não haja chance de injetar ar na amostra líquida. Para saber mais sobre pipetagem reversa, visite esta página. 

Uma pipeta de deslocamento positivo não cria bolhas ou espuma ao interagir com o líquido porque sua ponta tipo seringa não apresenta ar para o líquido interagir.

Descontamine uma pipeta limpando-a com um pano úmido e um detergente como isopropanol ou uma solução de alvejante a 10%. Evite a janela de plástico transparente do micrômetro.

A autoclavagem pode ser outra opção, mas verifique as especificações do instrumento da sua pipeta. Se for autoclavável, todo o instrumento é autoclavado ou apenas a extremidade líquida?  Muitas vezes, apenas a extremidade líquida pode ser autoclavada.

Para obter mais informações sobre como limpar uma pipeta, obtenha o pôster Limpando uma pipeta .

A calibração é a medição controlada e documentada da taxa de erro sistemático (exatidão) e da taxa de erro aleatório (precisão) de uma pipeta. Em muitos ambientes de laboratório, o desempenho da pipeta deve ser testado regularmente e documentado por lei sob condições específicas certificadas por um organismo credenciado. 

Os fornecedores com certificação ISO calibram pipetas em um ambiente controlado. Os resultados são documentados com segurança em um certificado de calibração, adicionando a um histórico de desempenho pronto para auditoria para cada instrumento. Quando os ajustes são necessários, os laboratórios de calibração com certificação ISO fornecem serviços especializados com peças e lubrificantes recomendados pelo fabricante. 

A Rainin e a METTLER TOLEDO são a maior organização de serviços de pipetas do mundo, com retorno rápido das opções de serviço por correio e no local. Os laboratórios de serviço são certificados pela ISO 17025 e os procedimentos seguem a atualização de 2022 da ISO 8655. 

A precisão da pipeta - ou veracidade, como é chamada agora - é a diferença entre o volume médio de todas as medições (4-10 medições) e o volume definido. 

A precisão é o desvio padrão de todas as medições realizadas. A que distância de cada leitura estão as outras?

A incerteza de uma pipeta é o termo quantitativo para sua precisão geral. É uma combinação de veracidade (uma medida de erro sistemático) e precisão (uma medida de erro aleatório). 

A equação para a incerteza é: 

Incerteza = Erro Sistemático + Erro Aleatório * k. k (fator de cobertura ou escore Z) depende do número de medições. k=3,31 para quatro medidas e 2 para dez medidas.

Armazene as pipetas verticalmente, penduradas em uma prateleira ou suporte de pipeta. Mantenha as pipetas limpas e livres de contaminantes. Mantenha os suportes de ponteiras de pipeta fechados.